Encyclopedia of Experiments: Biology
JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Til å begynne med, plasser fem larver i hver kjørefelt på en seksfelts agaroseplate. Legg til ekstra eggvann, men ikke fyll banene for mye. Eggvann inneholder metylenblått, noe som forhindrer muggvekst. La larvene akklimatisere seg i minst 10 minutter for å redusere stresset.
Plasser nå brønnplaten i et bildekammer over en bærbar skjerm. Fokuser kameraet på brønnplaten. Fyll banen helt med eggvann.
Deretter registrerer du larvenes oppførsel plassert på den tomme bakgrunnen ved å ta tidsforløpbilder. Vis en bevegelig rød stolpe på den bærbare skjermen, og ta tidsforløpbilder av larver som svar på den bevegelige røde linjen.
Den røde formen oppfattes som en trussel, en aversiv stimulans, og forårsaker larvenes stress. Som svar unngår de baren og demonstrerer positiv thigmotaxis. Positiv thigmotaxis er fiskens respons på stimulansen som søker kontakt med veggen og svømmer i utkanten av banen.
I eksempelprotokollen vil vi analysere unngåelse og tigmotaktiske responser av sebrafisk larver behandlet med farmasøytiske forbindelser eller miljøgifter.
- For å begynne bildefangst, flytt forsiktig larver fra Petri-parabolen til agarosebanen for å redusere larver stress. Opptil 20 larver kan plasseres i hvert kjørefelt, men fem larver per bane brukes vanligvis til å lette den mest nøyaktige sporingen av svømmehastighet og for å redusere antall larver som trengs per eksperiment.
Fyll banene med eggvann med eller uten legemidler eller giftstoffer avhengig av eksperimentet. Ikke fyll opp banene hele veien før de er plassert i bildeskapene for å forhindre overløp. La larvene få 10 minutter til å akklimatisere seg. Etter akklimatiseringsperioden, plasser fire plater for hånd direkte på toppen av den bærbare skjermen.
På dette tidspunktet kan banene toppes med eggvann eller kjemisk behandling slik at det er nivå med toppen av banen, for å eliminere skygger på kantene av banene på bildene.
Programmer datamaskinen for fotografering med tidsforløp, ta bilder hvert sjette sekund i totalt 300 bilder per eksperiment. Still inn kameraet med en lavere oppløsning for bildebehandling med videohastighet. Mens den lavere oppløsningen begrenser opptakene til en enkelt multibrønnplate, er videoopptakene egnet for avbildning av raske svømmehendelser.
Bruk en PowerPoint-presentasjon som en aversiv stimulans for larvene. I denne demonstrasjonen starter PowerPoint med en tom hvit bakgrunn i 15 minutter, etterfulgt av 15 minutter med en bevegelig rød stolpe på den øverste halvdelen av platen. For å unngå fordampning av væsken innenfor de agarose banene, hold maksimal bildetid til under en time.
