Encyclopedia of Experiments: Biology
JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Для начала поместите по пять личинок в каждую полосу шестиполосной агарозной пластины. Добавьте дополнительную яичную воду, но не переполняйте полосы. Яичная вода содержит метиленовый синий, который предотвращает рост плесени.
Теперь поместите пластину в камеру визуализации над экраном ноутбука.
Далее, записывают поведение личинок, размещенных на пустом фоне, принимая промежуток времени изображения. Отображение движущихся красный бар на экране ноутбука, и принять промежуток времени изображения личинок в ответ на движущихся красный бар.
Красная форма воспринимается как угроза, обратный стимул, и вызывает стресс личинок. В ответ, они избегают бар и демонстрируют положительные thigmotaxis. Положительный thigmotaxis является ответом рыбы на стимул ищет контакт со стеной и плавание на краю переулка.
В примере протокола мы проанализируем избегание и тигмотактическую реакцию личинок зебры, обработанных фармацевтическими соединениями или токсинами окружающей среды.
- Чтобы начать захват изображения, осторожно переместите личинки из чашки Петри в переулок агарозы, чтобы помочь уменьшить стресс личинок. До 20 личинок могут быть размещены в каждой полосе, но пять личинок на полосу, как правило, используются для облегчения наиболее точного отслеживания скорости плавания и уменьшить количество личинок, которые необходимы для эксперимента.
Заполните полосы с яичной водой с или без фармацевтических препаратов или токсикантов в зависимости от эксперимента. Не заполняйте полосы полностью, пока они не помещаются в шкафы для визуализации, чтобы предотвратить переполнение. Разрешить 10 минут для личинок акклиматизироваться. После периода акклиматизации, положение четыре пластины вручную непосредственно на верхней части экрана ноутбука.
В это время, полосы могут быть увенчаны с яичной водой или химической обработки, так что это уровень с верхней части полосы, для устранения теней по краям полос на изображениях.
Программируйте компьютер для фотографии промежуток времени, фотографируя каждые шесть секунд в общей сложности 300 изображений за эксперимент. Установите камеру в более низком разрешении для визуализации на скорости видео. В то время как нижнее разрешение ограничивает записи одной пластиной с мульти-колодец, видеозаписи подходят для визуализации событий быстрого плавания.
Используйте презентацию PowerPoint в качестве аверсивного стимула для личинок. В этой демонстрации PowerPoint начинается с пустого белого фона в течение 15 минут, а затем 15 минут движущихся красных баров на верхней половине пластины.
