ゼブラフィッシュ回避とチモタキシスアッセイ:回避的視覚刺激に応答して幼虫の挙動を調べるハイスループット法

- まず、6車線のアガロースプレートの各車線に5匹の幼虫を置く。卵水を追加して、レーンをオーバーフィルしないでください。卵水にはカビの成長を妨げるメチレンブルーが含まれています。

さて、ラップトップのスクリーンの上に画像チャンバーに井戸板を置きます。井戸の上にカメラを置きます。

次に、タイムラプス画像を撮って空白の背景に置かれた幼虫の挙動を記録してください。

赤い形は脅威、回避刺激として認識され、幼虫のストレスを引き起こす。応答して、彼らはバーを避け、正の結膜を示す。正の胸膜は壁との接触を求め、車線の端で泳ぐ刺激に対する魚の反応である。

このプロトコル例では、医薬品化合物または環境毒素で処理されたゼブラフィッシュ幼虫の回避反応と薄膜戦術応答を分析する。

- 画像キャプチャを開始するには、幼虫のストレスを軽減するためにペトリ皿からアガロースレーンに幼虫を慎重に移動します。各車線に最大20匹の幼虫を配置できますが、通常、1車線あたり5匹の幼虫を使用して、泳ぐ速度の最も正確な追跡を容易にし、実験ごとに必要な幼虫の数を減らすために使用されます。

実験に応じて、医薬品や毒性物質の有無にかかわらず卵水で車線を満たす。オーバーフローを防ぐために画像キャビネットに入れるまで車線を満たさないでください。

この時点で、車線は、画像の車線の端に影を排除するために、車線の上部と同じレベルになるように、卵水や化学処理でトッピングすることができます。

タイムラプス撮影のためにコンピュータをプログラムし、実験ごとに合計300枚の画像を6秒ごとに撮影します。ビデオ速度でのイメージングのためにカメラを低解像度に設定します。

幼虫の回避的な刺激としてPowerPointのプレゼンテーションを使用してください。このデモンストレーションでは、PowerPointは15分間白い背景で始まり、プレートの上半分に赤いバーが15分続きます。