창자 허혈 - 재관류 손상의 쥐 모델

이 절차의 전반적인 목표는 상장간막 동맥의 말초 및 말단 측부 가지를 일시적으로 폐색하여 마우스디스탈릴리움 영역에서 재현 가능한 장 허혈 재관류 유도 손상을 수행하는 것입니다. 이 방법은 슬개골 손상 및 재생의 메커니즘을 이해하는 것과 같은 위장병학 및 면역학 분야의 기본 방법을 이해하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 장점은 실험실에서 교육을 받은 개인이 수행할 수 있다는 것입니다.

또 다른 장점은 시술 자체가 생쥐에게 폐사를 일으키지 않는다는 것이다. 텍스트 프로토콜에 지정된 대로 수술 부위를 준비합니다. 다음으로, 수술용 가위를 사용하여 3-5개의 정중선 센티미터 개복술을 만듭니다.

그런 다음 식염수를 적신 멸균된 비접착성 패드로 수술 부위를 덮습니다. 맹장과 장골을 분리하고 식염수에 적신 면봉을 사용하여 상장간막 동맥을 노출시킵니다. 그런 다음 클립 적용을 용이하게 하기 위해 스트레스 집게를 사용하여 장을 부드럽게 들어 올리고 홍채 가위를 찾아 원하는 잘린 위치에서 상장간막 동맥 양쪽의 mesentary를 절단합니다.

장을 올린 자세로 잡고 다른 손으로 클립 애플라이어를 부드럽게 짜서 고품질 70 G-Force 미세혈관 클립의 턱을 엽니다. 그런 다음 클립을 용기에 놓고 턱을 부드럽게 풀어 용기를 막습니다. 같은 방식으로 1-2개의 미세혈관 클립을 더 배치하고, 상장간막동맥의 1차 가지를 폐색하여 맹장에 인접한 허혈성 장골의 5-7cm 영역이 생성될 때까지 배치합니다.

이제 장을 가로질러 두 개의 40 G-Force 미세혈관 클립을 삽입하여 측부 혈류를 차단하고 허혈성 장 부위를 표시합니다. 모든 클립이 제자리에 고정되면 섭씨 37도의 식염수를 적신 멸균되고 섬세한 물티슈를 수술 부위에 바르고 면밀한 모니터링으로 허혈을 60분 동안 유지합니다. 허혈 절차가 올바르게 수행되면 약 30분 내에 해당 부위가 와인 레드로 변하고 클립 위치 원위부의 혈관이 확장되어 성공적인 폐색을 나타냅니다.

허혈이 끝나면 허혈성 부위의 가장자리를 10마이크로리터의 Gill's Hematoxylin으로 표시하여 허혈성 및 인접한 건강한 조직의 수확을 용이하게 합니다. 허혈이 끝나면 클립 영역에 식염수 몇 방울을 떨어뜨리고 클립 어플리어로 미세혈관 클립을 부드럽게 제거합니다. 그런 다음 식염수에 적신 면 팁을 사용하여 장을 복강 안으로 부드럽게 밀어 넣습니다.

비접착성 패드를 제거하고 9mm 스테인리스 스틸 상처 클립을 사용하여 복벽과 피부를 닫습니다. 원하는 재관류 기간 동안 동물을 가열되고 깨끗한 우리에 유지하고 30분마다 쥐를 점검하여 안정성을 확인합니다. 재관류가 끝나면 마우스를 안락사시키고 복강을 열고 허혈성 및 인접한 건강한 정상 조직을 수확합니다.

그런 다음 식염수를 채운 간침이 장착된 30ml 주사기를 사용하여 장 내용물을 씻어낸 후 장을 세로로 자릅니다. 유전자 발현 분석을 위해 장 샘플이 필요한 경우 1점 5-2mm 세로 단편을 예약합니다. 조직학적 분석을 위해 한 쌍의 집게를 사용하여 장을 스위스 롤로 굴리고 인텐시브 Between 바이옵시 폼 패드 조각을 카세트에 넣습니다.

마지막으로, 허혈성 및 건강한 장 조직을 고정하기 위해 10% 완충된 포르말린에 카세트를 넣습니다. 여기서, 대조군으로부터 제조된 스위스 롤을 포함하는 대표적인 조직 카세트와 허혈 1시간의 허혈 및 1시간의 재관류 후 장골의 허혈 영역이 도시되어 있습니다. 대조군 조직과 허혈성 조직 사이의 색상 차이에 주목하십시오.

비장 조각도 포함하여 처리 및 염색 중 제어 및 허혈 재관류 장의 위치를 용이하게 했습니다. 이 이미지에서는 대조군의 대표적인 헤마톡실린 및 에오신 염색과 허혈 1시간 후 또는 허혈 1시간 후 2시간의 재관류 후 장골의 허혈성 영역이 표시됩니다. 허혈 1시간 후 관찰된 상피의 심각한 손상은 출혈성 VILI, 크립스의 부분적 또는 완전한 절제를 동반한 상피 탈질, 면역 세포 침투를 특징으로 합니다.

2시간 재관류 후에도 VILI 손상과 염증은 지속되지만 조직 출혈은 없습니다. 허혈성 및 대조군 장에서 허혈 재관류 후 1시간 및 2시간 후 염증성 시니카 발현을 분석한 결과, TNF 알파, IL 1 베타, IL 6 시다신의 상향 조절뿐만 아니라 대조군 건강한 조직과 비교하여 허혈 재관류 조건 모두에서 Cxcl 2 chemokine mRNA 발현의 증가를 입증했습니다. 이 기술을 마스터하면 3시간 30분 안에 완료할 수 있으며 제대로 수행할 수 있습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 재현 가능한 장 허혈 재관류 손상을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.