Neurale inductie is de eerste stap in de vorming van de hersenen. Het is een mechanisme waarmee Hensen's node (organisator), instrueert aangrenzend weefsel aan te nemen een neurale lot, dat wil zeggen om aanleiding te geven aan het zenuwstelsel. Deze video toont een test voor neurale inductie bij kippenembryo.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Test voor Neurale Inductie in het kippenembryo
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Het kuiken embryo is een waardevol instrument in de studie van de vroege embryonale ontwikkeling. De transparantie, toegankelijkheid en het gemak van manipulatie, maken het een ideale tool voor het bestuderen van de vorming en de eerste patroonvorming van het zenuwstelsel. Deze video laat zien hoe om te enten organisator weefsel in een gastheer, een methode waarmee Hensen s node (de organisator in het kippenembryo) is geënt op een host bevoegde ectoderm. De organisator transplantaat instrueert bovenliggende na weefsel hebben om een lot te nemen via neuraal neurale inducerende signalen. Dit mechanisme wordt aangeduid als neurale inductie, en vormt de eerste stap in de vorming van de hersenen en het ruggenmerg in amnioten. Deze methode wordt hoofdzakelijk gebruikt voor het karakteriseren van vermeende neurale induceren van moleculen in chick. Deze video toont de verschillende stappen in de test voor neurale inductie, Ten eerste is de donnor embryo is geëxplanteerd en gespeld op een schotel. Dan is de gastheer embryo voorbereid op nieuwe cultuur. De ent is uitgesneden en getransplanteerd naar de host gebied pellucida marge. De gastheer is gekweekt voor 18-22 uur. De montage is vast en verwerkt voor verdere toepassingen (zoals in situ hybridisatie). Deze methode is oorspronkelijk bedacht door Waddington
Protocol
I. Schematisch overzicht:
Deze video toont de verschillende stappen in de test voor het neurale inductie bij kippenembryo. Ten eerste is de gastheer embryo geëxplanteerd in New cultuur [NI1]. Dan is de donnor embryo is geëxplanteerd in een zoutoplossing en Hensen's knooppunt (de "organisator" in het kuiken) is voorzien van fluorescerende kleurstof Dii [NI2]. Hensen De knoop is uitgesneden uit de donnor embryo [NI3] en getransplanteerd naar de host embryo [NI4, NI5]. ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Deze video toont de verschillende stappen bij het uitvoeren van een test voor neurale inductie, Deze test wordt hoofdzakelijk gebruikt voor het karakteriseren van vermeende neurale induceren van moleculen in chick, en kan dus worden gebruikt voor een breed scala aan toepassingen, variërend van embryologische micromanipulations 1-4; 6 tot en met het ontrafelen van nieuwe signaleringscascades 7,8, alle gericht op het begrip van de eerste stap in de vorming van de hersenen en de resterende zenuwstel.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Dankbetuigingen
DP is ontvanger van Ruth Kirschstein Award 1F32-01A1 DA021977 van het National Institute on Drug Abuse. Dit werk werd ondersteund door de Margaret M. Alkek Stichting RHF.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen | |
|---|---|---|---|---|
| Eieren | Dier | Charles River Laboratories | Premium Vruchtbaar | Bevrucht, HH3+ (14 u) |
| Stereomicroscoop | Microscoop | Leica Microsystems | MZ9.5 of vergelijkbaar | |
| Hybridisatie-incubator | Apparatuur | Robbins Scientific, SciGene | M1000 | Gebruiken met een omgekeerde Pyrex-schaal en 500 ml ddH₂O2Bekerglas |
| Marsh automatische incubator | Apparatuur | Lyon | RX | |
| Pyrex-schaal | ||||
| Horlogemaker’glas 50 mm | Instrument | VWR international | 66112-060 | |
| Glazen ringen | Instrument | Faciliteiten voor fysieke installaties | Snijd glazen buisjes (buitendiameter 27 mm, binnendiameter 25 mm) in secties van 4 mm dik. Voer geen fijne polijsting uit. | |
| Gebogen pincet (1) | Instrument | Elektronenmicroscopiewetenschappen | 72991-4C | |
| Pincetten (2) | Tool | Fine Science Tools | 11002-13 | stompe uiteinden geslepen met een slijpsteen en 100 µl minerale olie |
| Fijne schaar | Instrument | Fine Science Tools | 14161-10 | |
| Plastic schaaltjes | Instrument | Falcon BD | 353001 | |
| Rubberbalg | Instrument | Elektronenmicroscopiewetenschappen | 70980 | |
| DiI | Reagens | Invitrogen | D-282 | |
| Aspiratietubus-assemblage | Instrument | Sigma-Aldrich | A5177-5EA | |
| Micr–elektrodepuller | Apparatuur | Sutter Instrument Co. | Sutter Instruments P-97 Flaming/Brown Micropipet | |
| Pasteur-capillairpipet | Instrument | Elektronenmicroscopie-wetenschappen | 70950-12 | rond de rand af boven de vlam |
| Kweekkamer | Instrument | Pioneer Plastics | 030C | |
| Microcapillaire buis | Instrument | Sigma-Aldrich | P1049-1PAK | |
| Microdissectiemesje | Instrument | Fine Science Tools | 10056-12 | Gebruik om holtes te ponceren voorafgaand aan in situ hybridisatie |
| Minutenpinnen 0,2 mm diam. | Instrument | Fine Science Tools | 26002-20 | Meng 1 deel uithardingsmiddel met 9 delen basis; laat dit een nacht uitharden bij 37°C |
| Diethylpyrocarbonaat (depc) | Reagens | Elektronenmicroscopische wetenschappen | 15710 | |
| Sylgard 184 siliconenelastomeer uithardingsmiddel en basis | Dow Corning | 0001986475 | Meng 1 deel uithardingsmiddel met 9 delen basis; laat dit een nacht (O/N) uitharden bij 37 °C | |
| Diethylpyrocarbonaat (depc) | Acros Organics | 10025025 | Voeg 1 ml DEPC toe aan 1 l PBS; schudden; autoclaveren | |
| 16% PFA | Elektronenmicroscopische wetenschappen | 15710 |
Referenties
- Waddington, C. H. Experiments on the development of chick and duck embryos, cultivated in vitro. Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. 221, 179-230 (1932).
- Waddington, C. H. Induction by the primitive streak and its derivatives in the chick. J. Exp. Biol
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
