Dosage de l'induction neurale dans l'embryon de poulet
Summary
L'induction neurale est la première étape dans la formation du cerveau. C'est un mécanisme par lequel le nœud de Hensen (organisateur), instruit les tissus adjacents à adopter un destin neuronal, c'est à dire de donner naissance au système nerveux. Cette vidéo montre un essai pour l'induction neurale dans l'embryon de poulet.
Abstract
L'embryon de poulet est un outil précieux dans l'étude du développement embryonnaire précoce. Sa transparence, l'accessibilité et la facilité de manipulation, en font un outil idéal pour étudier la formation et la structuration initiale du système nerveux. Cette vidéo montre comment tissu organisateur du greffon dans un hôte, une méthode par laquelle le nœud de Hensen s (l'organisateur de l'embryon de poulet) est greffé à un ectoderme compétente d'accueil. La greffe organisateur instruit recouvrant na avez tissus d'adopter un sort via des signaux neuronaux induisant neurones. Ce mécanisme est appelé l'induction neurale, et constitue la première étape dans la formation du cerveau et la moelle épinière chez les amniotes. Cette méthode est essentiellement utilisée pour la caractérisation des molécules induisant putatifs neurale chez le poulet. Cette vidéo montre les différentes étapes de l'essai pour l'induction neurale; d'abord, l'embryon n'est Donnor explantés et épinglé sur un plat. Ensuite, l'embryon d'accueil est préparé pour une nouvelle culture. Le greffon est excisée et transplanté à la marge d'hôte zone pellucide. L'hôte est cultivée pendant 18 à 22 heures. L'ensemble est fixé et traitées pour d'autres applications (par exemple, hybridation in situ). Cette méthode a été initialement conçu par Waddington<sup> 1,2</sup> Et Gallera<sup> 3,4</sup>.
Protocol
Discussion
Cette vidéo montre les différentes étapes à effectuer un essai pour l'induction neurale; Ce dosage est essentiellement utilisé pour la caractérisation de molécules induisant putatifs neurale chez le poulet, et peut donc être utilisé pour une large variété d'applications, allant de micromanipulations embryologique 1-4; 6 à démêler nouvelles cascades de signalisation 7,8, toutes visant à la compréhension de l'étape initiale de la formation du cerveau et du reste du systè…
Acknowledgements
DP est récipiendaire du Prix Ruth Kirschstein 1F32-01A1 DA021977 du National Institute on Drug Abuse. Ce travail a été soutenu par la Fondation Margaret M. Alkek au RHF.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eggs | Animal | Charles River Laboratories | Premium Fertile | Fertilized, HH3+ (14 hr) |
| Stereomicroscope | Microscope | Leica Microsystems | MZ9.5 or similar | |
| Hybridization Incubator | Equipment | Robbins Scientific | M1000 | Use with inverted Pyrex dish and 500 ml ddH2O beaker |
| Marsh Automatic Incubator | Equipment | Lyon | RX | |
| Pyrex dish | ||||
| Watchmaker’s glass 50mm | Tool | VWR | 66112-060 | |
| Glass rings | Tool | Physical Plant facility | cut 4 mm thick sections of glass tubing (27 mm outer diam, 25 mm inner diam). Do not fine polish. | |
| Curved Forceps (1) | Tool | Electron Microscopy Sciences | 72991-4C | |
| Forceps (2) | Tool | Fine Science Tools | 11002-13 | blunt ended using sharpening Stone and 100ul mineral oil |
| Fine scissors | Tool | Fine Science Tools | 14161-10 | |
| Plastic dishes | Tool | Falcon | 353001 | |
| Rubber Bulb | Tool | Electron Microscopy Sciences | 70980 | |
| DiI | Reagent | Invitrogen | D-282 | |
| Aspirator tube assembly | Tool | Sigma | A5177-5EA | |
| Microelectrode puller | Equipment | Sutter Instruments | Sutter Instruments P-97 Flaming/Brown Micropipette | |
| Pasteur Capillary Pipette | Tool | Electron Microscopy Sciences | 70950-12 | round edge under flame |
| Culture chamber | Tool | Pioneer Plastics | 030C | |
| Microcapillary tube | Tool | Sigma | P1049-1PAK | |
| Microdissecting knife | Tool | Fine Science Tools | 10056-12 | Use to puncture cavities prior to in situ hybridization |
| Minuten pins 0.2mm diam | Tool | Fine Science Tools | 26002-20 | Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C |
| Diethylpyrocarbonate (depc) | Reagent | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
| Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base | Dow Corning | 0001986475 | Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C | |
| Diethylpyrocarbonate (depc) | Acros Organics | 10025025 | Add 1ml depc to 1l PBS; shake; autoclave | |
| 16% PFA | Electron Microscopy Sciences | 15710 |
References
- Waddington, C. H. Experiments on the development of chick and duck embryos, cultivated in vitro. Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. 221, 179-230 (1932).
- Waddington, C. H. Induction by the primitive streak and its derivatives in the chick. J. Exp. Biol. 10, 38-46 (1933).
- Gallera, J. Excision et transplantation des différentes régions de la ligne primitive chez le poulet. C. R. Ass. Anat. 49, 632-639 (1964).
- Gallera, J. Primary induction in birds. Adv. Morph. 9. , 149-180 (1971).
- Serbedzija, G. N., Fraser, S. E., Bronner-Fraser, M. Pathways of neural crest cell migration in the mouse embryo as revealed by vital dye labeling. Development 108. , 605-612 (1990).
- Psychoyos, D., Stern, C. D. Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen’s node and the anterior primitive streak in the chick embryo. Development 122. , 3263-3273 (1996).
- Joubin, K., Stern, C. D. Molecular interactions continuously define the organizer during the cell movements of gastrulation. Cell. 98, 559-571 (1999).
- Streit, A., Berliner, A. J., Papanayotou, C., Sirulnik, A., Stern, C. D. Initiation of neural induction by FGF signaling before gastrulation. Nature. , 406-474 (2000).
- Psychoyos, D., Finnell, R. Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture. JoVE. 20, 10-3791 (2008).
