Aorta-ring-analys

Summary

Angiogenes, är groning av blodkärl från redan existerande kärl, i samband med både naturliga och patologiska processer. Här visar vi en aorta-ring-analys som gör att angiogena potentiators och hämmare vara direkt läggas till aorta ringar i kultur. Groning och neovessel utväxt kan bestämmas genom att kontrollera aorta ringar under en period på 6-12 dagar.

Abstract

Angiogenes, är groning av blodkärl från redan existerande kärl i samband med både naturliga och patologiska processer. Olika angiogenes analyser innebär studiet av enskilda endotelceller i kultur villkor (1). Den aorta ringen-analysen är en angiogenes modell som bygger på orgel kultur. I denna analys, angiogena fartyg växa från ett segment av aorta (modifierad från (2)). Kortfattat, mus aorta exciderad, är fettlager och adventitia bort, och ringar ca 1 mm i längd är beredda. Individuella ringar är så inbäddade i en liten fast kupol av källaren matris extrakt (BME), gjuten inuti enskilda brunnar i en 48-brunnar. Angiogena faktorer och hämmare av angiogenes direkt kan läggas till ringar och en blandad co-kultur av aorta ringar och andra typer av celler kan användas för att studera parakrina angiogena effekter. Groning observeras genom inspektion under ett stereomikroskop under en period på 6-12 dagar. På grund av den stora variationen som orsakas av ojämnheter i aorta segment experiment i 6-plicates rekommenderas starkt. Neovessel utväxt övervakas under hela experimentet och avbildas med fas mikroskopi och supernatanter samlas in för mätning av relevanta angiogena och anti-angiogena, celldöd markörer och nitrit.

Protocol

En dag före försöket: Låt BME (reducerad tillväxtfaktor, Cultrex, Trevigen) att tina på is eller vid 4 ° C, en gång tinas håller på is för att förhindra åter stelnar. Dag av experiment: Möss (6-7 veckor) ska bedövas och avblodas ut. Ta bort aorta i en petriskål fylld med kallt sterilt PBS. Utför mekanisk rensning från omgivande fettvävnad. Observera undvika uttorkning av Aorta när som helst. Med hjälp av en kirurg…

Discussion

Aorta-ring-analysen är ett bra verktyg på vägen att utvärdera angiogena samt anti-angiogena faktorer. Fartygen som växer ut från aorta ringar rekrytera glatta muskelceller och pericyter att associera med endotelceller röret, vilket innebär att de är anatomiskt liknar neovessels in vivo. Dessutom håller musen aorta ringen analys fördelen av den stora förekomsten av transgena verktyg tillgängliga för denna art. Men det finns flera nackdelar med aorta ringen analysen. Först sker fartyg utväxt i…