Summary

Osmotik Kaçınma IN Caenorhabditis elegans: İki Genler Synaptic Fonksiyonu, İnsan Orthologues NRXN1 Ve NLGN1 olarak Adaylar

Published: December 11, 2009
doi:

Summary

Neurexins ve neuroligins sinaptik farklılaşma ve iletiminde önemli rolleri yerine membran nöron yapışma proteinleri. Neuroligin, eksik mutantlar<em> C. elegans</em> Osmotik gücü tespit kusurlu, ama onlar da neurexin kodlayan gendeki bir mutasyon içerdiğinde, onlar vahşi tip fenotip kurtarabilirsiniz.

Abstract

Neurexins ve neuroligins hücre adezyon moleküllerinin eksitatör ve inhibitör sinaps mevcut ve doğru nöron ağ fonksiyonu 1 için gereklidir. Bu proteinler, presinaptik ve postsinaptik membranlar 2 bulunur . Farelerde yapılan çalışmalar, neurexins ve neurologins sinaptik iletim 1 önemli bir role sahip olduğunu göstermektedir. Son raporlar, insan sinir sisteminin gelişimi sırasında değişmiş nöron bağlantıları otizm spektrum bozuklukları (3) çok sayıda vaka etyolojisi temel teşkil edebilir göstermiştir .

Caenorhabditis elegans nedeniyle laboratuar deneyleri için sadeliği, deneysel bir araç olarak çalışma sinaptik bileşenlerinin işleyişini kolaylaştırmak için kullanılır, ve, sinir sistemi ve sinaptik kablolama tam olarak karakterize edilmiştir vermiştir olabilir. C elegans nrx-1 ve NLG-1 genleri sırasıyla alfa-neurexin-1 ve neuroligin-1 protein, kodlamak NRXN1 ve NLGN1 genlerin insan için orthologous. Neuroligins neurexins ve organizasyon, insan ve nematod, fonksiyonel alanlar bakımından benzer.

Nematod başkanı amphid, osmotik gücü dahil olmak üzere farklı uyaranlara verilen yanıtlar aracılık nematod, bir duyu organı içerir. Amphid siliyalı dendrit ve tek bir presinaptik terminal akson 4 ile 12 duyusal bipolar nöronların yapılır. ASHR ve ashl adlı bu nöronlar, iki yüksek osmotik gücü 5 suda çözünür kovucular tespit osmotik duyusal fonksiyon özellikle önemlidir. Bu iki nöron dendritler ağız ucu uzatmak ve davranışsal yanıt 6 belirleyen diğer nöronlarla sinaptik bağlantıları aksonlar sinir halkası kadar uzanır.

Yüksek osmotik gücü kaçınma neurexin ve neuroligin etkilerini değerlendirmek için, 7 4M fruktoz halka dayalı bir yöntem kullanarak, nrx-1 ve NLG 1 genlerin arızalı C. elegans mutantlar farklı tepki gösterir. Davranışsal fenotipleri belirli RNAi klonlar 8 kullanarak teyit edildi. C. elegans, RNAi tetiklemek için gerekli dsRNA 9 beslenme uygulanabilir. Gıda yoluyla dsRNA teslim ilgi böylece genetik bileşenleri ve ağ yollar kimlik sağlayan gen RNAi parazite neden olur.

Protocol

1: Osmotik kaçınma tahlil. OP50 E. içeren taze bir NGM plaka tahlil Hakkında 16-24 saat önce, her genotipin L4 larva aşamasında hayvan almak coli, 20 ° C'de bu andincubate Ertesi gün genç yetişkinler denemeyi başlatmak. Bu tahlil, "körü körüne" yürütmek için tavsiye edilir. Test edilecek her suşu ile plakaları deney tamamlandığında maskesiz olurdu relabelled plakaları kullanılarak tahlil yapılması, ikinci bir deneyci tarafından relabelled …

Discussion

Neurexins ve neuroligins sinaptik iletim 11 ve sinaptik bağlantıları 12 farklılaşma önemli rolleri yerine. Her iki molekülleri için aday genler, otizm 13,14 olarak tespit edilmiştir.

Bu video C. osmotik kaçınma yanıtını etkileyen genlerin etkisini araştırmak için bize sağlayan basit bir yöntem elegans. Neuroligin eksik mutantlar osmotik gücü tespit kusurlu ama neurexin eksikliği mutantlar 4M fruktoz çözümü kaçınar…

Acknowledgements

Biz onun değerli yardım için teşekkür Dr. Antonio Miranda Vizuete istiyorum. Ayrıca değerli teknik yardım için Salma Boulayoune ve Isabel Caballero minnettarlığımızı ifade etmek istiyorum. Bu çalışma Junta de Andalucia (BIO-272) bir hibe ile finanse edilmiştir. Bu araştırma, Avrupa'da genetik deneyler düzenleyen mevcut yasa ile anlaşma yapılmıştır.

Materials

Table 1. C. elegans strains.

Strain Gene Allele Source
Bristol N2 aCGC
VC228 nlg-1 ok259 CGC
FX00474 nlg-1 tm474 bNBP-JAPAN
VC1416 nrx-1 ok1649 CGC
FX1961 nrx-1 tm1961 NBP-JAPAN
NL2099 rrf-3 pk1436 CGC
CRR21 nrx-1; nlg-1 ok1649; ok259 This work
CRR22 nrx-1; nlg-1 tm1961;ok259 This work

a. Caenorhabditis Genetic Center, University of Minnesota, USA.

b. National Bioresource Project for the Experimental Animal “Nematode C. elegans“. Tokyo Women’s Medical University, Japan.

References

  1. Sudhof, T. C. . Nature. 455 (7215), 903-903 (2008).
  2. Fabrichny, I. P., Leone, P., Sulzenbacher, G. . Neuron. 56 (6), 979-979 (2007).
  3. Garber, K. . Science. 317 (5835), 190-190 (2007).
  4. Wang, K., Zhang, H., Ma, D. . Nature. 459 (7246), 528-528 (2009).
  5. Ward, S., Thomson, N., White, J. G. . The Journal of comparative neurology. 160 (3), 313-313 (1975).
  6. Bargmann, C. I., Thomas, J. H., Horvitz, H. R. Cold Spring Harbor symposia on quantitative biology. 55, 529-529 (1990).
  7. White, J. G., Southgate, E., Thomsom, J. N., Brenner, S. . Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 314, 1-1 (1986).
  8. Culotti, J. G., Russell, R. L. . Genetics. 90 (2), 243-243 (1978).
  9. Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K. . Nature. 391 (6669), 806-806 (1998).
  10. Timmons, L., Fire, A. . Nature. 395 (6705), 854-854 (1998).
  11. Simmer, F., Tijsterman, M., Parrish, S., Koushika, S. P., Nonet, M. L., Fire, A., Ahringer, J., Plasterk, R. H. . Curr Biol. 12, 1317-1317 (2002).
  12. Missler, M., Zhang, W., Rohlmann, A. . Nature. 423 (6943), 939-939 (2003).
  13. Varoqueaux, F., Aramuni, G., Rawson, R. L. . Neuron. 51 (6), 741-741 (2006).
  14. Graf, E. R., Zhang, X., Jin, S. X., Scheiffele, P., Fan, J., Choih, J. . Cell. 119 (7), 1013-1013 (2004).
  15. Scheiffele, P., Fan, J., Choih, J. . Cell. 101 (6), 657-657 (2000).
  16. Jamain, S., Quach, H., Betancur, C. . Nature genetics. 34 (1), 27-27 (2003).
  17. Szatmari, P., Paterson, A. D., Zwaigenbaum , L. . Nature genetics. 39 (3), 319-319 (2007).

Play Video

Cite This Article
Calahorro, F., Alejandre, E., Ruiz-Rubio, M. Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism. J. Vis. Exp. (34), e1616, doi:10.3791/1616 (2009).

View Video