Koku için koku alma duyu nöronlarının elektrofizyolojik yanıtlar tek sensillum kayıtları kullanarak böcekleri ölçülebilir. Bu video makalede, sirke sineği antenler tek sensillum kayıtları nasıl gerçekleştirileceği gösterecektir (<em> Drosophila melanogaster</em>) Ve sıtma sivrisinek maksiller palps (<em> Anofel gambiae</em>).
Koku alma duygusu, gıdalar, arkadaşları, predatör ve bulmak için siteler 3 yöntemlerinin koloni böcekler için esastır . Böcek koku alma duyu nöronları (OSNs) koku alma organlarının yüzeyini kaplayan sensilla denilen duyu kılları, içine alınır. Her sensillum yüzey koku üzerinden geçmek ve belirli bir sensillum ev sahipliği OSNs duyusal dendritler banyoları sensillum lenf adı verilen bir sıvı içinde çözülür, küçük gözenekler ile kaplıdır. OSN dendritler odorant reseptör (OR) proteinleri ifade, hangi böceklerin koku-kapılı iyon kanalları 4, 5 olarak fonksiyon. OR ya artırır koku etkileşimi veya OSN bazal atış hızı azalır. Aksiyon potansiyelleri şeklinde Bu nöronal aktivitenin ilk temsili kalitesi, yoğunluğu ve odorant 6, 7 zamansal özellikleri bünyesinde barındırıyor.
Bu duyu kılları kolay erişim göz önüne alındığında, referans elektrot böceğin göz ya da vücudun lenf alınırken, sensillum lenf bir kayıt elektrodu getirerek tek OSNs ekstraselüler kayıtlar yapmak mümkün. Drosophila, bir ile dört OSNs arasında sensilla ev, ama her OSN genellikle karakteristik bir başak genlik görüntüler. Spike sıralama teknikleri, bireysel OSNs spike yanıtları atamak mümkün kılmaktadır. Bu tek sensillum kayıt (SSR) tekniği sensillum lenf ve OSNs 1, 2, 8 reseptör aktivitesi tarafından üretilen elektrik ani olarak referans elektrot arasındaki potansiyel farkı izler. Odorant yanıt ani sayısı değişiklikler, böcekler içinde koku kodlama hücresel temeli temsil eder. Burada, şu anda Drosophila melanogaster ve Anofel gambiae SSR gerçekleştirmek için laboratuarda kullanılan hazırlama yöntemi tarif ve sensillum özel bir şekilde koku ile indüklenen temsilcisi izleri .
Olfaktör ipuçları yiyecek kaynakları, potansiyel arkadaşları ve yırtıcılar tanımlamak için organizmalar tarafından kullanılır. Olfaktör duyusal nöronları (OSNs), dış uyaranlara ve beynin bilgi ileri işlenmiş yüksek merkezleri arasındaki ilk aktarma merkezi. Drosophila melanogaster ve Anofel gambiae, OSNs kolayca erişilebilir ve koku ponponları tarafından uyarılır, elektriksel aktivitenin izlendiği olabilir.
Tek sensillum kayıt (SSR) tekniği, y…
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Paraffin oil | Odors | Fluka | 76235 | |
High purity odors (>98%) | Odors | Sigma-Aldrich | Methyl acetate #296996 1-octen-3-ol #74950 |
|
Filter paper strips | Odors | Fisherbrand | 05-714-1 | Chromatography paper |
Connectors | Odors | Cole-Parmer | EW-06365-40 | 1/16×1/8″ |
Glass vials | Odors | Agilent Technologies | 5182-0556 | |
Air line plastic tubing | Odor Delivery | Python Products | 500PAL | |
1 serological pipette | Odor Delivery | Corning | 4101 | 10 mL |
Plastic tubing | Odor Delivery | Cole-Parmer | EW-06418-0 | 0.050″x0.090″OD |
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes | Odor Delivery | FisherBrand | 13-678-20A | 5-3/4 inches |
Programmable stimulus controller | Odor Delivery | Syntech | CS-55 | |
Anti-vibration table | Electrophysiology Equipment | TMC | 63533 | 36”Wx30”Dx29”H |
Faraday cage | Electrophysiology Equipment | TMC | MI8133303 | |
Inverted microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | E600FN ECLIPSE | Recording microscope |
10x and 100x objectives | Electrophysiology Equipment | Nikon | 10x Plan Fluor 100x L Plan | |
Dissecting microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | EZ645 | electrode sharpening/insect prep microscope |
Magnetic stands | Electrophysiology Equipment | Newport | MODEL 150 | |
IDAC | Electrophysiology Equipment | Syntech | IDAC-4 | |
Acquisition software | Electrophysiology Equipment | Syntech | Autospike | |
1 macromanipulator | Electrophysiology Equipment | NARISHIGE | MN-151 | Joystick manipulator Used for positioning reference electrode |
1 micromanipulator | Electrophysiology Equipment | EXFO | PCS-6000 | Used for positioning recording electrode |
Crocodile clip | Electrophysiology Equipment | Pomona | AL-B-12-0 | |
Electric cable | Electrophysiology Equipment | Pomona | B-36-0 | Test Cable Assembly |
2 electrode holders | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode |
AC probe | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Universal single ended probe (10xAC) |
Tungsten electrodes | Electrophysiology Equipment | Microprobes | M210 | straight tungsten rods, 0.005“x3“ |
Potassium hydroxide | Electrophysiology Equipment | Sigma-Aldrich | 221473 | |
Syringe | Electrophysiology Equipment | BD | 301625 | 20 mL |
Power supply | Electrophysiology Equipment | WILD HEERBRUGG 6V 40W | e.g MTR32 | |
Vertical puller | Insect prep | Narishige | PB-7 | |
Razor blade | Insect prep | VWR | 55411-050 | |
Dental wax | Insect prep | Patterson | 091-1503 | |
Microscope slide | Insect prep | FisherBrand | 12-550A | |
Cover glass | Insect prep | FisherBrand | 12-541A | 18X18 #1.5 |
Polypropylene mesh | Insect prep | Small Parts inc. | CMP-0500-B | |
Glass electrode | Insect prep | Frederick Haer & Co. | 27-32-0-075 | Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm |
Double-sided tape (3M) | Insect prep | 3M | MMM6652P3436 | Double-sided tape (3M) |
Forceps | Insect prep | Fine Science Tools | 021×0053 | Dumont #5 Mirror Finish Forceps |
Small plastic cup | Insect prep | VWR | 89009-662 | 7 x 5.7 (23/4 x 21/4) |
Electric aspirator | Insect prep | Gempler’s | RHM200 |