इस वीडियो में, हम CD40 सक्रियण और murine C57BL / 6 चूहों के splenocytes है, जो एक मॉडल प्रतिजन पेश सेल (APC) के उन्मुक्ति का प्रेरण का अध्ययन करने के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है से बी कोशिकाओं के विस्तार की प्रक्रिया प्रदर्शित करता है.
इस प्रोटोकॉल के संशोधन संभव हो रहे हैं, विशेष रूप से CD40 उत्तेजना और माउस तनाव का इस्तेमाल किया प्रकार के मूल के बारे में भी murine CD40 सक्रिय बी कोशिकाओं के कुशल पीढ़ी में उपज है. अहमदी एट अल. murine CD40-ligand के साथ ट्रां…
The authors have nothing to disclose.
हम अनुरोध tmuCD40 ligand-HeLa सेल लाइन उपलब्ध कराने के लिए डॉ. क्लेमेंस Wendtner धन्यवाद.
A. Preparation of Media:
Feeder cell wild type medium | Feeder cell selection medium | ||
Reagent | Concentration | Reagent | Concentration |
RPMI 1640 | RPMI 1640 | ||
L-Glutamine | 300 μg/mL | L-Glutamine | 300 μg/mL |
FBS | 10 % | FBS | 10 % |
HEPES | 10 mM | HEPES | 10 mM |
Gentamycin | 15 μg/mL | Gentamycin | 15 μg/mL |
Hygromycin B | 0.2 mg/mL |
mCD40-B washing medium | mCD40-B culture medium | ||
Reagent | Concentration | Reagent | Concentration |
D-MEM | |
D-MEM | |
L-Glutamine | 580 μg/mL | L-Glutamine | 580 μg/mL |
Glucose | 4.5 mg/mL | Glucose | 4.5 mg/mL |
HEPES | 10 mM | HEPES | 10 mM |
Gentamycin | 15 μg/mL | Gentamycin | 15 μg/mL |
MEM | 0.1mM (1x) | ||
FBS | 10% |
B. Miscellaneous Reagents:
Reagent | Company | Order No |
RPMI 1640 | Invitrogen Gibco® | REF 21875 |
D-MEM | Invitrogen Gibco® | REF 41965 |
Dulbecco´s PBS (10x) | PAA | Cat No H15-011 |
Gencin® | Delta Select | Art No 7395800 |
FBS | LONZA | Cat No DE14-802C |
HEPES Buffer | PAA | Cat No S11-001 |
MEM NEAA | Invitrogen Gibco® | REF 11140 |
Hygromycin B | PAA | Cat No P02-015 |
Recombinant Murine Interleukin-4 | Immunotools | Cat No 12340045 |
Cyclosporin A | Novartis | Cat No NDC 0078-0109-01 |
Trypsin/EDTA (10x) | Invitrogen Gibco® | REF 15400-054 |
C. Miscellaneous Supplies:
Reagent | Company | Order No |
Sterile pipette tips | Sarstedt | |
6-well plate | NUNC | Cat No 140675 |
50mL conical tube | BD Falcon™ | Cat No 352070 |
Tissue culture flask | Sarstedt | Cat No 83.1813.002 |