Summary
プロトコルはサーチライトのトラップと捕獲される野生型渡り鳥のメスの昆虫のために適した簡単で、容易な解剖方法を示す。この手法は、野生型雌昆虫の交尾嚢と卵巣の発達という両方の生殖組織を比較することで、同じ種を有意に明らかにすることができます。
Abstract
渡り鳥の害虫は、世界中の食料生産と安全保障に深刻な課題をもたらしています。渡り鳥の害虫は、サーチライトトラップを使用して監視および捕獲できます。渡り性害虫予測の最も重要な手法の1つは、渡り鳥種を特定することです。しかし、ほとんどの場合、見た目だけでは情報を得ることは困難です。したがって、雌の生殖器系の系統的解析によって得られた知見を用いることは、サーチライトトラップで捕獲した野生型渡り昆虫の卵巣交尾嚢と卵巣発生の等級分けを組み合わせた解剖学的形態を理解するのに役立ちます。この方法の適用性を実証するために、卵巣の解剖学的構造については、 Helicoverpa armigera、 Mythimna separata、Spodoptera litura、 および Spodoptera exigua で卵巣の発達状態と卵粒の発達段階を直接評価し、卵巣交配嚢を Agrotis ipsilon、Spaelotis valida、Helicoverpa armigera、Athetis lepigone、Mythimna separata、Spodoptera litura、Mamestra brassicae、 および Spodoptera exiguaで研究しましたをクリックして、それらの関係を探ります。本研究では、野生型渡り昆虫を予測するための具体的な解剖法を示し、異なる渡り昆虫の固有の生殖システムを比較した。次に、両方の組織、すなわち卵巣と交尾嚢をさらに調査しました。この手法は、野生型雌性渡り昆虫の生殖器系の動態と構造発達の予測に役立つ。
Introduction
昆虫の移動は、中国で深刻な害虫として報告されているHelicoverpa armigera(ワタボリムシ)、Mythimna separate(東洋のアーミーワーム)、Spodoptera litura - タロイモの幼虫、Spodoptera exigua(ビートアーミーワーム)などの昆虫の世界的な昆虫分布の個体群動態に重要な役割を果たしています1,2,3,4.長い移動距離、季節的な移動、渡り性害虫の高い繁殖力、および生態学的要因により、これらの害虫の予測、予測、および制御に大きな困難がもたらされました5。病害虫の移動モニタリングは、気候変動やサイクルに応じて渡り病害虫を促進する適応性と行動変化を明らかにするために必要です6。成長、繁殖、生存を維持するために、昆虫は進化の過程で連続的な適応性を獲得してきました。この一連の適応生活は、長い移動過程における卵巣の発達の制御につながる遊走戦略など、生殖器系に多くの変化をもたらしました。
卵巣の発達は渡り性害虫によく見られ、個体数の増加に影響を与えます7。そのため、卵巣の発生は長い間、渡り病害虫研究のホットな話題となってきました。一連の研究により、いくつかの卵巣発達指標と分類戦略が導かれました。これまで、卵巣の発達を解析するためにいくつかの方法が用いられてきたが、例えば、Loxostege sticticalis(草原の蛾の子房の発達で、初期の羽毛期、初期産卵期、産卵期、産卵期8の終わりを含む)がある。一部の研究者は、S. exigua - ビートアーミーワーム、Pseudaletia unipuncta - 真のアーミーワーム、Cnaphalocrocis medinalis - イネの葉フォルダーなど、移動性の鱗翅目害虫の卵黄色の発達に基づいて卵巣レベルを分割しています9,10,11,12.これまでの研究では、ワタボシやイネの葉のローラーなどの病害虫の卵巣発育レベルは、卵黄の堆積段階、卵粒の成熟段階、成熟した出産待機段階、卵形成のピーク期、産卵終了段階の5段階に分けられていました13,14。ヨーロッパトウモロコシの卵巣の発達は、卵黄の堆積段階、卵の成熟、卵の配置前、産卵のピーク期、産卵末期の6つの発生段階に分けられました15。
さらに、同じ属の昆虫でも、秋のアーミーワームである Spodoptera frugiperda の卵巣の発達レベルは、卵黄の堆積段階、分娩を待つ成熟期、産卵陽性のピーク、産卵期の終わりの4つの段階に分類されるなど、発達段階が異なります16。一方、ビート蛾である Spodoptera exigua の卵巣の発達には、透明、硝子体形成、卵の成熟、卵の放出、および後期産卵レベルの5つのレベルがあります17。
以前の研究では、卵黄の色成熟度、産卵、卵子の発育を使用して、単一卵巣から多発卵巣の発達レベルまでしか分類できませんが、生殖器系の解剖学的構造に基づいて分類することはできません。形態形成の解剖学的構造に基づく卵巣の発達は、あまり研究されていない分野です。ここでは、2種類の卵巣組織を用いて集団内の渡り雌を予測し、卵巣の発達段階と交尾嚢の解剖学的形態形成に基づいて生殖動態を精緻化し、渡り鳥の野生型雌を区別するための直接的な証拠を提供する解剖法を設計しました。
いくつかの研究によると、渡り鳥の昆虫種はサーチライトによって頻繁に捕獲された18。ほとんどの渡り性昆虫種の卵巣は、移動の初期段階で発生の初期段階にあり、移動の進行とともに卵巣レベルが上昇します。本研究では、サーチライトで捕捉された異なる雌集団害虫の2つの生殖組織を研究するために、卵巣発育グレードの解剖法について述べる。この手法は、渡り動態の解明研究だけでなく、昆虫の分類、昆虫生理学研究、病害虫予測、雌性害虫種の予測などの施設を前進させます。
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Protocol
注意: 野生型の渡り昆虫を捕獲する前に、安全対策に注意を払い、安全装備(手袋、長袖シャツ、ゴーグル)を着用することをお勧めします。また、他の安全上の問題やライトの過熱を避けるために、使用しないときはトラップをオフにしてください。体液や化学物質への暴露を防ぐために、手袋、ゴーグル、白衣の着用など、解剖前に安全プロトコルに従うことが重要です。
1. 渡り虫の捕獲
- このプロトコルは、サーチライトランプを使用して昆虫を捕獲することから始めます。このプロトコルでは、テスト昆虫の源は済陽地区、済南都市、山東省、中国(36.977088° N、116.982747° E)です。
- 錆びないスチール製のサーチライトランプ本体、長方形のボディであるボックス、出力1000WのGT75タイプのハロゲンヘッドランプを使用し、ヘッドランプを光源として中央に配置します。
- 漏斗状の集虫水路をライトの内側と下部に置き、直径5cmの昆虫採集用の箱を置き、その後に60段の捕虫網袋(0.5m×0.5m)を置き、光で捕獲した昆虫を捕集します。既知の光の投影は、地上約500mです。
- このプロトコルは野生型の女性および卵巣の発達の移動の原動力で強調する;したがって、さまざまな種類の昆虫を収集します(ここでは、2021年から2022年にかけて、4月から8月にかけて収集を行いました)。この実験では、小型で傷ついた昆虫の採集を避け、同じような大きさの大きな害虫を選びます。
2.昆虫の準備
- 集めた昆虫を網袋(0.5m)から網かご(30cm×30cm)に移し、10%蜂蜜水の殺菌液を入れたシャーレを用意します(給餌は任意)。ケージを27±2°C、相対湿度65%±12%に置き、暗所で8〜12時間維持します。
- 同じ日にケージ内を飛んだ野生型の雌を選び、慎重に個々のバイアルチューブに移し、各チューブを綿の蓋で閉じます。過度の圧力により害虫を傷つけたり傷つけたりする可能性のある直接の取り扱いは避けてください。
注:すべての野生型雌は夜間に捕獲され、解剖は昼間に行われました。したがって、各実験は1日以内に行われました。
3. 昆虫麻痺法の準備(図1)
- 選択した雌の害虫を真ん中のフライバイアルチューブに個別に入れ、ブローガンの針を握ってCO2 ガスを使用して雌に麻酔をかけ、軽度の麻痺を引き起こします。害虫が麻痺しているかどうかを確認するには、柔らかいブラシを使用して害虫をそっとつなぐか触れます。柔らかい刺激に反応しず、動かない場合は、麻痺が成功したことを示します。
注:低温(-20°C)は、昆虫を麻痺させるための代替技術としても使用できます。
4.昆虫の解剖
- 麻痺したばかりの女性を無水エタノール(10 mL)を含む解剖ペトリ皿に入れます。解剖中の鱗屑毛や翅の粉末の影響を避けるために、生きている昆虫または麻痺した昆虫に無水アルコールを浸透させ、きれいな水ですすいでください。
- 2対の鉗子を使用して、胸部と腹部体の接合部から背翼を分離します。
- 腹部を適量の水(深さ2〜5 mm)を含む新しい使い捨てシャーレに移し、解剖鉗子を使用して、尖った口から尾までの背側腹側線に沿って腹部外骨格をそっと剥がします。反対側でも同じ手順を繰り返し、きれいな水に入れて無傷の組織を分散させます。
- 鉗子を使用して表皮脂肪組織を慎重に剥がし、卵巣をそっと引っ張って解放します。
- 解剖鉗子を使用して、卵巣の周りの脂肪粒子やその他の臓器を優しく取り除きます。一般的に、害虫の卵巣は腹部の両側で内側に折りたたまれていることがほとんどで、卵巣を広げながら液体環境で操作しようとし、交尾嚢を真ん中からゆっくりと剥がし、卵管に付着した脂肪粒子を摘み取ります。
- 卵巣と交配嚢を垂直の後端からそっと持ち、慎重に下向きに広げます。展開中の損傷を避けるために、卵巣を水を含む新しいまたは清潔なペトリ皿に移します。卵巣の先端を持ち、卵巣を内側に広げます。卵巣の損傷を避けるために、この手順を慎重に実行してください。
5. 卵巣組織の解剖学的構造に関するデータの解析
- このステップでは、卵の色と大きさに従って、各昆虫の卵の発達を評価し、その成熟度を判断します。次に、卵子の発育に応じて卵巣のグレードを判断します。
注:さまざまな卵巣の発達レベルの区分は、主に産卵前または卵黄の沈殿レベルでの産卵前に分割されます。昆虫の卵粒の発達は、卵黄の発生段階、卵黄の成熟段階、卵黄の終焉段階など、より明確にするためにさらに段階に分けられます。卵粒の成熟度は、卵の満腹度、色、大きさによって判断されます。 - 解剖後、無傷の卵巣から雌の交尾嚢組織を分離し、ほとんどの交配嚢の解剖学的構造が種ごとに異なるため、形態を観察して種を区別します。したがって、交配嚢を使用して種を区別します。
- このステップでは、卵巣の解剖学的構造を評価し、卵巣の発達の等級付けを分析します。卵巣組織を5つのグレード(グレード1からグレード5)に分けます。
- 組織を整理するために、次の変化と構造を探します:1年生(1)は発達の初期段階(乳白色の透明)、完全な腹部、柔らかく、脂肪体はふわふわ、明るい色、剥がれにくいです。2グレード(2)は卵黄の沈着段階であり、より長くて厚い卵巣管を観察した後、必要に応じて卵巣を別々にグレード付けします。3年生(3)は脂肪体が少なく、卵巣に付着した顆粒が少ない。小学4年生(4)は弾力性が低く、割れやすく、子宮管の真ん中に卵子が入ることもあります。5年生(5)は、脂肪体が少ない、またはまったくない、萎縮性で壊れやすい卵巣で識別しやすいです。
- 実験的なニーズに応じてデジタルカメラを使用して画像をキャプチャします。
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Representative Results
卵の発育
上記のプロトコルは、卵巣内の卵子の発生を分析するために適用されました。この目的のために、まず、卵を4つの段階に分類し、卵の発育の初期段階と成熟段階をすべての種(ボールワーム、アーミーワーム、タロイモの幼虫、ビートガなど)で区別しました。ここでは、フェザリングの初期段階(乳白色の透明段階)が観察されました。 図2A は、卵巣がまだ発達し始めていないことを示しており、卵巣管は糸状で弾力性に優れています。形成された卵粒は、卵の繊細さのために日光の下では視覚化できず、卵巣管を伸ばすことで光透過で乳白色の斑点を見ることができます。
卵巣の発育(卵黄沈着期)には、やや未熟で乳白色の大きな卵が含まれており、卵は密接に接触しています (図2B)。成熟した保留分娩(熟成段階)は 図2Cで観察でき、卵はビーズの形をしており、明るい黄色で完全に熟しています。 図2D は、卵黄の消滅期間(産卵期末期)、卵管の脆弱性を示しています。活性卵粒のほとんどが放出され、卵粒はごくわずかまたはまったく放出されず、不活性卵が存在する可能性があります。
交配嚢の形態の比較
合計8種の野生型雌種を交配嚢のベースで比較した。各種の昆虫の数は100以上でした。最も代表的な交配嚢を展示例として選択しました(図3)。Helicoverpa armigeraの交配嚢は、内腔を持つ円柱状の右らせんであった(図3A)。Mythimna separataの交尾嚢はG字型/釣り針型で、内側に暗褐色の帯があります(図3B)。アグロティス・イプシロンの交配嚢は直線状で、背中に大きなコイルと外側の嚢胞がありました(図3C)。
Spaelotis valida(図3D)は、肥大後にわずかに薄くJ字型の交配嚢を持っていました。見た目は脚のようで、色はやや茶色がかっています。Spodoptera exigua種は、中央に気泡嚢胞を持つ白い半透明のダンベル形の嚢を示し、遠位端は乳白色です(図3E)。Spodoptera lituraの交尾嚢は口の先が赤く、上部は乳白色の透明で観察でき、内部の嚢胞腔がかすかに見えます(図3F)。偽翅目レピゴン交配嚢は小さなコイル状で、外側の嚢胞は閉じた花のようで、上から下まで白と茶色をしており(図3G)、Mamestra brassicaeは外側の嚢胞がオリーブ色で二重のコイル状の嚢を持っています(図3H)。
渡り性野生型雌における卵巣発育の等級付け
卵巣発育の等級付けでは、グレード1からグレード5は、ボールワーム、アーミーワーム、タロイモの幼虫、ビートガの4つの野生型雌種で評価されました。ボールワーム(H. armigera)の卵巣の等級付け(図4)の解析結果では、卵巣管は透明で弾力性があり、グレード1では卵母細胞がわずかに見えることが示されました(図4A)。卵巣管は透明で、卵は柔らかい黄色で、グレード2で透明なラップが付いています(図4B)。グレード3(図4C)では、大きな脂肪体は存在せず、卵巣管に付着した脂肪粒子はわずかでした。卵巣管は産卵管の近くで最も長く、最も太く、成熟した領域、成長領域、および原卵領域が明確に分割されており、卵巣管は黄色で完全な数珠です。グレード4と5(図4D、E)では、卵巣にクラスターと卵が少なく、淡黄色と緑がかった色が見られました。
同様に、図5に示すように、5つのグレードの観察結果はすべてアーミーワーム(M. separata)で見られました。脂肪体は、複数の脂肪粒子で構成される綿状のテクスチャーで、ふわふわで淡い色で、乳白色で繊細な細かい卵母細胞が目に見える(図5A)です。グレード2では、卵巣管の構造は黄色で、ビーズの形をした卵でいっぱいです(図5B)。グレード3と4(図5C、D)は完全に成熟しており、卵管は白くクリーム色で、卵粒は白く、外側に透明なカールラップがあり、卵はいっぱいですが混雑しています。グレード5は、黄色から暗褐色への着色の低下を示しています(図5E)。 それは発達した卵巣の最終段階を強調します。
タロイモの幼虫(S. litura)とビートガ(S. exigua)の卵巣の等級付けも、図6および図7に示すのと同じ卵巣の等級付けレベルを使用して観察されました。タロイモの幼虫のグレード1と2の卵巣(図6A、B)は、白く、短く、ふわふわで、幅が広いビートガの子房(図7A、B)と比較して、薄く、肥大し、ピンクがかった色をしていました。両方の卵巣は、卵巣管の形態形成のグレードが類似しており、透明で弾力性があり、微妙な目に見える卵母細胞があります。両種のグレード3とグレード4の結果は、卵巣が同じ発達段階にあり、完全な卵を持つ濃い黄色であることを示しています(図6C、D)。一方、同じ色の変化を空色から薄緑色に視覚化できます(図7C、D)。 この色の変化は、卵巣の発達の成熟段階を示しています。産卵後期は、卵管内の褐色がかった卵塊が少ないと評価されました(図6E)。図7Eは、卵巣が細く、卵管がふわふわしている卵巣で、卵巣が徐々に大きくなり、色が濃くなり、白っぽい青みがかった色をしています。
図1:実験に使用したツール。 渡り昆虫の卵巣と交尾嚢の解剖に必要な基本的な道具。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図2:卵の発育段階。 野生型渡り性昆虫(ボロワーム、アーミーワーム、サトイモ幼虫、ビートガ)の卵の発育段階、 (A) 乳白色透明段階、 (B) 卵黄の堆積段階、 (C) 熟成期、 (D) 産卵末期または卵黄消滅期。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図3:異なる昆虫の交尾嚢。(a)Helicoverpa armigeraの交配嚢;(B)Mythimnaの交配嚢は分離します。(c)Agrotis ipsilonの交配嚢;(d)Spaelotis validaの交配嚢;(E)Spodoptera exiguaの交尾嚢;(f)Spodoptera lituraの交尾嚢;(g)Athetis lepigoneの交配嚢; (H)Mamestra brassicaeの交尾嚢。 この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。
図4: Helicoverpa armigeraの卵巣発育の等級付け。(あ) グレード1(乳白色の透明期間); (B) グレード2は卵巣発育期間(卵黄沈着期間)を表します。 (C) グレード3は成熟期を示します。 (D) グレード4は産卵グレードを示します。 (E) グレード5は産卵後期を表します。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図5:Mythimna separataの卵巣発育等級付け。 (A)グレード1(乳白色の透明期間);(B)グレード2は卵巣発育期間(卵黄沈着期間)を表します。(C)グレード3は成熟期を示します。(D)グレード4は産卵レベルを示します。(E)グレード5は産卵後期を表します。この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図6: Spodoptera lituraの卵巣発育等級付け。 (A) グレード1(乳白色の透明期間); (B) グレード2は卵巣発育期間(卵黄沈着期間)を表します。 (C) グレード3は成熟期を示します。 (D) グレード4は産卵レベルを示します。 (E)グレード5は産卵後期を表します。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図7:Spodoptera exiguaの卵巣発生の等級付け。 (A)グレード1(乳白色の透明期間);(B)グレード2は卵巣発育期間(卵黄沈着期間)を表します。 (C)グレード3は成熟期を示します。(D)グレード4は産卵レベルを示します。(E)グレード5は産卵後期を表します。この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
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Discussion
卵巣分析法は、昆虫の飛翔と個体数の動きを解明して予測し、19,20,21を予測し、昆虫の生理学的変異を詳しく説明するために、植物保護に日常的に使用されています。ボロワーム、アーミーワーム、タロイモの幼虫、ビートガなどの一般的な農業害虫の独特の移動と急速な分散能力により、他の地域からの予測が困難であることが注目されています。いくつかの研究では、Athetis lepigoneを渡り性害虫と見なしていますが22,23、この害虫の移動動態と予測はとらえどころがありません。最近、1000Wのサーチライトランプを渡り病害虫のモニタリングに使用した別の光捕捉方法が導入されました18,24、これは渡り性害虫のモニタリングに良い応用効果があります。また、渡り昆虫の見分け方としては、光捕集法では不十分であると推測されています。本研究では、渡りのピーク時にサーチライトトラップに捕獲された成虫の数は主に渡り性害虫であり、地域個体の数はごくわずかであった。このことは、渡り鳥種の出現時期が非常に類似していることを浮き彫りにしている25。地域個体を避けるためには、渡り鳥のピーク時期を考慮し、渡り鳥の個体数を豊富に捕捉することが重要である。したがって、サーチライトランプによる渡り昆虫の識別と卵巣の等級付けは、どちらも基本的な側面です。しかし、渡り昆虫の卵巣の解剖学的構造を特定する方法はほんの一握りです13,26,27,28,29。ここで提示された実行可能な方法は、さまざまな発達段階を区別するために、卵巣組織、交配嚢、および卵巣の等級付けの両方の使用を確立し、以前の研究よりも詳細に卵巣組織の形態形成特性について議論しようとした革新的な研究です11,21,30;特に、サーチライトランプを使用して捕獲されたH. armigera31、M. separata32、S. litura33などの最も危険な野生の雌害虫に関して。
これまでのほとんどの研究では、渡り昆虫の同定を評価するための区別方法を用いて卵巣の発生を分類してきた。これらの研究の焦点は、卵黄の色の成熟度、産卵、出生の発達、交尾頻度などでした22,30,34,35。この研究で用いられた方法は、2つの卵巣組織に基づく双方向の比較証拠を導入した。ボロワーム、アーミーワーム、タロイモの幼虫、ビートガ、アグロティス・イプシロン、Spaelotis valida、Athetis lepigone、およびMamestra brassicaeについては、交配嚢が研究されました。卵巣の解剖学的構造については、Helicoverpa armigera、Mythimna separata、Spodoptera litura、およびSpodoptera exiguaで卵粒の発達段階を直接評価しました。昆虫の雌の成卵巣の解剖学的構造によると、卵の発達は種ごとに異なります16,17,36,37。したがって、この解剖法を用いて卵巣の発育段階と交尾嚢を分析することにより、渡り昆虫の両レベルでの卵巣形態を研究することは有用である。
一般に、サーチライトランプを使用して捕獲された昆虫の湿度、温度、餌源の変動などの長期または不適切な保管は、体重、卵の健康、卵巣のサイズに影響を与える可能性があります5,38,39,40,41,42。そのため、後期の昆虫の選別や解剖が困難になり、データが不完全になります。これらのエラーを最小限に抑えるには、短期間の適切な保管が必要です。さらに、プロトコルを適用した後、同様のサイズの女性がさらに選択されました。この雌の選択と収集は時間の節約であり、本研究で迅速かつ有意な結果が得られます。この手法は、野生型渡り昆虫成虫の自然環境からの解剖とその卵巣の等級分けを実証するものです。このプロトコルを効果的に実行するには、いくつかの重要なステップを考慮する必要があります。例えば、自然環境からの昆虫の淘汰は、卵巣の空っぽや不妊卵を防ぐための重要なステップです。無傷の組織器官を持つ生きている昆虫が好ましく、死んだ、弱い、壊れた、または収縮した腹腔昆虫を避けます。
したがって、卵巣組織の解剖は、卵巣の卵巣の等級付け(図4)など、卵巣の乳白色から透明な卵巣から濃い黄色に成熟する卵子を比較することで推定できます。散在産卵(図5)は、卵巣が乳白色透明の卵巣から成熟し、乳白色または淡黄色に見えるアーミーワームで発生します。タロイモの幼虫は、ピンク色で柔らかい乳白色の透明な卵巣細胞から斜めの発達を示し、さらに茶色または黄色の発色で成熟しました(図6)。この研究の継続は、異なる種の卵巣の解剖学的構造を同時に決定します。この実践は、植物保護の分野で昆虫の動きを研究するのに役立ち、害虫の予測を導くことができます。
現在、この研究にはいくつかの限界があります。この方法の適用は、卵粒と卵巣の発達特性の詳細な分析に依存します。今後の重要な課題は、生態系における雌性害虫の移動動態を評価するための野外分析をさらに進歩させ、改善することです。そのため、卵巣の等級付けは、渡り昆虫の年間定量化、気温、湿度、現場や餌の風向などの環境要因の影響を受けるため、統計解析のためにフィールドデータを組み合わせる必要があります。すべての種が同じ卵巣の等級付けと交配嚢のレベルを持つと想定されました。それでも、自然界での昆虫の利用可能性はさまざまであり、予測の欠如につながる可能性があるため、比較的類似した種で検証する必要があります。したがって、将来的には、2つの卵巣組織を用いて、高地渡り鳥の雌の類似種の解剖を検証する必要がある。
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Disclosures
著者は、宣言すべき利益相反を持っていません。
Acknowledgments
本研究は、主要な科学技術イノベーションプロジェクト(2020CXGC010802)の支援を受けて行われました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Digital camera | Canon ( China ) co., LTD | EOS 800D | |
| Dropper | Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD | ||
| Ethanol absolute (99.7%) | Shanghai Hushi Laboratory Equipmentco., LTD | ||
| Forceps | Vetus Tools co., LTD | ST-14 | |
| GT75 type halogen headlamp (1000 W) | Shanghai Yadeng Industry co., LTD | ||
| Helicoverpa armigera, Mythimna separate, Spodoptera litura, Spodoptera exigua | Jiyang district, Jinan city, Shandong province, China | ||
| Measuring cylinder, beaker, flask | Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD | ||
| Net bag | Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD | 0.5 m | |
| Net cages | Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD | 30 cm x 30 cm | |
| Petri dishes | Qingdao jindian biochemical equipment co., LTD | 60 mm diameter |
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