Overview
此视频描述了 CApillary FEeder，或 CAFE，检测，一种行为方法，测量食物摄入量和无拘无束果蝇的偏好。特色协议展示了如何从用于运送食物和跟踪其摄入量的充满液体的毛细金香精中以最小的蒸发度执行检测。
Protocol
本协议摘自迪格尔曼等人 ，CApillary FEeder分析测量食物摄入量在 德罗索菲拉梅拉诺加斯特 ，J.维斯.Exp.（2017 年）。
1. 组装和执行辅助法德分析
- 如果不需要禁食，请通过敲击或吹管将实验苍蝇转移到检测中。确保包括三个没有苍蝇的控制小瓶，以量化蒸发。
- 小心地取出关闭其中一个外开口的移液器尖端（2 - 20 μL 音量），并首先插入填充玻璃毛细管，底端。将移液器尖端放回毛细管旁边，确保毛细管安全。如果正在测试几个食物溶液，则相应地重复此过程。
- 将毛细毛线末端放在同一水平的所有小瓶内，以避免如果食物来源位于不同高度（距离盖子 3 - 4 厘米）时可能发生偏置：与滤纸保持距离，通过意外接触滤纸或食物来源的不同粘度来防止毛细毛虫泄漏。
- 使用记号笔（标记开头）标记彩色液体的上端。为了确保可以识别不同的毛细毛，请使用颜色或条纹代码单独标记它们。
- 将多个准备好的 CAFE 检测值放置在带网格镶嵌的塑料盒内，并将盒子（图 2A）转移到实验室条件下的安全位置或温度、光线和湿度控制的气候室（参数：25 °C，相对湿度 60%，12 h/12 h 光暗周期），用于实验期（例如 3 小时或数天）。
- 当底部滤纸干燥，如果检测在几天内执行，应用淡水每24小时通过海绵bung（100μL），以保持湿度恒定在检测。使用四个单独的小瓶（8 厘米高，直径 3.3 厘米），填充 30 mL ddH2O 作为湿度装置，并将它们放在塑料盒中的 CAFE 检测旁边。在实验期间，使用塑料盒的盖子创建湿度控制环境（图2A）。
注：在实验室条件下发生更广泛的变异性;但是，在室温下（例如在教室中）执行 CAFE 检测是可行的。强烈鼓励使用加湿装置（过滤纸，有或没有湿海绵，填充水瓶和塑料盒盖）以减少蒸发（图2B）。 - 每 24 小时用新鲜填充的毛细毛更换毛细细丝进行长期实验。在每 24 小时间隔之前记录死苍蝇，并使用活苍蝇的数量来计算下一个间隔期间每只苍蝇的消耗量。测量半月板下降后丢弃旧毛细管（参见 2.1）。
注： 在3小时的实验中，我们几乎看不到任何死苍蝇。在为期4天的研究中，我们通常会发现1-3只死苍蝇。 - 在检测结束时或更换毛细管之前，用记号笔标记毛细管的下半月板（标记端），而 CAFE 检测仍处于直立位置。如果标记结束 不低于初始标记（标记开始），则丢弃数据。不要取下盖子，因为这可能会改变半月板。
- 小心地从检测中取出毛细管并将其存储以用于数据收集。检查毛细细亚内的液体是否到达下端，如果不丢弃数据，因为苍蝇无法获取食物。收集每个小瓶作为一个组的所有毛细细丝。将未切割的移液器提示插入所有开口，以防止苍蝇逃跑。拆解设置，在肥皂浴中清洗小瓶、盖子和海绵面包，在室温下干燥过夜，以供进一步使用。
注： 检测后可以进一步分析苍蝇。确认通过眼睛或解剖显微镜吸收食物。 - 在至少三个不同的天重复使用相同基因型的实验。
2. 数据收集和分析
- 使用卡钳或尺子测量毛细纸上的标记开始 和标记结束 之间的距离。要将数据直接传输到电子表格，请使用连接的数字卡钳 （图 1E）的 USB（通用串行总线）。测量后丢弃毛细毛。
- 计算毛细毛大小以计算食物吸收或蒸发。例如，考虑一个73毫米长，含有5μL食物溶液的毛细。半月板的减少 14.6 mm 反映了 1 μL 溶液的吸收。使用以下公式计算食物吸收量：
食物吸收 （μL） = 测量距离 （mm） / 14.6 毫米 - 为了排除蒸发对食物摄入的影响，计算三个（至少）控制小瓶中没有苍蝇的平均蒸发量。从苍蝇获得的食物消费价值中减去这一平均值。
- 使用以下公式确定每只苍蝇的总消耗量：
食物消耗 （μL） = （食物吸收 [μL] - 蒸发损失 [μL]） /小瓶中的苍蝇总数。对于长期实验，使用 24 小时间隔开始前存活的苍蝇数量。 - 为了解释体型的差异，例如雄性苍蝇和雌性苍蝇之间的差异，将食物消费正常化为体重（μL食物/毫克苍蝇）。
- 使用统计软件进行数据分析。对于通常分发的数据，使用学生的 T测试来确定两个飞行组之间的差异，并使用 ANOVA（方差分析）与超过两组的临时 Tukey Cramer 测试。在选择情况下，使用非参数单样本符号测试分析随机选择的差异。
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Representative Results
图 1：德罗索菲拉 · 梅拉诺加斯特· 卡皮拉里 · 费德 · 阿赛。A）用苍蝇喂养检测。湿润的滤纸在小瓶底部提供水。实验期间提供四种毛细毛（对面毛细的红色和蓝色食物）。请注意，毛细管由第二个移液器尖端固定到位，未使用的位置使用移液器尖端关闭。盖子中央的泡沫塞允许空气交换。B）盖子的详细视图。切割移液器尖端（2 - 20 μL，红色边框）插入未使用位置的圆锥形开口中，并将第二个移液器尖端插入切割尖端以关闭孔中。切割移液器尖端用于控制微披肩的位置，未切割的提示用于将毛细管紧紧抱紧。C） D. 梅拉诺加斯特苍蝇以毛细细丝为食。D）喂养后，食物颜色在苍蝇腹部清晰可见。E）数字卡钳用于测量半月板的标记开始和标记端之间的距离。数据通过 USB 直接传输到 Excel 电子表格。请单击此处查看此图的更大版本。
图2：在毛细细毛喂食器分析中蒸发的影响。A）将多个 CAFE 检测放在带网格镶嵌的塑料盒内。为了控制实验期间的湿度，在网格内放置了四个充满水的瓶（红色轮圈）。蒸发控制装置直接放置在这些小瓶附近。背景中显示了整个设置的封面。B）蒸发时体积损失的比较。显示 4 天内蒸发的平均值。湿度由 （i） 将水涂在中央海绵块上控制（24 小时间隔）;（二） 将四个装满水的瓶加入电网：和（三）在整个设置中使用塑料盖。如果测试的两种溶液的湿度都得到控制，蒸发量会显著降低（***P ≤ 0.001;N = 48）。使用湿度装置可检测 EtOH 含糖液和不含蔗糖溶液之间的波动性差异。请单击此处查看此图的更大版本。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Vials (breeding) | Greiner Bio-One | 960177 | www.greinerbioone.com |
| Vials (CAFE assay) | Greiner Bio-One | 217101 | www.greinerbioone.com |
| Lid-CAFE assay | Workshop | – | – |
| Plastic box, low wall | Plastime | 353 | www.plastime.it |
| Cover for the plastic box | Workshop | – | – |
| Capillaries | BLAUBRAND | REF 7087 07 | www.brand.de |
| Pipette tips | Greiner Bio-One | 771290 | www.greinerbioone.com |
| Filter paper circles | Whatman | 10 311 804 | www.sigmaaldrich.com |
| D(+)-Sucrose | AppliChem | 57-50-1 | www.applichem.com |
| Ethanol absolute | VWR Chemicals | 20,821,330 | www.vwr.com |
| Food color (red, E124) | Backfun | 10027 | www.backfun.de |
| Food color (blue, E133) | Backfun | 10030 | www.backfun.de |
| Soap solution (CVK 8) | CVH | 103220 | www.cvh.de |
| Digital caliper | GARANT | 412,616 | www.hoffmann-group.com |
| Vials (breeding) | Height 9.8 cm, diameter 4.8 cm | ||
| Vials (CAFE assay) | Height 8 cm, diameter 3.3 cm | ||
| Lid-CAFE assay | Produced in university workshop, technical drawing supplied Please click here to download this file. |
||
| Plastic box, low wall | A plastic grid inlay was custom-made for 8 x 10 vial positions | ||
| Cover for the plastic box | Dimensions (37 x 29 x 18 cm) | ||
| Capillaries | DIN ISO 7550 norm, IVD-guideline 98/79 EG, ends polished | ||
| Pipette tips | Pipettes for the outer circle are cut according to the lid | ||
| Filter paper circles | 45 mm diameter works nicely if folded for the vials used | ||
| D(+)-Sucrose | Not harmful | ||
| Ethanol absolute | Highly flammable liquid and vapor | ||
| Food color (red, E124) | Not stated | ||
| Food color (blue, E133) | Not stated | ||
| Soap solution (CVK 8) | Odor neutral soap | ||
| Digital caliper | |||
| Standard fly food | (for 20 L) | ||
| Agar | 160 g | ||
| Brewer's Yeast | 299.33 g | ||
| Cornmeal | 1,200 g | ||
| Molasses | 1.6 L | ||
| Propionic acid | 57.3 mL | ||
| Nipagin 30% | 160 mL |
