Overview
Denne video beskriver en teknik med intraperitoneal injektion, en metode til at levere løsninger i bughulen af voksen zebrafisk.
Protocol
1. Eksperimentel M. marinum infektion med intraperitoneal injektion
- Pipette en 5 μL dråbe af den fortyndede bakterieopløsning på et stykke parafilmfilm og træk dråben ind i en 30 G insulinnål.
- Brug 5-8 måneder gamle vilde fisk og rag1−/−hu1999 mutantfisk til forsøget. Bedøve voksne zebrafisk i tanken vand med 0,02% 3-aminobenzoic syre ethylester (pH 7,0). Placer fiskene ventral side op i en slids på en fugtig skummet plast.
BEMÆRK: Rag-/- mutant fisk er ikke i stand til at gennemgå somatisk rekombination og producere funktionelle T- og B-celler. - Indsprøjt nålen mellem bækkenfinnerne i en vinkel på ca. 45°. Hold nålen åbning opad for at observere, at hele åbningen er inde i bughulen. Injicer langsomt bakterieaffjedringen, og fjern forsigtigt nålen.
BEMÆRK: Hvis det røde sporstof lækker ud af fisken ved injektion, skal fisken udelukkes fra forsøget. - Umiddelbart efter injektion overføres fisken til en genopretningstank med ferskvand.
- Der udtages prøver af bakterieophænget på 7H10-plader hvert 15.
- Kontroller fiskens velbefindende regelmæssigt og aflive enhver fisk med symptomer på infektionen med over 0,02% koncentration af 3-aminobenzosyre ethylester (pH 7.0).
BEMÆRK: Ca. 7% af de voksne zebrafisk smittet med 34 ± 15 CFU og 30% af zebrafisk smittet med 2029 ± 709 CFU vil have haft symptomer med 8 uger. Symptomerne kan omfatte unormal svømning, manglende reaktion på berøring, gispende, ødem eller observerbart spild. - Bevar zebrafisken i henhold til de fælles standarder.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mycobacterium marinum | American Type Culture Collection | ATCC 927 | |
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| Phosphate buffered saline tablets (PBS) | Sigma-Aldrich | P4417-50TAB | |
| Middlebrock 7H10 agar | BD, Thermo Fisher Scientific | 11799042 | |
| 3-aminobenzoic acid ethyl ester (pH 7.0) | Sigma-Aldrich | A5040 | |
| Omnican 100 30 G insulin needle | Braun | 9151133 | |
| 1 mL syringe | Henke Sass Wolf | 4010.200V0 |
