Overview
Denna video beskriver en teknik för intraperitoneal injektion, en metod för att leverera lösningar i bukhålan hos vuxna zebrafisk.
Protocol
1. Experimentell M. marinuminfektion med intraperitoneal injektion
- Pipett en 5 μL droppe av den utspädda bakterielösningen på en bit parafilmfilm och dra droppen i en 30 G insulinnål.
- Använd 5–8 månader gammal vildfisk och rag1−/−hu1999 mutant fisk för experimentet. Bedöva vuxna zebrafiskar i tankvattnet med 0,02% 3-aminobensoesyraetylester (pH 7,0). Placera fiskens ventrala sida upp i en slits på en fuktig skummad plast.
OBS: Rag-/- mutant fisk kan inte genomgå somatisk rekombination och producera funktionella T- och B-celler. - Injicera nålen mellan bäckenfenorna i cirka 45° vinkel. Håll nålen uppåt för att observera att hela öppningen är inne i bukhålan. Injicera långsamt bakteriesuspensionen och ta försiktigt bort nålen.
OBS: Om den röda spårsändaren läcker ut ur fisken vid injektionen, uteslut fisken från experimentet. - Omedelbart efter injektionen, överför fisken till en återvinningstank med färskt tankvatten.
- Ta prover av bakteriesuspensionen på 7H10-plattor var 15: e minut från bakteriell alikvot som används och inkubera bakterierna vid 29 °C i 5 dagar och verifiera infektionsdosen genom att räkna kolonierna på plattorna.
- Kontrollera fiskens välbefinnande regelbundet och avliva alla fiskar med symtom på infektionen med över 0,02% koncentration av 3-aminobensoesyraetylester (pH 7,0).
OBS: Cirka 7% av de vuxna zebrafiskarna infekterade med 34 ± 15 CFU och 30% zebrafisk infekterad med 2029 ± 709 CFU kommer att ha haft symtom med 8 veckor. Symtomen kan inkludera onormal simning, brist på svar på beröring, flämtande, ödem eller observerbar slösa. - Håll zebrafisken enligt de gemensamma standarderna.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mycobacterium marinum | American Type Culture Collection | ATCC 927 | |
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| Phosphate buffered saline tablets (PBS) | Sigma-Aldrich | P4417-50TAB | |
| Middlebrock 7H10 agar | BD, Thermo Fisher Scientific | 11799042 | |
| 3-aminobenzoic acid ethyl ester (pH 7.0) | Sigma-Aldrich | A5040 | |
| Omnican 100 30 G insulin needle | Braun | 9151133 | |
| 1 mL syringe | Henke Sass Wolf | 4010.200V0 |
