Overview
Cette vidéo décrit une technique d’injection intraperitoneal, une méthode pour fournir des solutions dans la cavité abdominale du poisson zèbre adulte.
Protocol
1. Infection expérimentale de M. marinum par injection intraperitoneal
- Pipette une gouttelette de 5 μL de la solution bactérienne diluée sur un morceau de film de parafilm et tirez la gouttelette dans une aiguille d’insuline de 30 G.
- Utilisez des poissons sauvages de type 5 à 8 mois et des poissons mutants rag1−/−hu1999 pour l’expérience. Anesthésier le poisson zèbre adulte dans l’eau du réservoir avec 0,02 % d’ester éthylique acide 3-aminobenzoïque (pH 7,0). Placez le côté ventral du poisson vers le haut dans une fente sur un plastique mousseux humide.
REMARQUE : Les poissons mutants ne peuvent pas subir de recombinaison somatique et produire des cellules T et B fonctionnelles. - Injecter l’aiguille entre les nageoires pelviennes à un angle d’environ 45°. Gardez l’aiguille ouverte vers le haut pour observer que toute l’ouverture est à l’intérieur de la cavité abdominale. Injectez lentement la suspension bactérienne et retirez soigneusement l’aiguille.
REMARQUE: Dans le cas où le traceur rouge fuit du poisson lors de l’injection, exclure le poisson de l’expérience. - Immédiatement après l’injection, transférer le poisson dans un réservoir de récupération avec de l’eau de réservoir fraîche.
- Prélevez des échantillons de la suspension bactérienne sur des plaques de 7H10 toutes les 15 minutes à partir de l’aliquot bactérien utilisé et incubez la bactérie à 29 °C pendant 5 jours et vérifiez la dose d’infection en comptant les colonies sur les plaques.
- Vérifiez régulièrement le bien-être des poissons et euthanasiez tous les poissons présentant des symptômes de l’infection avec une concentration de plus de 0,02 % d’ester éthylique à 3 acides aminobenzoïques (pH 7,0).
REMARQUE: Environ 7 % des poissons zèbres adultes infectés par 34 ± 15 CFU et 30 % des poissons zèbres infectés en 2029 ± 709 CFU auront présenté des symptômes d’ici 8 semaines. Les symptômes peuvent inclure une nage anormale, un manque de réponse au toucher, un haleté, un œdème ou un gaspillage observable. - Maintenir le poisson zèbre selon les normes communes.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mycobacterium marinum | American Type Culture Collection | ATCC 927 | |
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| Phosphate buffered saline tablets (PBS) | Sigma-Aldrich | P4417-50TAB | |
| Middlebrock 7H10 agar | BD, Thermo Fisher Scientific | 11799042 | |
| 3-aminobenzoic acid ethyl ester (pH 7.0) | Sigma-Aldrich | A5040 | |
| Omnican 100 30 G insulin needle | Braun | 9151133 | |
| 1 mL syringe | Henke Sass Wolf | 4010.200V0 |
