Overview
이 비디오는 성인용 제브라피시의 복강으로 해결책을 전달하는 방법인 관면 주사 기술을 설명합니다.
Protocol
1. 관연 주사를 가진 실험적인 M. 마리넘 감염
- 희석된 세균용 용액의 5μL 액적인 파이펫을 파라필름 필름에 넣고 액적을 30G 인슐린 바늘로 당깁니다.
- 실험에 5-8 개월 된 야생 형 물고기와 rag1----hu1999 돌연변이 물고기를 사용 하십시오. 탱크 물에 성인 얼룩말 물고기를 0.02 % 3-아미노 벤조산 에틸 에스테르 (pH 7.0)로 마취합니다. 물고기 복부 측면을 촉촉한 거품 플라스틱에 슬릿에 올려 놓습니다.
참고 : 래그 / - 돌연변이 물고기는 체세포 재조합을 겪고 기능성 T 및 B 세포를 생성 할 수 없습니다. - 골반 지느러미 사이에 바늘을 약 45° 각도로 주입합니다. 전체 개구부가 복강 내부에 있음을 관찰하기 위해 바늘을 위쪽으로 열어 두십시오. 세균 현탁액을 천천히 주입하고 조심스럽게 바늘을 제거합니다.
참고: 주사 시 물고기에서 빨간 트레이서가 누출되는 경우, 실험에서 물고기를 제외하십시오. - 주입 직후, 신선한 탱크 물로 복구 탱크로 물고기를 옮길.
- 7H10 플레이트에 세균현탁의 샘플을 복용하여 사용 중 세균성 알리쿼트로부터 15분마다 세균을 배양하고 5일 동안 29°C에서 박테리아를 배양하고 플레이트상에 콜로니를 세어 감염 용량을 확인한다.
- 생선의 웰빙을 정기적으로 확인하고 감염 의 증상으로 어떤 물고기를 안락사 3-aminobenzoic 산 에틸 에스테르의 농도 (pH 7.0).
참고: 약, 34± 15 CFU에 감염된 성인 제브라피시의 7%와 2029년 감염된 제브라피시의 30%± 709 CFU는 8주까지 증상이 나타날 것이다. 현상은 이상한 수영, 접촉에 대한 반응의 부족, 가스, 부종 또는 관찰 가능한 낭비를 포함할 수 있습니다. - 일반적인 기준에 따라 제브라피쉬를 유지합니다.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mycobacterium marinum | American Type Culture Collection | ATCC 927 | |
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| Phosphate buffered saline tablets (PBS) | Sigma-Aldrich | P4417-50TAB | |
| Middlebrock 7H10 agar | BD, Thermo Fisher Scientific | 11799042 | |
| 3-aminobenzoic acid ethyl ester (pH 7.0) | Sigma-Aldrich | A5040 | |
| Omnican 100 30 G insulin needle | Braun | 9151133 | |
| 1 mL syringe | Henke Sass Wolf | 4010.200V0 |
