Overview
Bu videoda, Yetişkin Zebra balıklarının karın boşluğuna çözeltiler sunmak için bir yöntem olan intraperitoneal enjeksiyon tekniği açıklanmaktadır.
Protocol
1. Deneysel M. Intraperitoneal Enjeksiyon ile Marinum Enfeksiyonu
- Seyreltilmiş bakteri çözeltisinin 5 μL'lik bir damlacığı bir parafilm filmi parçasına pipetlayın ve damlacığı 30 G insülin iğnesine çekin.
- Deney için 5-8 aylık yabani tip balık ve rag1−/−hu1999 mutant balık kullanın. Yetişkin zebra balıklarını tank suyunda %0,02 3-aminobenzoik asit etil ester (pH 7.0) ile uyuşturun. Balık ventral tarafını nemli köpüklü bir plastik üzerinde bir yarığa yerleştirin.
NOT: Rag-/- mutant balıklar somatik rekombinasyona uğrayamaz ve fonksiyonel T ve B hücreleri üretemezler. - İğneyi pelvik yüzgeçler arasına yaklaşık 45° açıyla enjekte edin. Tüm açıklığın karın boşluğunun içinde olduğunu gözlemlemek için iğneyi yukarı doğru açık tutun. Bakteri süspansiyonu yavaşça enjekte edin ve iğneyi dikkatlice çıkarın.
NOT: Kırmızı izleyicinin enjeksiyon sırasında balıktan sızması durumunda, balıkları deneyden hariç tutun. - Enjeksiyondan hemen sonra, balığı tatlı tank suyu ile bir geri kazanım tankına aktarın.
- Kullanılan bakteriyel aliquottan her 15 dakikada bir 7H10 plakalarında bakteri süspansiyonundan örnekler alın ve bakterileri 5 gün boyunca 29 °C'de kuluçkaya yatırın ve plakalardaki kolonileri sayarak enfeksiyon dozunu doğrulayın.
- Balığın refahını düzenli olarak kontrol edin ve enfeksiyon semptomları olan herhangi bir balığı% 0.02'den fazla 3 aminobenzoik asit etil ester konsantrasyonu ile ötenazileyin (pH 7.0).
NOT: Yaklaşık olarak, 34 ± 15 CFU ile enfekte olan yetişkin zebra balıklarının% 7'si ve 2029 ± 709 CFU ile enfekte olan zebra balıklarının% 30'unda 8 hafta boyunca semptomlar olacaktır. Semptomlar anormal yüzme, dokunmaya yanıt eksikliği, nefes darlığı, ödem veya gözle görülür israf içerebilir. - Zebra balıklarını ortak standartlara göre koruyun.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mycobacterium marinum | American Type Culture Collection | ATCC 927 | |
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| Phosphate buffered saline tablets (PBS) | Sigma-Aldrich | P4417-50TAB | |
| Middlebrock 7H10 agar | BD, Thermo Fisher Scientific | 11799042 | |
| 3-aminobenzoic acid ethyl ester (pH 7.0) | Sigma-Aldrich | A5040 | |
| Omnican 100 30 G insulin needle | Braun | 9151133 | |
| 1 mL syringe | Henke Sass Wolf | 4010.200V0 |
