ウサギの乳管内注射:ウサギの乳腺への興味のある溶液の局所的な配信

Overview

本ビデオでは、ウサギの乳腺管に目的の溶液を投与する技術を説明し、造影剤の高解像度超音波画像処理により送達を確認する。

Protocol

1. 術前準備

1. 各ウサギの体重を記録します。すべての前臨床試験と同様に、動物の体重を定期的に監視して潜在的な毒性を評価します。
2. ウサギを麻酔する前に、市販の超音波ゲルで50 mL円錐チューブを充填し、30 sの場合は500 x gで回転します。遠心分離が完了するとゲルに目に見える泡があってはならない。
3. グリコピロレートを0.1mg/kgの用量で皮下投与し、アセプロマジンを筋肉内で0.75mg/kgの用量で投与する。バイタルサインと行動を監視しながら鎮静剤が有効になるまで15〜20分待ちます。
   注: グリコピロレートは、徐脈を予防し、呼吸およびGI分泌を減少させる抗コリン作用剤である。アセプロマジンは麻酔の前投薬として機能する鎮静剤です。.
4. 35 mg/kg のケタミンと 5 mg/kg のキシラジンを麻酔薬として皮下投与する。しかし、オペレータがより経験豊富になり、より迅速に誘導内送達を達成できるように、薬剤投与量をケタミンの15mg/kg、皮下3mg/kgのキシラジンに減らします。これにより、麻酔の時間と動物が麻酔から回復するのに必要な時間が短縮されます。
5. 心拍数_{、SPO2、温度、}呼吸数、粘液膜の色を15分ごとに確認して文書化します。両眼に目の潤滑剤を塗布します。
   注: 適切な訓練を受け、その機関のIACUCによって承認された人員のみが麻酔を管理または監視する必要があります。獣医麻酔モニターの使用は、バイタルサインを得る際に役立つ可能性があり、推奨されます。しかし、獣医麻酔モニターは、15分ごとに動物を手動でチェックする必要性を置き換えるものではありません。獣医モニターの適切な使用については、製造元のマニュアルを参照してください。
6. 穏やかなつま先ピンチによって麻酔の発症を確認します。ウサギは続行する前に応答しない必要があります。
7. インジナル・ティートの3番目と4番目のペアの周りの領域でウサギの尾大腹部を慎重に剃ります。
8. 髪の大部分を取り除いた後、剃った領域に店頭の脱毛クリームを塗ります。ぬるま湯で濡らした湿ったペーパータオルを使って塗布後10分クリームを取り除きます。
   注: ウサギの皮は非常に壊れやすい/敏感です。脱毛クリームは10分以下で使用する必要があります。実際には、5分で「テストスポット」を試してみて、テストスポットが長い期間が必要であることを示す場合にのみ、より長く放置する方が安全です。
9. アルコール浸しガーゼパッドでエリアを拭き、注射部位をきれいにします。
10. 再循環暖かい水の毛布と吸収パッドが並ぶV字型のトラフにウサギをドーサムに置きます。

2. 造影剤の調製

1. メーカーの指示に従って、非標的造影試薬を再構成してください。ピペットを上下に軽く混ぜ合わせます。
   注: このプロトコルで使用される造影剤は、再構成後4〜6時間室温で安定である。各検索の間にバイアルをそっと揺らします。
   メモ: 必要なソリューションの量は、注入するダクトの数によって異なります。ウサギは、1つのティートあたり4つの管開口部を有し、0.2mLの溶液は、成人ニュージーランド白ウサギ(Oryctolaguniculus)の1つの管の木を満たすのに十分である。したがって、0.8 mLの総容量は、1つの乳腺に送達され得る。

3. インダクタルデリバリー

1. 注入する適切なティートを見つけます。3^番目と4^番目のインジュナル・ティートのペアは、動物がそのドーサム上に配置されたときに容易に視覚化されるため、推奨されます。
2. 22G針で1 mLルアーロック結核シリン注射器に無菌0.9%生理食い物の0.2 mLをロードします。生理食糸がシリンジに入ったら22G針を適切に処分し、滅菌25ゲージの針に交換します。ガーゼパッドで85%イソプロピルアルコールで静かに領域を拭きます。
3. 針のベベルを上げ、動物の体に対してシリンジを平行にして、針のベベルをティートの側面に挿入し、生理食動物の0.1〜0.2 mLをゆっくりと注入します。これにより、ダクタの開口部をより良く視覚化できます。
4. 1 mL ルアーロック結核シリン注射器に0.2 mLの注入液を積み込みます。
5. 親指と人差し指で軽く手を保持し、わずかに持ち上げて、眼内注射のためにそれを配置します。ウェアラブルな眼のルーペは、管の開口部を視覚化するのに役立つ可能性があります。
6. ティートの持ち上げられた位置を維持しながら、25Gの鈍先端の針を使用して目的のダクトを注意深くカニュールする。
7. カヌレーションの後、鈍い先端の注入針のハブにあるLuer-lockシリンジを、所定の位置にロックされるまでそっとねじります。
8. ティートを持ち上げ、溶液をゆっくりと注入して、ダクト内で急速に移動する流体によって引き起こされる潜在的な損傷を最小限に抑えます。溶液を注入する際に抵抗が存在する必要はありません。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1 mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2 mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Ketamine HCL 100 mg/mL	Animal Health International	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10 mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20 mg/mL	Animal Health International	20101547
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads