兔子内导注射：将感兴趣的解决方案本地化地输送到兔子乳腺中

Overview

在这段视频中，我们描述了一种将感兴趣的溶液导入兔子乳腺导管并确认通过对比剂的高分辨率超声成像进行传递的技术。

Protocol

1. 术前准备

1. 记录每只兔子的体重。与所有产前研究一样，定期监测动物体重，以评估潜在的毒性。
2. 在给兔子麻醉之前，用市售的超声凝胶填充一个50mL的圆锥管，在500×克的30年代旋转：离心完成后，凝胶中不应有可见的气泡。
3. 以0.1毫克/千克的剂量皮下施用甘油，以0.75毫克/千克的剂量在肌肉内施用丙丙氨酸。等待15-20分钟镇静剂生效，同时监测生命体征和行为。
   注： 甘油酸酯是一种抗胆碱性剂，可预防心肌梗塞，减少呼吸道和胃肠道分泌物。丙丙氨酸是一种镇静剂，作为麻醉的预药。
4. 将35毫克/千克氯胺酮和5毫克/千克锡拉津皮下作为麻醉剂施用。然而，随着操作员经验的丰富，能够更快地完成导管内输送，将药物剂量降低到15毫克/千克氯胺酮和3毫克/千克的木兰氨酸皮下：这将缩短麻醉时间和动物从麻醉中恢复所需的时间。
5. 每 15 分钟检查并记录心率_{、SPO 2、}温度、呼吸速率和粘膜颜色。将眼润滑剂涂在两只眼睛上。
   注： 只有经过适当培训并经其机构IACUC批准的人员才能管理或监测麻醉。使用兽医麻醉监测器可以帮助获得生命体征，建议使用。然而，兽医麻醉监测器不能取代每15分钟手动检查一次动物的需要。请参阅制造商关于正确使用兽医监视器的说明。
6. 用温柔的脚趾捏来验证麻醉的开始：兔子在继续之前应该是没有反应的。
7. 小心地剃兔子的腹腔，在第三和第四对内毛奶嘴周围。
8. 去除大部分头发后，在剃须区域涂抹非处方脱毛霜。使用用温水湿润的湿纸巾在应用后 10 分钟取出奶油。
   注： 兔子皮非常脆弱/敏感。脱毛霜的使用应不超过10分钟。事实上，在 5 分钟内尝试"测试点"更安全，只有在测试点指示需要较长时间时才在较长时间内离开。
9. 用酒精浸泡的纱布垫擦拭区域，以清洁注射部位。
10. 将兔子放在它的背上，放在一个V形的槽里，里面衬着一条循环的温水毯和一个吸水垫。

2. 对比剂的准备

1. 根据制造商的说明重组非靶向对比试剂。派珀特上下轻轻地混合。
   注： 此协议中使用的对比剂在重组后的室温下稳定 4 - 6 小时。在每次检索之间轻轻摇动小瓶。
   注： 所需的溶液量将取决于要注入的管道数量。兔子每只奶嘴有4个导管开口，0.2 mL的溶液足以填满新西兰成年白兔（奥里托拉古斯库鲁斯）的一棵导管树。因此，总容量为 0.8 mL 可交付给一个乳腺。

3. 导管内分娩

1. 找到合适的奶嘴注射;建议使用^第3和第4对内分茶，因为当动物被放置在它的躯干上时，它们很容易被可视化。
2. 用 22 G 针将 0.2 mL 的无菌 0.9% 盐水加载到 1 mL Luer 锁结块素注射器中。盐水进入注射器后，正确处理 22 G 针头，代之以无菌 25 口径针头。用纱布垫上 85% 的异丙醇轻轻擦拭区域。
3. 随着针的斜面和注射器与动物的身体平行，将针的斜面插入奶嘴的侧面，慢慢注入0.1-0.2 mL的盐水：这将允许更好的导管开口的可视化。
4. 将 0.2 mL 的注射溶液加载到 1 mL Luer 锁块茎素注射器中。
5. 用拇指和食指轻轻握住奶嘴，轻轻抬起，将其定位为导管注射：可穿戴的眼露可能有助于可视化导管开口。
6. 在保持奶嘴的提升位置的同时，使用 25 G 钝尖针小心地调节兴趣管道。
7. 罐装后，轻轻扭动钝尖输液针中心上的 Luer 锁注射器，直到锁定到位。
8. 抬起奶嘴，慢慢注射溶液，以尽量减少管道内快速移动的液体可能造成的损害：在注射溶液时，任何时候都不应有阻力。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1 mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2 mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Ketamine HCL 100 mg/mL	Animal Health International	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10 mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20 mg/mL	Animal Health International	20101547
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads