Kaninchen intraduktive Injektion: Lokalisierte Lieferung der Lösung von Interesse in die Kaninchen Brustdrüse

Overview

In diesem Video beschreiben wir eine Technik der Verabreichung einer Lösung von Interesse in den Brustkanal eines Kaninchens und bestätigen die Lieferung durch hochauflösende Ultraschall-Bildgebung von Kontrastmitteln.

Protocol

1. Präoperative Vorbereitung

1. Zeichnen Sie das Körpergewicht jedes Kaninchens auf. Wie bei allen präklinischen Studien, überwachen Tiergewichte regelmäßig, um potenzielle Toxizität zu bewerten.
2. Vor der Anästhesisierung des Kaninchens, füllen Sie ein 50 ml kegelförmiges Rohr mit handelsüblichen Ultraschallgel und drehen Sie bei 500 x g für 30 s; es sollte keine sichtbaren Blasen im Gel nach Abschluss der Zentrifugation geben.
3. Glycopyrrolat subkutan in einer Dosis von 0,1 mg/kg und Acepromazin intramuskulär in einer Dosis von 0,75 mg/kg verabreichen. Warten Sie 15-20 min, bis das Beruhigungsmittel wirksam wird, während vitale Anzeichen und Verhalten überwacht werden.
   HINWEIS: Glycopyrrolat ist ein anticholinergeMittel, das Bradykardie verhindert und Atem- und GI-Sekrete reduziert. Acepromazin ist ein Beruhigungsmittel, das als Prämedikation für die Anästhesie dient.
4. 35 mg/kg Ketamin und 5 mg/kg Xylazin subkutan als Anästhetikum verabreichen. Jedoch, wie der Bediener wird erfahrener und kann die intrauktale Lieferung schneller zu erreichen, verringern Sie die Dosierungen des Arzneimittels auf 15 mg/kg Ketamin und 3 mg/kg Xylazin subkutan; dies verkürzt die Anästhesiezeit und die Zeit, die das Tier benötigt, um sich von der Anästhesie zu erholen.
5. Überprüfen und dokumentieren Sie die Herzfrequenz, SPO_2, Temperatur, Atemfrequenz und Schleimhautfarbe alle 15 min. Augenschmiermittel auf beide Augen auftragen.
   HINWEIS: Nur Personal, das eine angemessene Ausbildung durchlaufen hat und vom IACUC seiner Institution zugelassen wurde, sollte die Anästhesie verwalten oder überwachen. Die Verwendung eines Tieranästhesiemonitors kann bei der Akquise von Vitalzeichen helfen und wird empfohlen. Der Veterinäranästhesiemonitor ersetzt jedoch nicht die Notwendigkeit, das Tier alle 15 min manuell zu kontrollieren. Siehe die Anweisungen des Herstellers für die ordnungsgemäße Verwendung eines Veterinärmonitors.
6. Überprüfen Sie den Beginn der Anästhesie durch eine sanfte Zehenprise; das Kaninchen sollte nicht ansprechbar sein, bevor es fortfährt.
7. Rasieren Sie vorsichtig den kaudalen Bauch des Kaninchens in der Gegend um das dritte und vierte Paar Leistenzitzen.
8. Wenn der Großteil der Haare entfernt ist, tragen Sie eine rezeptfreie Haarentfernungscreme auf den rasierten Bereich auf. Entfernen Sie die Creme 10 min nach dem Auftragen mit feuchten Papiertüchern mit warmem Wasser benetzt.
   HINWEIS: Kaninchenhaut ist sehr zerbrechlich/empfindlich. Die Haarentfernungscreme sollte nicht mehr als 10 min verwendet werden. In der Tat ist es sicherer, einen "Testplatz" in 5 min zu versuchen und nur länger zu verlassen, wenn Testpunkt zeigt eine längere Zeitzeit erforderlich ist.
9. Wischen Sie den Bereich mit alkoholgetränkten Gazepads ab, um die Injektionsstelle zu reinigen.
10. Legen Sie das Kaninchen auf seinen Dorsum in einem v-förmigen Trog, der mit einer umlaufenden Warmwasserdecke und einem saugfähigen Pad ausgekleidet ist.

2. Vorbereitung des Kontrastmittels

1. Rekonstituieren Sie das nicht zielgerichtete Kontrastreagenz gemäß den Anweisungen des Herstellers. Pipette sanft nach oben und unten zu mischen.
   HINWEIS: Das in diesem Protokoll verwendete Kontrastmittel ist bei Raumtemperatur für 4 - 6 h nach Rekonstitution stabil. Schaukeln Sie die Durchstechflasche vorsichtig zwischen jedem Abruf.
   ANMERKUNG: Das benötigte Lösungsvolumen hängt von der Anzahl der zu injizierenden Kanäle ab. Das Kaninchen hat 4 duktale Öffnungen pro Zitzen, und 0,2 ml Lösung ist ausreichend, um einen duktalen Baum eines erwachsenen neuseeländischen Weißen Kaninchens (Oryctolaguscuniculus) zu füllen. So kann ein Gesamtvolumen von 0,8 ml an eine Brustdrüse abgegeben werden.

3. Intraduktive Lieferung

1. Suchen Sie die entsprechenden Zitzen, die injiziert werden sollen; Die^3. und^4. Paar Leistenzitzen werden empfohlen, da sie leicht visualisiert werden können, wenn das Tier auf seinem Dorsum positioniert ist.
2. 0,2 ml sterile 0,9% Saline in eine 1 ml Luer-Lock Tuberkulinspritze mit einer 22 G Nadel geben. Entsorgen Sie die 22 G Nadel richtig, sobald sich die Saline in der Spritze befindet, und ersetzen Sie sie durch eine sterile 25-Spur-Nadel. Wischen Sie den Bereich vorsichtig mit 85% Isopropylalkohol auf einem Gazepad ab.
3. Mit der Nadelnadelabschrägung und der Spritze parallel zum Körper des Tieres, legen Sie die Nadelnadel in die Seite der Zitzen ein und injizieren Sie langsam 0,1-0,2 ml Saline; dies ermöglicht eine bessere Visualisierung der kanalischen Öffnungen.
4. 0,2 ml Injektionslösung in eine 1 ml Luer-Lock-Tuberkulinspritze geben.
5. Halten Sie die Zitze vorsichtig mit dem Daumen und Zeigefinger und heben Sie sie leicht an, um sie für die intrauktale Injektion zu positionieren; eine tragbare Augenlupe kann bei der Visualisierung der duktalen Öffnungen helfen.
6. Unter Beibehaltung der angehobenen Position der Zitzen kann man den Kanal mit einer 25 G stumpfen Spitzennadel vorsichtig annieren.
7. Nach der Cannulation die Luer-Lock-Spritze vorsichtig an der Nabe der stumpfen Infusionsnadel drehen, bis sie an Ort und Stelle verriegelt ist.
8. Heben Sie die Zitzen an und injizieren Sie die Lösung langsam, um potenzielle Schäden zu minimieren, die durch schnell bewegte Flüssigkeit im Kanal verursacht werden; zu keinem Zeitpunkt sollte es Widerstand bei der Injektion der Lösung geben.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1 mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2 mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Ketamine HCL 100 mg/mL	Animal Health International	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10 mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20 mg/mL	Animal Health International	20101547
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads