Kanin intraduktal injektion: Lokaliserad leverans av lösning av intresse till kanin mammary körtel

Overview

I den här videon beskriver vi en teknik för att administrera en lösning av intresse i bröstkanalen hos en kanin och bekräfta leveransen av högupplöst ultraljud imaging av kontrastmedel.

Protocol

1. Preoperativ förberedelse

1. Registrera kroppsvikten hos varje kanin. Som med alla prekliniska studier, övervaka djurvikter regelbundet för att bedöma potentiell toxicitet.
2. Innan du bedövar kaninen, fyll ett 50 ml koniskt rör med kommersiellt tillgänglig ultraljudsgel och snurra vid 500 x g för 30 s; Det får inte finnas några synliga bubblor i gelén när centrifugeringen är klar.
3. Administrera glykoyrolat subkutant vid en dos på 0, 1 mg/kg och acepromazin intramuskulärt vid en dos på 0, 75 mg/kg. Vänta 15-20 min på att lugnande medel ska träda i kraft medan du övervakar vitala tecken och beteende.
   OBS: Glycopyrrolate är ett antikinerga medel som förhindrar bradykardi och minskar andnings- och GI-sekret. Acepromazin är ett lugnande medel som fungerar som en övermedicinering för anestesi.
4. Administrera 35 mg/kg ketamin och 5 mg/kg xylazin subkutant som bedövningsmedel. Men eftersom operatören blir mer erfaren och kan utföra intraduktal leverans snabbare, minska läkemedelsdoserna till 15 mg/kg ketamin och 3 mg/kg xylazin subkutant; Detta kommer att förkorta anestesitiden och den tid som krävs för att djuret ska återhämta sig från anestesi.
5. Kontrollera och dokumentera hjärtfrekvensen, SPO_2, temperatur, andningshastighet och slemmembranfärg var 15: e minut. Applicera ögonsmörjmedel på båda ögonen.
   OBS: Endast personal som har genomgått lämplig utbildning och som har godkänts av sin institutions IACUC bör administrera eller övervaka anestesi. Användningen av en veterinär anestesi övervakare kan bidra till att förvärva vitala tecken och rekommenderas. Veterinäranestesiövervakaren ersätter dock inte behovet av att manuellt kontrollera djuret var 15: e minut. Se tillverkarens anvisningar för korrekt användning av en veterinärmonitor.
6. Kontrollera uppkomsten av anestesi genom en mild tå nypa; kaninen ska vara icke-lyhörd innan den fortsätter.
7. Raka försiktigt kaninens kaudala buk i området runt det tredje och fjärde paret inguinala spenar.
8. Med majoriteten av håret borttaget, applicera en over-the-counter hårborttagningskräm på det rakade området. Ta bort grädden 10 min efter applicering med fuktiga pappershanddukar fuktade med varmt vatten.
   OBS: Kaninhuden är mycket ömtålig/känslig. Hårborttagningskrämen ska användas i högst 10 minuter. I själva verket är det säkrare att prova en "testplats" på 5 min och bara lämna på längre om testplatsen indikerar att en längre tidsperiod behövs.
9. Torka området med alkoholdränkta gasvävskuddar för att rengöra injektionsstället.
10. Placera kaninen på sin dorsum i ett v-format tråg fodrat med en återcirkulerande varmvattenfilt och en absorberande kudde.

2. Förberedelse av kontrastmedlet

1. Rekonstruera det icke-riktade kontrastreagenset enligt tillverkarens instruktioner. Pipett upp och ner försiktigt för att blanda.
   OBS: Kontrastmedlet som används i detta protokoll är stabilt vid rumstemperatur i 4- 6 timmar efter rekonstitution. Vagga försiktigt injektionsflaskan mellan varje hämtning.
   OBS: Vilken lösningsvolym som krävs beror på antalet kanaler som ska injiceras. Kaninen har 4 dukala öppningar per spen, och 0,2 ml lösning är tillräckligt för att fylla ett duktalträd av en vuxen nyzeeländsk vit kanin(Oryctolaguscuniculus). Således kan en total volym på 0,8 ml levereras till en bröstkörtel.

3. Intraduktiv leverans

1. Placera lämpliga spenar som ska injiceras; de 3^rd och^{4 4 par} av ljumskspenor rekommenderas, eftersom de lätt visualiseras när djuret är placerat på sin dorsum.
2. Ladda 0,2 ml steril 0,9% saltlösning i en 1 ml Luer-lock tuberkulinspruta med en 22 G nål. Kassera 22 G-nålen ordentligt när saltlösningen är i sprutan och ersätt den med en steril 25-gauge nål. Torka försiktigt området med 85% isopropylalkohol på en gasväv.
3. Med nålens avfasning upp och sprutan parallellt med djurets kropp, sätt in nålens avfasning i sidan av spenen och injicera långsamt 0,1-0,2 ml saltlösning; Detta möjliggör bättre visualisering av de dukala öppningarna.
4. Ladda 0,2 ml injektionslösning i en 1 ml Luer-lock tuberkulinspruta.
5. Håll spenen försiktigt med tummen och pekfingret och lyft det något för att placera den för den intraduktiva injektionen; En bärbar okulär lupp kan bidra till att visualisera de dukala öppningarna.
6. Samtidigt som du behåller spenens upplyfta position, kan man försiktigt kanylerar kanalen av intresse med en 25 G trubbig spetsnål.
7. Efter cannulation vrider du försiktigt Luer-låssprutan på navet på infusionsnålen med trubbig spets tills den är låst på plats.
8. Lyft spenen och injicera lösningen långsamt för att minimera potentiella skador som orsakas av snabbt rörlig vätska i kanalen; Det bör aldrig finnas motstånd när lösningen injiceras.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1 mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2 mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Ketamine HCL 100 mg/mL	Animal Health International	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10 mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20 mg/mL	Animal Health International	20101547
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads