Injection intraductrice de lapin : Livraison localisée de la solution d’intérêt dans la glande mammaire de lapin

Overview

Dans cette vidéo, nous décrivons une technique d’administration d’une solution d’intérêt dans le conduit mammaire d’un lapin et confirmons la livraison par imagerie ultrasonique haute résolution des agents de contraste.

Protocol

1. Préparation préopératoire

1. Enregistrez le poids corporel de chaque lapin. Comme pour toutes les études précliniques, surveillez régulièrement le poids des animaux afin d’évaluer la toxicité potentielle.
2. Avant d’anesthésier le lapin, remplissez un tube conique de 50 mL avec du gel à ultrasons disponible dans le commerce et tournez à 500 x g pendant 30 s; il ne devrait pas y avoir de bulles visibles dans le gel à la fin de la centrifugation.
3. Administrer le glycopyrrolate sous-cutanée à une dose de 0,1 mg/kg et l’acépromazine par voie intramusculaire à une dose de 0,75 mg/kg. Attendez 15-20 min pour que le sédatif prenne effet tout en surveillant les signes vitaux et le comportement.
   REMARQUE: Le glycopyrrolate est un agent anti-cholinergique qui prévient la bradycardie et réduit les sécrétions respiratoires et gastro-intestinales. L’acépromazine est un sédatif qui sert de prémédication pour l’anesthésie.
4. Administrer 35 mg/kg de kétamine et 5 mg/kg de xylazine sous-cutanée sous anesthésie. Cependant, comme l’opérateur devient plus expérimenté et peut accomplir l’accouchement intraductal plus rapidement, diminuer les doses de médicaments à 15 mg/kg de kétamine et 3 mg/kg de xylazine sous-cutanée; cela raccourcira le temps d’anesthésie et le temps nécessaire pour que l’animal se remette de l’anesthésie.
5. Vérifiez et documentez la fréquence cardiaque, le SPO_{2, la} température, la fréquence respiratoire et la couleur de la muqueuse toutes les 15 minutes. Appliquer le lubrifiant pour les yeux sur les deux yeux.
   REMARQUE: Seuls les membres du personnel qui ont suivi une formation appropriée et qui ont été approuvés par l’IACUC de leur établissement devraient administrer ou surveiller l’anesthésie. L’utilisation d’un moniteur d’anesthésie vétérinaire peut aider à l’acquisition de signes vitaux et est recommandée. Le moniteur d’anesthésie vétérinaire, cependant, ne remplace pas la nécessité de vérifier manuellement l’animal toutes les 15 minutes. Consultez les instructions du fabricant pour l’utilisation correcte d’un moniteur vétérinaire.
6. Vérifiez l’apparition de l’anesthésie par une légère pincement des pieds; le lapin doit être non réactif avant de continuer.
7. Rasez soigneusement l’abdomen caudal du lapin dans la zone autour des troisième et quatrième paires de trayons inguinaux.
8. Avec la majorité des cheveux enlevés, appliquer une crème d’épilation en vente libre sur la zone rasée. Retirer la crème 10 min après l’application à l’aide de serviettes en papier humide mouillées avec de l’eau chaude.
   REMARQUE: La peau de lapin est très fragile/sensible. La crème d’épilation ne doit pas être utilisée pendant plus de 10 min. En fait, il est plus sûr d’essayer un « point d’essai » à 5 minutes et de ne partir plus longtemps si le point d’essai indique qu’une plus longue période de temps est nécessaire.
9. Essuyez la zone avec des tampons de gaze imbibés d’alcool pour nettoyer le site d’injection.
10. Placez le lapin sur son dorsum dans une auge en forme de V tapissée d’une couverture d’eau chaude recirculation et d’un tampon absorbant.

2. Préparation de l’agent de contraste

1. Reconstituer le réaccente de contraste non ciblé selon les instructions du fabricant. Pipette de haut en bas doucement pour mélanger.
   REMARQUE: L’agent de contraste utilisé dans ce protocole est stable à température ambiante pendant 4 à 6 h après la reconstitution. Bercer doucement le flacon entre chaque récupération.
   REMARQUE: Le volume de solution requis dépendra du nombre de conduits à injecter. Le lapin a 4 ouvertures ductal par tét, et 0,2 mL de solution est suffisant pour remplir un arbre ductal d’un lapin blanc adulte de Nouvelle-Zélande (Oryctolaguscuniculus). Ainsi, un volume total de 0,8 mL peut être livré à une glande mammaire.

3. Livraison intraductrice

1. Localiser les trayons appropriés à injecter; les^3ème et 4ème^paires de trayons inguinaux sont recommandées, car elles sont facilement visualisées lorsque l’animal est positionné sur son dorsum.
2. Chargez 0,2 mL de solution saline stérile de 0,9 % dans une seringue à tuberculine de 1 mL à verrouillage Luer avec une aiguille de 22 G. Disposer correctement de l’aiguille de 22 G une fois que la solution saline est dans la seringue et la remplacer par une aiguille stérile de calibre 25. Essuyer délicatement la zone avec 85% d’alcool d’isopropyle sur un tampon de gaze.
3. Avec le biseau de l’aiguille vers le haut et la seringue parallèle au corps de l’animal, insérez le biseau de l’aiguille dans le côté de la tétine et injectez lentement 0,1-0,2 mL de solution saline; cela permettra une meilleure visualisation des ouvertures ductal.
4. Chargez 0,2 mL de solution d’injection dans une seringue tuberculine de 1 mL à verrouillage Luer.
5. Tenez doucement la tétronée avec le pouce et l’index et soulevez-la légèrement pour la positionner pour l’injection intraductrice; une loupe oculaire portable peut aider à visualiser les ouvertures ductal.
6. Tout en maintenant la position levée de la tét, cannulate soigneusement le conduit d’intérêt à l’aide d’une aiguille à pointe émoussée de 25 G.
7. Après cannulation, tordez doucement la seringue Luer-lock sur le moyeu de l’aiguille d’infusion à pointe émoussée jusqu’à ce qu’elle soit verrouillée en place.
8. Soulevez la tét et injectez la solution lentement pour minimiser les dommages potentiels causés par le mouvement rapide du liquide dans le conduit; à aucun moment il ne devrait y avoir de résistance lors de l’injection de la solution.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1 mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2 mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Ketamine HCL 100 mg/mL	Animal Health International	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10 mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20 mg/mL	Animal Health International	20101547
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads