Injeção Intradutal de Coelho: Entrega localizada de solução de interesse na glândula mamária de coelho

Overview

Neste vídeo descrevemos uma técnica de administração de uma solução de interesse no ducto mamário de um coelho e confirmamos a entrega por ultrassom de alta resolução de agentes de contraste.

Protocol

1. Preparação pré-operatória

1. Grave o peso corporal de cada coelho. Como em todos os estudos pré-clínicos, monitore os pesos dos animais regularmente para avaliar a toxicidade potencial.
2. Antes de anestesiar o coelho, encha um tubo cônico de 50 mL com gel de ultrassom comercialmente disponível e gire a 500 x g para 30 s; não deve haver bolhas visíveis no gel após a conclusão da centrifugação.
3. Administre a glicocopiato subcutânea a uma dose de 0,1 mg/kg e acepromazina intramuscularmente a uma dose de 0,75 mg/kg. Espere 15-20 min para que o sedativo faça efeito enquanto monitora sinais vitais e comportamento.
   NOTA: Glycopyrrolate é um agente anti-colinargic que previne bradicardia e reduz secreções respiratórias e gi. Acepromazina é um sedativo que serve como premedicção para anestesia.
4. Administre 35 mg/kg de cetamina e 5 mg/kg de xilazina subcutânea como anestésico. No entanto, à medida que o operador se torna mais experiente e pode realizar a entrega intradutal mais rapidamente, diminuir as doses de droga para 15 mg/kg de cetamina e 3 mg/kg de xilazina subcutânea; isso reduzirá o tempo de anestesia e o tempo necessário para que o animal se recupere da anestesia.
5. Verifique e documente a frequência cardíaca, SPO_2, temperatura, taxa respiratória e cor da membrana muco a cada 15 minutos. Aplique lubrificante ocular em ambos os olhos.
   NOTA: Somente pessoas que passaram por treinamento adequado e foram aprovadas pelo IACUC de sua instituição devem administrar ou monitorar a anestesia. O uso de um monitor de anestesia veterinária pode auxiliar na aquisição de sinais vitais e é recomendado. O monitor de anestesia veterinária, no entanto, não substitui a necessidade de verificar manualmente o animal a cada 15 minutos. Consulte as instruções do fabricante para o uso adequado de um monitor veterinário.
6. Verifique o aparecimento da anestesia por uma pitada suave do dedo do pé; o coelho deve ser não responsivo antes de continuar.
7. Raspe cuidadosamente o abdômen caudal do coelho na área em torno do terceiro e quarto pares de inguinais.
8. Com a maior parte do cabelo removido, aplique um creme de depilação over-the-counter na área raspada. Retire o creme 10 minutos após a aplicação usando toalhas de papel úmidas molhadas com água morna.
   NOTA: A pele de coelho é muito frágil/sensível. O creme de depilação deve ser usado por no máximo 10 minutos. Na verdade, é mais seguro tentar um "ponto de teste" em 5 minutos e só sair por mais tempo se o ponto de teste indicar que um período de tempo mais longo é necessário.
9. Limpe a área com gazes encharcadas de álcool para limpar o local da injeção.
10. Coloque o coelho em seu dorso em um cocho em forma de V forrado com um cobertor de água morna recirculante e uma almofada absorvente.

2. Preparação do Agente de Contraste

1. Reconstituir o reagente de contraste não direcionado de acordo com as instruções do fabricante. Pipeta para cima e para baixo suavemente para misturar.
   NOTA: O agente de contraste usado neste protocolo é estável à temperatura ambiente por 4 - 6 h após a reconstituição. Balance suavemente o frasco entre cada recuperação.
   NOTA: O volume de solução necessário dependerá do número de dutos a serem injetados. O coelho tem 4 aberturas ductais por, e 0,2 mL de solução é suficiente para encher uma árvore ductal de um coelho branco adulto da Nova Zelândia(Oryctolaguscuniculus). Assim, um volume total de 0,8 mL pode ser entregue em uma glândula mamária.

3. Entrega intradutor

1. Localizar as apropriadas a serem injetadas; ^{recomenda-se 3º} e^4º pares de inguinais, pois são facilmente visualizados quando o animal está posicionado em seu dorso.
2. Carregue 0,2 mL de soro fisiológico estéril de 0,9% em uma seringa de tuberculina luer-lock de 1 mL com uma agulha de 22 G. Descarte corretamente a agulha de 22 G uma vez que o soro fisiológico esteja na seringa e substitua-a por uma agulha de calibre 25 estéril. Limpe suavemente a área com 85% de álcool isopropílico em uma gaze.
3. Com o bisel da agulha para cima e a seringa paralela ao corpo do animal, insira o chanfrado da agulha na lateral da e injete lentamente 0,1-0,2 mL de soro fisiológico; isso permitirá uma melhor visualização das aberturas ductais.
4. Carregue 0,2 mL de solução de injeção em uma seringa de tuberculina luer-lock de 1 mL.
5. Segure a suavemente com o polegar e o dedo indicador e levante-o ligeiramente para posicioná-lo para a injeção intraducional; uma lupa ocular vestível pode ajudar a visualizar as aberturas ductais.
6. Mantendo a posição levantada da, cannule cuidadosamente o duto de interesse usando uma agulha de ponta sem corte de 25 G.
7. Após a cannulação, torça suavemente a seringa Luer-lock no cubo da agulha de infusão de ponta sem corte até que esteja travada no lugar.
8. Levante a e injete a solução lentamente para minimizar os danos potenciais causados pelo fluido em movimento rápido dentro do duto; em nenhum momento deve haver resistência ao injetar a solução.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1 mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2 mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Ketamine HCL 100 mg/mL	Animal Health International	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10 mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20 mg/mL	Animal Health International	20101547
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads