Iniezione Intraductale di Coniglio: Consegna localizzata della soluzione di interesse nella ghiandola mammaria del coniglio

Overview

In questo video descriviamo una tecnica di somministrazione di una soluzione di interesse nel condotto mammario di un coniglio e confermiamo la consegna mediante imaging ad ultrasuoni ad alta risoluzione di agenti di contrasto.

Protocol

1. Preparazione preoperatoria

1. Registrare il peso corporeo di ogni coniglio. Come per tutti gli studi preclinici, monitorare regolarmente i pesi degli animali per valutare la potenziale tossicità.
2. Prima di anestetizzare il coniglio, riempire un tubo conico da 50 ml con gel ad ultrasuoni disponibile in commercio e girare a 500 x g per 30 s; non ci dovrebbero essere bolle visibili nel gel al completamento della centrifugazione.
3. Somministrare glicopirrolato per via sottocutanea ad una dose di 0,1 mg/kg e acepromazina per via intramuscolare ad una dose di 0,75 mg/kg. Attendere 15-20 minuti affinché il sedativo sia efficace durante il monitoraggio dei segni vitali e del comportamento.
   NOTA: Il glicopirrolato è un agente anticolinergico che previene la bradicardia e riduce le secrezioni respiratorie e gastrointestinali. L'acepromazina è un sedativo che funge da premedicazione per l'anestesia.
4. Somministrare 35 mg/kg di chetamina e 5 mg/kg di xiazina per via sottocutanea come anestetico. Tuttavia, man mano che l'operatore diventa più esperto e può realizzare più rapidamente l'erogazione intraduttale, ridurre i dosaggi del farmaco a 15 mg / kg di chetamina e 3 mg / kg di xiazina per via sottocutanea; ciò ridurrà il tempo di anestesia e il tempo necessario affinché l'animale si riprenda dall'anestesia.
5. Controllare e documentare la frequenza cardiaca, SPO_2, la temperatura, la frequenza respiratoria e il colore della membrana del muco ogni 15 minuti. Applicare il lubrificante per gli occhi su entrambi gli occhi.
   NOTA: Solo il personale che ha seguito una formazione adeguata e che è stato approvato dalla IACUC del proprio istituto deve amministrare o monitorare l'anestesia. L'uso di un monitor per anestesia veterinaria può aiutare ad acquisire segni vitali ed è raccomandato. Il monitor dell'anestesia veterinaria, tuttavia, non sostituisce la necessità di controllare manualmente l'animale ogni 15 minuti. Consultare le istruzioni del produttore per l'uso corretto di un monitor veterinario.
6. Verificare l'inizio dell'anestesia con un dito delicato; il coniglio dovrebbe essere non reattivo prima di continuare.
7. Radere con cura l'addome caudale del coniglio nell'area intorno alla terza e alla quarta coppia di capesetti inguinali.
8. Con la maggior parte dei capelli rimossi, applicare una crema per la depilazione da banco sull'area rasata. Rimuovere la crema 10 minuti dopo l'applicazione utilizzando asciugamani di carta umidi bagnati con acqua tiepida.
   NOTA: La pelle di coniglio è molto fragile / sensibile. La crema per la depilazione deve essere utilizzata per non più di 10 minuti. In effetti, è più sicuro provare un "punto di prova" a 5 minuti e lasciare più a lungo solo se il punto di prova indica che è necessario un periodo di tempo più lungo.
9. Pulire l'area con cuscinetti di garza imbevuti di alcol per pulire il sito di iniezione.
10. Posizionare il coniglio sul suo dorsum in un trogolo a forma di V foderato con una coperta di acqua calda ricircolante e un cuscinetto assorbente.

2. Preparazione dell'agente di contrasto

1. Ricostituire il reagente di contrasto non mirato secondo le istruzioni del produttore. Pipetta su e giù delicatamente da mescolare.
   NOTA: L'agente di contrasto utilizzato in questo protocollo è stabile a temperatura ambiente per 4 - 6 ore dopo la ricostituzione. Scuotere delicatamente il flaconcino tra ogni recupero.
   NOTA: Il volume della soluzione richiesta dipenderà dal numero di condotti da iniettare. Il coniglio ha 4 aperture duttali per teat e 0,2 mL di soluzione è sufficiente per riempire un albero duttale di un coniglio bianco adulto della Nuova Zelanda(Oryctolaguscuniculus). Pertanto, un volume totale di 0,8 mL può essere consegnato ad una ghiandola mammaria.

3. Consegna intraduttale

1. Individuare le tettarette appropriate da iniettare; si raccomandano le 3^e 4^th paia di capesante inguinali, in quanto sono facilmente visualizzabili quando l'animale è posizionato sul suo dorsum.
2. Caricare 0,2 ml di soluzione salina sterile allo 0,9% in una siringa tubercolina luer-lock da 1 ml con un ago da 22 G. Smaltire correttamente l'ago da 22 G una volta che la soluzione salina è nella siringa e sostituirla con un ago sterile calibro 25. Pulire delicatamente l'area con l'85% di alcol isopropile su una pastiglia di garza.
3. Con la smussatura dell'ago e la siringa parallela al corpo dell'animale, inserire la smussatura dell'ago sul lato del tettaro e iniettare lentamente 0,1-0,2 ml di soluzione salina; ciò consentirà una migliore visualizzazione delle aperture duttali.
4. Caricare 0,2 ml di soluzione di iniezione in una siringa tubercocina luer-lock da 1 ml.
5. Tenere delicatamente il tettaro con il pollice e l'indice e sollevarlo leggermente per posizionarlo per l'iniezione intraduttale; un loupe oculare indossabile può aiutare a visualizzare le aperture duttali.
6. Pur mantenendo la posizione sollevata del tettaro, può attenuare con cura il condotto di interesse utilizzando un ago a punta smussata da 25 G.
7. Dopo la cannulazione, ruotare delicatamente la siringa Luer-lock sul mozzo dell'ago per infusione con punta smussata fino a quando non è bloccato in posizione.
8. Sollevare il teat e iniettare lentamente la soluzione per ridurre al minimo i potenziali danni causati dal fluido in rapido movimento all'interno del condotto; in nessun momento dovrebbe esserci resistenza durante l'iniezione della soluzione.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1 mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2 mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Ketamine HCL 100 mg/mL	Animal Health International	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10 mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20 mg/mL	Animal Health International	20101547
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads