Inyección intraductal del conejo: Entrega localizada de la solución de interés en la glándula mamaria del conejo

Overview

En este vídeo describimos una técnica de administración de una solución de interés en el conducto mamaria de un conejo y confirmamos la entrega mediante imágenes de ultrasonido de alta resolución de agentes de contraste.

Protocol

1. Preparación preoperatoria

1. Registra el peso corporal de cada conejo. Al igual que con todos los estudios preclínicos, monitoree los pesos de los animales regularmente para evaluar la toxicidad potencial.
2. Antes de anestesiar el conejo, llene un tubo cónico de 50 ml con gel de ultrasonido disponible comercialmente y gire a 500 x g durante 30 s; no debe haber burbujas visibles en el gel al completar la centrifugación.
3. Administrar glicoparrroato por vía subcutánea a una dosis de 0,1 mg/kg y acepromazina por vía intramuscular a una dosis de 0,75 mg/kg. Espere 15-20 minutos para que el sedante entre en vigor mientras monitorea los signos vitales y el comportamiento.
   NOTA: El glicoparato es un agente anticolinérgico que previene la bradicardia y reduce las secreciones respiratorias y gastrointestinales. La acepromazina es un sedante que sirve como premedicación para la anestesia.
4. Administrar 35 mg/kg de ketamina y 5 mg/kg de xilazina subcutáneamente como anestésico. Sin embargo, a medida que el operador se vuelve más experimentado y puede lograr la entrega intraductal más rápidamente, disminuir las dosis de drogas a 15 mg/kg de ketamina y 3 mg/kg de xilazina subcutáneamente; esto acortará el tiempo de anestesia y el tiempo necesario para que el animal se recupere de la anestesia.
5. Compruebe y documente la frecuencia cardíaca, la OSP_2, la temperatura, la frecuencia respiratoria y el color de la membrana mucosa cada 15 minutos. Aplique lubricante para los ojos en ambos ojos.
   NOTA: Sólo el personal que haya recibido la formación adecuada y haya sido aprobado por el CSI de su institución debe administrar o supervisar la anestesia. El uso de un monitor de anestesia veterinaria puede ayudar a adquirir signos vitales y se recomienda. El monitor de anestesia veterinaria, sin embargo, no sustituye la necesidad de comprobar manualmente al animal cada 15 min. Consulte las instrucciones del fabricante para el uso adecuado de un monitor veterinario.
6. Verifique el inicio de la anestesia mediante un pellizco suave del dedo del pie; el conejo debe no ser sensible antes de continuar.
7. Afeita cuidadosamente el abdomen caudal del conejo en la zona alrededor del tercer y cuarto par de tetas inguinales.
8. Con la mayor parte del cabello retirado, aplica una crema de depilación de venta libre en el área afeitada. Retire la crema 10 minutos después de la aplicación con toallas de papel húmedas mojadas con agua tibia.
   NOTA: La piel del conejo es muy frágil/sensible. La crema para la depilación debe utilizarse durante no más de 10 minutos. De hecho, es más seguro probar un "lugar de prueba" a 5 min y sólo dejar en más tiempo si el lugar de prueba indica que se necesita un período de tiempo más largo.
9. Limpie la zona con almohadillas de gasa empapadas en alcohol para limpiar el lugar de inyección.
10. Coloque el conejo en su dorsum en una vaguada en forma de V forrada con una manta de agua tibia que recircula y una almohadilla absorbente.

2. Preparación del Agente de Contraste

1. Reconstituir el reactivo de contraste no dirigido de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Pipeta arriba y abajo suavemente para mezclar.
   NOTA: El agente de contraste utilizado en este protocolo es estable a temperatura ambiente de 4 a 6 h después de la reconstitución. Mezcle suavemente el vial entre cada recuperación.
   NOTA: El volumen de solución requerido dependerá del número de conductos que se inyecte. El conejo tiene 4 aberturas ductales por tetina, y 0,2 ml de solución es suficiente para llenar un árbol ductal de un conejo blanco de Nueva Zelanda adulto(Oryctolaguscuniculus). Por lo tanto, un volumen total de 0,8 ml puede ser entregado a una glándula mamaria.

3. Entrega intraductal

1. Localice las tetas apropiadas que se inyectarán; se recomiendan los 3^rd y 4^th pares de tetas inguinales, ya que se visualizan fácilmente cuando el animal se coloca en su dorsum.
2. Cargue 0,2 ml de solución salina estéril del 0,9% en una jeringa de tuberculina de bloqueo de luérculo de 1 ml con una aguja de 22 G. Deseche correctamente la aguja de 22 G una vez que la solución salina esté en la jeringa y reemplácela por una aguja estéril del calibre 25. Limpie suavemente el área con un 85% de alcohol isopropílico en una gasa.
3. Con el bisel de la aguja hacia arriba y la jeringa paralela al cuerpo del animal, inserte el bisel de la aguja en el lado de la tetina e inyecte lentamente 0,1-0,2 ml de solución salina; esto permitirá una mejor visualización de las aberturas ductales.
4. Cargue 0,2 ml de solución inyectable en una jeringa de tuberculina de bloqueo de láser de 1 ml.
5. Sujete la tetina suavemente con el pulgar y el dedo índice y elújela ligeramente para colocarla para la inyección intraductal; una lupa ocular ponible puede ayudar a visualizar las aberturas ductales.
6. Mientras mantiene la posición elevada de la tetina, puede cansar cuidadosamente el conducto de interés usando una aguja de punta contundente de 25 G.
7. Después de la canulación, gire suavemente la jeringa luer-lock en el cubo de la aguja de perfusión de punta contundente hasta que esté en su lugar.
8. Levante la tetina e inyecte la solución lentamente para minimizar el daño potencial causado por el fluido que se mueve rápidamente dentro del conducto; en ningún momento debe haber resistencia al inyectar la solución.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1 mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2 mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Ketamine HCL 100 mg/mL	Animal Health International	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10 mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20 mg/mL	Animal Health International	20101547
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads