Kanin intraductal injeksjon: Lokalisert levering av løsning av interesse i kaninpattedyrkjertelen

Overview

I denne videoen beskriver vi en teknikk for å administrere en løsning av interesse i mammarykanalen til en kanin og bekrefte leveransen ved høyoppløselig ultralydavbildning av kontrastmidler.

Protocol

1. Preoperativ forberedelse

1. Registrer kroppsvekten til hver kanin. Som med alle prekliniske studier, overvåke dyrevekter regelmessig for å vurdere potensiell toksisitet.
2. Før du bedøver kaninen, fyll et 50 ml konisk rør med kommersielt tilgjengelig ultralydgel og spinn på 500 x g i 30 s; Det skal ikke være synlige bobler i gelen når sentrifugeringen er fullført.
3. Administrer glykopyrrolat subkutant i en dose på 0,1 mg/kg og acepromazin intramuskulært i en dose på 0,75 mg/kg. Vent 15-20 min for at beroligende skal tre i kraft mens du overvåker vitale tegn og oppførsel.
   MERK: Glykopyrrolat er et antikolinerge middel som forhindrer bradykardi og reduserer respiratoriske og GI-sekreter. Acepromazin er et beroligende middel som fungerer som en premedikasjon for anestesi.
4. Administrer 35 mg/kg ketamin og 5 mg/kg xylazin subkutant som bedøvelsesmiddel. Men etter hvert som operatøren blir mer erfaren og kan oppnå intraductal levering raskere, redusere legemiddeldosene til 15 mg / kg ketamin og 3 mg / kg xylazin subkutant; Dette vil forkorte anestesitiden og tiden som kreves for at dyret skal komme seg fra anestesi.
5. Kontroller og dokumenter hjertefrekvensen, SPO_2, temperatur, åndedrettsfrekvens og slimmembranfarge hvert 15. Påfør øyesmøremiddel på begge øynene.
   MERK: Bare personell som har gjennomgått passende opplæring og er godkjent av institusjonens IACUC, bør administrere eller overvåke anestesi. Bruken av en veterinærbedøvelsesmonitor kan bidra til å skaffe vitale tegn og anbefales. Veterinærbedøvelsesmonitoren erstatter imidlertid ikke behovet for å manuelt sjekke dyret hvert 15. Se produsentens instruksjoner for riktig bruk av en veterinærmonitor.
6. Bekreft utbruddet av anestesi ved en mild tåklemme; kaninen skal være ikke-responsiv før du fortsetter.
7. Barber forsiktig kaninens kaudale underliv i området rundt de tredje og fjerde par inguinal teats.
8. Når mesteparten av håret er fjernet, påfør en over-the-counter hårfjerningskrem på det barberte området. Fjern fløten 10 min etter påføring med fuktige papirhåndklær fuktet med varmt vann.
   MERK: Kaninhuden er svært skjør/følsom. Hårfjerningskremen skal ikke brukes i mer enn 10 minutter. Faktisk er det tryggere å prøve et "teststed" på 5 min og bare la det være lenger hvis teststedet indikerer at en lengre tidsperiode er nødvendig.
9. Tørk av området med alkohol-gjennomvåt gasbind pads for å rengjøre injeksjonsstedet.
10. Plasser kaninen på dorsum i et v-formet trough foret med et resirkulerende varmt vannteppe og en absorberende pute.

2. Forberedelse av kontrastmiddelet

1. Rekonstituer det ikke-målrettede kontrastreagenset i henhold til produsentens instruksjoner. Pipette opp og ned forsiktig for å blande.
   MERK: Kontrastmiddelet som brukes i denne protokollen er stabil ved romtemperatur i 4 - 6 timer etter rekonstituering. Gyng hetteglasset forsiktig mellom hver gjenfinning.
   MERK: Det nødvendige oppløsningsvolumet avhenger av antall kanaler som skal injiseres. Kaninen har 4 kanalåpninger per smokt, og 0,2 ml løsning er tilstrekkelig til å fylle ett kanaltre av en voksen New Zealand White Rabbit (Oryctolaguscuniculus). Dermed kan et totalt volum på 0,8 ml leveres til en brystkjertel.

3. Intraductal levering

1. Finn de riktige smokkene som skal injiseres; de 3^rd og 4^th par inguinal teats anbefales, da de lett visualiseres når dyret er plassert på dorsum.
2. Legg 0,2 ml steril 0,9 % saltvann i en 1 ml Luer-lock tuberkulinsprøyte med en 22 G kanyle. Kast 22 G kanylen på riktig måte når saltvannsvæsken er i sprøyten og erstatt den med en steril 25-gauge nål. Tørk forsiktig av området med 85% isopropylalkohol på en gasbindpute.
3. Med nålens skråkant opp og sprøyten parallelt med dyrets kropp, sett nålens skråkant inn i siden av smokken og injiser sakte 0,1-0,2 ml saltvann; Dette vil tillate bedre visualisering av kanalåpningene.
4. Legg 0,2 ml injeksjonsvæske, oppløsning i en 1 ml Luer-lock tuberkulinsprøyte.
5. Hold smokken forsiktig med tommelen og pekefingeren og løft den litt for å plassere den for intraductal injeksjon; en bærbar okulær lupe kan hjelpe til med å visualisere kanalåpningene.
6. Mens du opprettholder den løftede posisjonen til smokken, kanyler du forsiktig kanalen av interesse ved hjelp av en 25 G stump spissnål.
7. Etter kanylering, vri luerlåssprøyten forsiktig på navet på infusjonsnålen med stump spiss til den er låst på plass.
8. Løft smokken og injiser løsningen sakte for å minimere potensiell skade forårsaket av raskt bevegelig væske i kanalen; Det skal ikke være motstand når du injiserer oppløsningen.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1 mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2 mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Ketamine HCL 100 mg/mL	Animal Health International	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10 mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20 mg/mL	Animal Health International	20101547
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads