Rabbit Intraductal Injection: Gelokaliseerde levering van oplossing van belang in de rabbit mammary gland

Overview

In deze video beschrijven we een techniek om een oplossing van belang toe te dienen in het borstkanaal van een konijn en bevestigen we de levering door echografie met hoge resolutie van contrastmiddelen.

Protocol

1. Preoperatieve voorbereiding

1. Noteer het lichaamsgewicht van elk konijn. Zoals bij alle preklinische studies, controleert u regelmatig de gewichten van dieren om de potentiële toxiciteit te beoordelen.
2. Voordat u het konijn verdooft, vult u een conische buis van 50 ml met in de handel verkrijgbaar ultrasone gel en draait u op 500 x g gedurende 30 s; er mogen geen zichtbare bubbels in de gel zijn na voltooiing van de centrifugeren.
3. Glycopyrrolaat subcutaan toedienen in een dosis van 0,1 mg/kg en acepromazine intramusculair in een dosis van 0,75 mg/kg. Wacht 15-20 minuten tot het kalmerende middel van kracht wordt terwijl u vitale functies en gedrag controleert.
   OPMERKING: Glycopyrrolaat is een anti-cholinerge agent die bradycardie voorkomt en ademhalings- en GI-afscheidingen vermindert. Acepromazine is een kalmerend middel dat dient als premedicatie voor anesthesie.
4. Dien 35 mg/kg ketamine en 5 mg/kg xylazine subcutaan toe als verdovingsmiddel. Naarmate de operator echter meer ervaren wordt en de intraductale toediening sneller kan bereiken, verlaagt u de doseringen van het geneesmiddel tot 15 mg/kg ketamine en 3 mg/kg xylazine subcutaan; dit verkort de anesthesietijd en de tijd die nodig is voor het dier om te herstellen van anesthesie.
5. Controleer en documenteer elke 15 minuten de hartslag, SPO_2, temperatuur, ademhalingsfrequentie en slijmvlieskleur. Breng oogsmeermiddel aan op beide ogen.
   OPMERKING: Alleen personeel dat een passende opleiding heeft gevolgd en door de IACUC van hun instelling is goedgekeurd, mag anesthesie toedienen of controleren. Het gebruik van een veterinaire anesthesiemonitor kan helpen bij het verkrijgen van vitale functies en wordt aanbevolen. De veterinaire anesthesiemonitor vervangt echter niet de noodzaak om het dier elke 15 minuten handmatig te controleren. Raadpleeg de instructies van de fabrikant voor het juiste gebruik van een veterinaire monitor.
6. Controleer het begin van anesthesie door een zachte teenknijp; het konijn moet niet reageren voordat het doorgaat.
7. Scheer voorzichtig de staartbuik van het konijn in het gebied rond het derde en vierde paar inguinale spenen.
8. Als het grootste deel van het haar is verwijderd, breng je een over-the-counter ontharingscrème aan op het geschoren gebied. Verwijder de crème 10 minuten na het aanbrengen met vochtige papieren handdoeken bevochtigd met warm water.
   OPMERKING: Konijnenhuid is erg kwetsbaar/gevoelig. De ontharingscrème mag niet langer dan 10 minuten worden gebruikt. In feite is het veiliger om een "testplek" op 5 minuten te proberen en alleen langer te laten staan als de testplek aangeeft dat een langere periode nodig is.
9. Veeg het gebied af met met alcohol doordrenkte gaaskussens om de injectieplaats schoon te maken.
10. Plaats het konijn op zijn dorsum in een v-vormige trog bekleed met een recirculerende warmwaterdeken en een absorberend kussen.

2. Voorbereiding van de Contrast agent

1. Reconstitueer het niet-gerichte contrastreagens volgens de instructies van de fabrikant. Pipetteer zachtjes op en neer om te mengen.
   OPMERKING: Het contrastmiddel dat in dit protocol wordt gebruikt, is stabiel bij kamertemperatuur gedurende 4 - 6 uur na reconstitutie. Schommel de flacon voorzichtig tussen elk ophalen.
   OPMERKING: De benodigde hoeveelheid oplossing is afhankelijk van het aantal te injecteren kanalen. Het konijn heeft 4 ductale openingen per speen en 0,2 ml oplossing is voldoende om een ductale boom van een volwassen Nieuw-Zeelands wit konijn(Oryctolaguscuniculus)te vullen. Zo kan een totaal volume van 0,8 ml aan één borstklier worden geleverd.

3. Intraductale levering

1. Zoek de juiste spenen die moeten worden geïnjecteerd; de^3e en^4e paar inguinale spenen worden aanbevolen, omdat ze gemakkelijk kunnen worden gevisualiseerd wanneer het dier op zijn dorsum wordt geplaatst.
2. Steek 0,2 ml steriele zoutoplossing van 0,9% in een luer-lock tuberculinespuit van 1 ml met een naald van 22 G. Gooi de 22 G-naald op de juiste manier weg zodra de zoutoplossing in de spuit zit en vervang deze door een steriele 25-gauge naald. Veeg het gebied voorzichtig af met 85% isopropylalcohol op een gaasje.
3. Met de schuine kant van de naald omhoog en de spuit evenwijdig aan het lichaam van het dier, steekt u de schuine kant van de naald in de zijkant van de speen en injecteert u langzaam 0,1-0,2 ml zoutoplossing; dit zorgt voor een betere visualisatie van de kanaalopeningen.
4. Steek 0,2 ml injectieoplossing in een 1 ml Luer-lock tuberculinespuit.
5. Houd de speen voorzichtig vast met de duim en wijsvinger en til hem iets op om hem te positioneren voor de intraductale injectie; een draagbare oculaire loep kan helpen bij het visualiseren van de kanaalopeningen.
6. Terwijl u de opgetilde positie van de speen behoudt, canuleer u voorzichtig het kanaal van belang met behulp van een 25 G stompe naald.
7. Draai na de cannulatie de Luer-lock spuit voorzichtig op de naaf van de stompe infuusnaald totdat deze op zijn plaats is vergrendeld.
8. Til de speen op en injecteer de oplossing langzaam om mogelijke schade veroorzaakt door snel bewegende vloeistof in het kanaal te minimaliseren; op geen enkel moment moet er weerstand zijn bij het injecteren van de oplossing.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1 mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2 mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Ketamine HCL 100 mg/mL	Animal Health International	21250699	http:// www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10 mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20 mg/mL	Animal Health International	20101547
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads