Bu makalede, izolasyon ve bakım, cilt ve akciğer dokusunda yaban kemirgenler birincil fibroblast kültürlerinin için bir protokol tanımlamaktadır.
Abstract
Biyolojik çalışmalar için, birincil hücreler, kanser hücre hatları yerine kullanmanın önemi, yaygın olarak kabul haline geliyor. Birincil hücreler, hücre döngüsü kontrolü, apoptozis çalışmaları tercih ve DNA onarımı, kanser hücreleri, bu süreçlere dahil genlerindeki mutasyonlar taşıyan. İlköğretim hücreleri süresiz replikatif yaşlanması veya aneuploidization başlangıcı nedeniyle kültür olamaz. Bu nedenle, yeni kültürler, düzenli bir şekilde kurulması gerekmektedir. Kemirgen embriyonik fibroblastlar izolasyonu için prosedür iyi kurulmuş, ama çoğu zaman bir meydan okuma sunuyor yetişkin fibroblast kültürlerinde izole eder. Insan hastalığı fare modelleri izole Yetişkin kemirgen fibroblastlar, insan hasta fibroblastlar karşılaştırarak tercih edilen bir kontrol olabilir. Ayrıca, hamile kadın kolayca elde edilemez yabani kemirgenler ile çalışırken yetişkin fibroblastlar sadece kullanılabilir bir malzeme. Burada kemirgen cilt ve akciğerlerden yetişkin fibroblastlar izolasyonu ve kültürü için bir protokol sağlar. Bu yordamı Biz yirmi kemirgen türleri üzerinde laboratuvarda fareler ve sıçanlar, kunduz, kirpi, sincap gibi yabani kemirgenler fibroblastlar izole etmek için başarıyla kullanılır.
Protocol
1. Başlamadan Önce % 70 etanol ile makas ve forseps sterilize edin. 30 ml beher içindeki küçük manyetik karıştırıcı yerleştirin, iki folyo katmanlar ve otoklav ile kaplayın. Steril su içinde 28 Wunsch Liberase Blendzyme 3 ünite / mL stok çözelti hazırlayın. -20 ° C'de 0.5 mL alikotları ve donma yapın Her kullanımdan önce yeni bir kısım çözülme. Çözüm çözme sonrası bulanık görünebilir. Vorteksleyin çözüm açık hale gelinceye kadar. Is?…
Discussion
Normal birincil fibroblastlar, biyolojik araştırmalar yılında kurulan kanser hücre hatları için mükemmel bir alternatif sağlar. Fibroblastların önemli bir avantajı, onkogenler ve tümör bastırıcılarının mutasyonlar taşımak ve sağlam hücre döngüsü kontrol noktaları korumak olduğunu. Bu normal fibroblastlar, hücre döngüsü kontrolü, DNA onarımı ve apoptozis çalışmaları için tercih edilen bir sistem yapar. Burada açıklanan protokol birincil fibroblastlar izolasyon ve bakımı için b…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu protokolün ilk sürümü ile bize sağlamak için Dr. Steven Austad teşekkür ederim. Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüsü ve Ellison Tıp Vakfı VG hibe tarafından desteklenen ve AS
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
DMEM/F12 media
Invitrogen
11330-032
Fetal Bovine Serum (FBS), Qualified
Invitrogen
01437-036
The Qualified serum had been pre-tested to provide good growth support for primary fibroblasts.
Antibiotic/Antimycotic
Invitrogen
15420-096
Penicillin/Streptomycin
Invitrogen
15140-122
Liberase TM Research Grade
Roche
05401127001
Replacement enzyme.
A note from the authors:
Since Roche discontinued Liberase Blendzyme 3 (11814184001), they recommend using Liberase TM Research Grade medium Thermolysin (Cat. no. 05401119001 – 10 mg, Cat. no. 05401127001 – 100mg) instead. We have switched to this enzyme successfully with no issues.
EMEM media
ATCC
30-203
The EMEM media from ATCC already contains nonessential amino acids and sodium pyruvate.
Seluanov, A., Vaidya, A., Gorbunova, V. Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents. J. Vis. Exp. (44), e2033, doi:10.3791/2033 (2010).