Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Imaging Cell Shape Förändring Living Drosophila Embryon

doi: 10.3791/2503 Published: March 30, 2011

Summary

Tidiga utvecklingen av bananflugan, Drosophila melanogaster, kännetecknas av ett antal förändringar cell form som är väl lämpade för avbildning metoder. Denna artikel kommer att beskriva grundläggande verktyg och metoder som krävs för att leva konfokal avbildning av Drosophila embryon, och kommer att fokusera på en cell form förändring kallas cellularization.

Abstract

Utvecklingsländerna Drosophila melanogaster embryo genomgår en rad förändringar cell form som är mycket mottaglig att leva konfokala bildhantering. Cell formförändringar i gylfen motsvarar dem i högre organismer, och de kör vävnad morfogenes. Så, i många fall har deras studie direkta konsekvenser för förståelsen av mänsklig sjukdom (tabell 1) 1-5. På den sub-cellulära skala, dessa celler formförändringar är en produkt av aktiviteter, från genuttryck till signaltransduktion, cell polaritet, cytoskelettala ombyggnader och membran människohandel. Således ger Drosophila embryot inte bara sammanhanget att utvärdera cellförändringar form som de avser vävnad morfogenes, men erbjuder också en helt fysiologisk miljö att studera sub-cellulära aktiviteter som formar celler.

Protokollet som beskrivs här är avsedd att bilden en specifik förändring cell formen kallas cellularization. Cellularization är en process av dramatiska plasmamembran tillväxt, och det i slutändan omvandlar syncytial embryot till den cellulära BLASTODERM. Det är, vid interfas av mitotiska cykel 14, invaginates plasmamembranet samtidigt runt varje för ~ 6000 cortically förankrade kärnor för att skapa ett ark med primär epitelceller. Mot tidigare förslag är cellularization inte drivs av myosin-2 kontraktilitet 6, utan istället drivs till stor del genom exocytos av membran från interna affärer 7. Således är cellularization ett utmärkt system för att studera membran handel under cellförändringar form som kräver invagination plasmamembran eller expansion, som cytokines eller transversell-tubuli (T-tubuli) morfogenes i muskeln.

Observera att detta protokoll lätt appliceras på avbildning av andra cellförändringar form i flugan embryot, och kräver endast smärre anpassningar till exempel ändra stadiet av embryosamlings, eller med hjälp av "embryo lim" för att montera embryo i en viss riktning (Tabell 1) 8-19. I alla fall är arbetsflödet i stort sett samma (Figur 1). Standardmetoder för kloning och Drosophila genmodifiering används för att förbereda en stabil flyga lager som uttrycker ett protein av intresse, smält till grönt fluorescerande protein (GFP) eller dess varianter, och dessa flugor ge en förnybar embryon. Alternativt är fluorescerande proteiner / prober direkt förs in flyga embryon via enkla mikroinjektion tekniker 9-10. Sedan, beroende på utvecklings-händelsen och cell formen förändringar som ska avbildas, är embryon samlas in och iscensatt av morfologi på dissekera mikroskop, och slutligen placeras och monteras för Time-lapse avbildning på ett konfokalmikroskop.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Montera Cup embryosamlingsgrupp

  1. Skär botten av av en 100 ml Tri-majs bägare med en rakkniv, vilket gör kanten så smidig som möjligt. Kåporna är lättare att hantera om du även trimma de tre hörnen av av toppen, även om detta inte är absolut nödvändigt.
  2. Klipp en kvadrat av ståltrådsnät (6 cm x 6 cm). På en förvärmda värmeplatta, inuti ett dragskåp lager i kvadrat trådnät på toppen av en bit av tunga aluminiumfolie. Tryck kanten skär botten av koppen fast på de heta mesh. Vänta några sekunder och lyft koppen med mesh nu bifogas. Om folien även pinnar, bara pilla bort det.
  3. Cool koppen över natten. Ta bort överflödig mesh med sax, och sand bort eventuella vassa kanter med finkornig sandpapper.

2. Gör Apple Plattor Juice Agar

  1. I en 6L kolv, kombinera 100 g BD Bacto agar och 3L destillerat vatten. Autoklav agar i 30 minuter på den långsamma avgaser inställning.
  2. I en 2L flaska med en omrörare, kombinera 100 g sackaros, 1L äppeljuice, och 6 g p-hydroxibensoesyra. Värm lösningen till kokning under omrörning på en värmeplatta. Inte koka mer än 2 minuter. Låt äppeljuice blandningen svalna och lägg sedan till med omrörare till agar. Blanda helt.
  3. Låt den kombinerade lösningen svalna i en 60 ° C vattenbad innan strömmar in 60x15 mm petriskålar. Alternativt kan en Slangpumpar användas för att dosera agar. Låt plattorna svalna till rumstemperatur i minst 4 timmar. Stack i Rubbermaid behållare med ett lager av vått hushållspapper och förvara vid 4 ° C.

Anmärkningar:

  • Under hösten och vintern kan det bli nödvändigt att lägga till en ytterligare 100 ml vatten till agar.
  • Varumärket petriskålar är viktigt! Endast BD Falcon rätter passar bra till Tri-majs bägare. Särskilda beställningsinformation finns i materialet tabellen nedan.

3. Lägg GFP flyger till Cups embryosamlings

  1. Expandera GFP lager efter din samling behov genom att inrätta flaskor av flugor omkring två veckor före avbildning. En flaska med flugor är oftast mer än tillräckligt för att fylla en kopp embryosamlings med ett minimum av 50 kvinnor och 30 män. För bästa om bör flugor vara nyligen eclosed (dvs. mindre än 5 dagar efter kläckning).
  2. Gör en jäst pasta genom att fylla en liten kopp med ungefär lika delar Red Star aktiv torrjäst och destillerat vatten och rör tills jästen är upplöst. Pastan ska närma konsekvens av våt jordnötssmör. Mer jäst och vatten kan läggas att ändra konsistens. Jäst pasta kan användas i flera dagar, och skall lagras, omfattas, vid 4 ° C.
  3. När jästen pastan är klar, ta bort äppeljuice plåtar från 4 ° C förvaring. Utstryk med äppeljuice plattorna med jästen pasta, och låta dem värmas upp till 22-25 ° C, vilket kommer att uppmuntra äggläggningen.
  4. Vik en runda filterpapper på mitten, sedan i mitten igen. Trim till 8-9 cm i diameter, och gör dragspel veck under kvartalet cirkeln. Vik ut cirkel, invertera den, och sätt in det i en samling kopp tills det når nätet. Se till att pappret sitter ordentligt i den koppen så att den inte faller och krossa flugor. Filtret papper är valfritt, men ger en välkomnande miljö för parning, och upprätthåller fukt i koppen.
  5. Etikett en kopp med bestånd namn och datum. Överför flyger från flaskan till samlingen koppen genom att försiktigt skaka inverterad flaskan över bägaren, och täck omedelbart koppen med ett förberett äppeljuice plattan. Säkra plattan i koppen med ett gummiband. Ställ koppar mesh uppåt i ett område med direkt ljus. Se till att inga skuggor faller på koppen, som flugor inte kommer att lägga bra i mörkret.
  6. Ändra äppeljuice plattan som behövs. Två timmars samlingar, vid rumstemperatur, fungerar bra för bildbehandling cellularization.

4. Förbered en Montering avdelningen

  1. Att förbereda ett montage kammare för embryon, skära en bit dubbelhäftande tejp 2-3 cm lång och placera den på en bild, rikta den långa axeln av bandet och skjut. Skär en andra 2-3 cm lång bit dubbelhäftande tejp och lager ovanpå den andra bit tejp och se deras kanter är justerade.
  2. Använda ett rakblad, gör två snitt ca 3 mm från varandra i mitten av bandet och vinkelrätt mot den långa axeln i bilden. Ta bort tejpen mellan nedskärningarna att göra en kanal. Pipettera en droppe Halocarbon 27 olja i kanalen. Denna kanal är där embryona kommer att monteras.

Anmärkningar:

  • Endast ½ tum Scotch dubbelhäftande tejp är rätt tjocklek för att rymma embryon.
  • Halocarbon 27 Olja är syre genomsläpplig, och så låter syre utbyte, samtidigt som man förhindrar embryo uttorkning. På grund av dess brytningsindex är Halocarbon 27 Olja också idealiskt för mellanstationeroch bildhantering embryon.

5. Dechorionate Embryon

  1. Att samla in och dechorionate embryon, häll nog 50% blekmedel över till äppeljuice agarplatta till fullo dränka hela ytan. Med hjälp av en dissekera mikroskop, såsom Zeiss Discovery V8 med ljus, titta på de embryon som släpper från sina chorion. Så snart chorion lossnar och släpper från några embryon (30-60 sekunder), häll blekmedel och embryon i en cell sil.
  2. Tvätta embryon i silen omedelbart och kraftfullt med destillerat vatten från en sprutflaska. Dab sil på hushållspapper. Om någon rosa syns på handduken efter badda, fortsätta tvätta embryon med vatten.
  3. Använd en fuktig pensel för att överföra 10-50 embryon till en ren äppeljuice platta (utan jäst pasta). Transportera bort vatten med trasiga kanten av en pappershandduk, och omedelbart täcka embryon med en liten mängd Halocarbon 27 Oil.

Anmärkningar:

  • Använd inte Clorox blekmedel. Använd i stället ett varumärke som Austins A-1 Commercial Bleach, vilket är <6% natriumhypoklorit.
  • Över-blekning eller otillräcklig sköljning kommer att resultera i mosig embryon med oregelbundna cellularization.

6. Scen och Mount embryon

  1. Använda dissecting mikroskop med ljus, följ morfologiska riktlinjer Bownes 20 till stadium embryon på tallriken. Använd pincett, överföring 5 mitotiska cykla 11 eller 12 embryon, vilket motsvarar Bownes steg 4, till kanalen för montage kammaren. Ordna embryon i en linje, med rygg-och ventral sidor synliga och laterala sidan nedåt. Embryon är lätt ordnas i denna riktning i olja ensam. Inte tränger embryon tillsammans eftersom de kommer att beröva sina grannar på syre när luckan glida tillämpas nedan. (Låt ca hälften av ett embryo längd mellan dem).
  2. Lägg en kanten av en 25x25 mm täckglas på dubbelhäftande tejp på ena sidan av kanalen. Släpp locket glida för att täcka kanal. Om luften är fångad under, applicera en liten mängd Halocarbon 27 olja vid kanten av locket halka. Kapillärkraften kommer att dra in oljan i kanalen och tryck ut luften.

Anmärkningar:

  • En annan utmärkt resurs för mellanstationer embryon är följande: Campos-Ortega, JA och Hartenstein, V. (1985). Den embryonala utvecklingen av Drosophila melanogaster. Springer-Verlag, Berlin. Även denna bok är inte längre publiceras, användas kopior regelbundet tillgänglig på Amazon.com.
  • Använd alltid Halocarbon 27 Olja sparsamt. Detta kommer att göra monteringen enklare. Det kommer också förhindra oavsiktlig sipprar av olja på mikroskopet målet i följande bildbehandling steg.

7. Bild Embryon

  1. Hur du fortsätter här kommer naturligtvis att bestämmas av cellens form förändringen att du är bildbehandling, och den fråga som du talar till. För någon form förändring, placera montering kammare på antingen en upprätt eller inverterat mikroskop, hitta din embryon i genomlysning, och sedan växla till konfokala imaging att fokusera på ett område av intresse. Följ bästa praxis för konfokalmikroskopi, t.ex. de som diskuteras på Nikons MicroscopyU ( http://www.microscopyu.com/articles/confocal ). Vara särskilt noggranna med att exponera din levande embryon till så lite laser ström som möjligt, för att förhindra fotoblekning och fototoxicitet.
  2. För cellularization vi bilden på en Zeiss 710 laserskanning konfokalmikroskop, med hjälp av ett C-Apochromat 40x/1.2 W Corr mål. Detta mikroskop är inrymt i en temperaturkontrollerad rum, med temperaturer på mellan 18-20 ° C. Medan temperaturreglering är inte absolut nödvändigt, det är bättre för mikroskop och gör avbildning mer konsekvent. Vi bilden regelbundet i ett enda plan, nära mitten av embryot, att följa invaginations plasmamembranet i tvärsnitt (figur 2). För bara efter invagination dynamik, 30-60 sekunders intervall räcker för time-lapse avbildning, och embryon borde tåla bildhantering för> 90 minuter utan några tydliga tecken på syrebrist.
  3. Efter förvärvet bilderna kan de analyseras med hjälp av ett antal paket bildanalys, inklusive freeware från National Institutes of Health, kallad ImageJ ( http://rsbweb.nih.gov/ij ). Uppgifterna kan sedan presenteras som film (Film 1), sekvenser (Figur 2), eller kymographs 21.

Anmärkning:

  • Vattnet nedsänkning C-Apochromat 40x/1.2 W Corr mål är väl lämpad för avbildning nära embryo mellersta delen på grund av dess höga bländare, vilket begränsar avvikelser för djup vävnad avbildning i vattenlösning prov, och ger hög upplösning och hög fluorescerande signal. Dessutom har denna målsättninghar en mycket lång arbetsdag avstånd (220 mikrometer). Däremot kommer andra vatten eller glycerin nedsänkning mål utvecklas väl, särskilt om cellen form förändringen av intresse kan avbildas nära embryot ytan.

8. Alternativ metod: Mount embryon med "embryo-lim"

  1. För att bilden en cell form förändring annat än cellularization, kan det vara nödvändigt att montera embryon i en viss riktning som inte är lätt att underhålla i olja ensam. För att göra detta, använd en alternativ monteringsmetod med det som beskrivits tidigare. Börja med att göra "embryo-lim" genom att kombinera 20 cm dubbelhäftande tejp med 250 mikroliter heptan i en scintillation injektionsflaska. Placera scintillation flaskan på en nutator eller roterande plattform, och blanda natten.
  2. Doppa en gul pipetten i embryot lim och sedan spåra toppen längs en bild och lämnar ett spår av lim. Medan heptan är indunstning, anpassa din iscensatt embryon i önskad riktning på ett block av agar. (Kom ihåg att embryot ytan som ska avbildas bör vara vänd mot agar. Till exempel att bilden cell form ändras under ventral fåra bildas, montera embryon med sina ventrala sidan mot agar.)
  3. Invertera bilden med lim, och tryck försiktigt spåren av lim mot embryon på agar blocket. Nu invertera bilden igen. Embryona kommer att fastna i lämplig riktning. Lägg två lager av dubbelhäftande tejp på vardera sidan av embryona, täck dem med Halocarbon 27 olja och lägg på ett täckglas. Fortsätt med bildbehandling som beskrivs ovan.

9. Representativa resultat:

Om embryona är friska och bildbehandling är optimal, då cellularization bör ta 50-60 minuter, och plasmamembran invaginations bör inträngande nästan 40 mikrometer. Men om embryona över blekt, syrefria eller skadas av fototoxicitet, då invagination kommer antingen bromsa eller stoppa, särskilt i avbildade området. En sådan försämring av embryon hälsa resulterar ofta i annan utveckling, och ett misslyckande att kläcks till larver. Således, för ett rigoröst test för analys embryo hälsa efter avbildning, hålla bilderna i en fuktig kammare och titta för kläckning nästa dag.

Figur 1
Figur 1. Arbetsflöde från embryosamlings till bildhantering. Arbetsflödet i protokollet kan delas upp i fyra faser. I den första fasen är alla enskilda varor och komponenter förberedda, och då embryosamlingen koppen, äppeljuice agarplatta och GFP flugor sätts samman för att skapa ett embryo-om miljö. I den andra fasen, är de ägg och embryon som läggs på äpple plattorna juice agar in. I den tredje fasen, är de embryon bort från plattan, iscensatt och överförs till montering kammaren. I den fjärde fasen, är de monterade embryon avbildas på en konfokalmikroskop.

Figur 2
Figur 2. Representativa uppgifter från tidsförlopp avbildning av cellularization. Embryon monteras med rygg (D) och ventrala (V) sida syns tydligt och är avbildade i närheten av sina mitten följa invaginations plasmamembranet i genomskärning. Embryot visas här uttrycker en GFP-myosin-2 sond 6, som koncentrerar sig på tips av plasmamembranet invaginations. Således spåra tätheten av denna front över tiden ger den hastighet med vilken plasmamembranet invaginates. Den 0:00 minuter tidpunkt motsvarar cellularization debut. Strax efter 56:00 minuter tidpunkt börjar gastrulation på ventrala sidan av embryot. Bar är 40 mikrometer.

Film 1. Representant film från tidsförlopp avbildning av cellularization. Denna film motsvarar figur 2. För att spela in hela processen med cellularization började imaging i föregående mitotiska cykel 13, fånga regression pseudocleavage fåra, och fortsatte tills gastrulation rörelser sågs på ventrala sidan av embryot. Bilderna togs på en minut. De stödnivåer som höjdes efter förvärvet att göra det lättare att se gastrulation rörelser.
Klicka här för filmen

Developmental händelse och tidpunkten * Cell form förändringar i samband med En länk till sjukdom eller människors hälsa Nyligen referenser med Bildproduktion
Pseudo-klyvning fåra bildas
(4, 90 minuter PF)
Cytokines Polyploidi och cancer progression 1 Mavrakis et al. 2009 8
Cao et al. 2010 9
Cellularization
(5, 130 minuter PF)
Cytokines Polyploidi och cancer progression 1 Cao et al. 2008 10
Sokac & Wieschaus, 2008 11
Ventral fåra utformning; mesoderm invagination
(6, 180 minuter PF)
Apikala sammandragning, Epithelial-mesenkymala övergång Cancer metastaser 2 Fox & Peifer, 2007 12
Martin et al. 2009 13
Germband förlängning
(7, 195 minuter PF)
Convergent förlängning Neuralrörsdefekter 3 Bertet et al. 2004 14
Blankenship et al. 2006 15
Tracheogenesis
(11, 320 minuter PF)
Epiteliala rör bildning och förgrening Angiogenes 4 Caussinus et al. 2008 16
Gervais & Casanova, 2010 17
Dorsal stängning
(14, 620 minuter PF)
Apikal sammandragning Sårläkning 5 Gorfinkiel et al. 2009 18
Solon et al. 2009 19

Tabell 1. Exempel på cellförändringar form avbildas i levande flyga embryon
* Det Bownes scenen nummer och tid efter befruktning (PF), när varje evenemanget börjar, är listade enligt Campos-Ortega, 1985.

Fly lager Etiketter Ursprungliga hänvisningen
Spider-GFP (95-1) Plasmamembran Morin et al. 2001 22
Resille-GFP (117-2) Plasmamembran Morin et al. 2001 22
GAP43-Venus Plasmamembran Mavrakis et al. 2009 8
Spaghetti Squash-GFP (Sqh-GFP) Myosin-2 Royou et al. 2002 6
E-cadherin-GFP (ECAD-GFP) Cell-cell junctions Oda et al. 2001 23
GFP-Moesin F-aktin Kiehart et al. 2000 24
Utrophin-Venus (Utro-Venus) F-aktin Sokac et al. Opublicerade resultat

Tabell 2. Användbara bestånd för avbildning cell formen förändring flyga embryon

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Protokollet som beskrivs här kommer att tillåta leva, konfokala avbildning av ett antal förändringar cell form i utvecklingsländerna flyga embryot. GFP lager för avbildning kan förberedas i ett enskilt laboratorium (tabell 2), men många av dessa lager finns också tillgängliga för allmänheten från centra som Bloomington Drosophila Lager Center vid Indiana University ( http://flystocks.bio.indiana.edu ) och Flytrap Lager Center vid Yale University ( http://flytrap.med.yale.edu ). Väl förvärvat dessa lever bilddata kan sedan kopplas ihop med kvantitativ analys för att noggrant definiera protein funktioner, sub-cellulära aktiviteter och biofysiska parametrar som driver cellen formen förändring och vävnad morfogenes.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Inga intressekonflikter deklareras.

Acknowledgments

Vi erkänner tacksamt Eric Wieschaus, som gav grunden för detta protokoll utvecklades. Vårt arbete stöds av en Verna & Marrs McLean Institutionen för biokemi och molekylärbiologi Start-up Award, Baylor College of Medicine.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Slides Fisher Scientific 12-550-343
Cover slips 25x25 Fisher Scientific 1 2-524C
Squirt bottles (H2O) Fisher Scientific 02-897-11
50 ml Falcon tubes Fisher Scientific 14-432-22
Bulbs for small pipets, 1 mL Fisher Scientific 03-448-21
Scintillation vials with caps VWR international 66021-533
Tri-Corn Beakers, 100 mL Electron Microscopy Sciences 60970
BD Falcon Petri dish 60x15mm Fisher Scientific 08757 100B
BD Falcon Cell strainer Fisher Scientific 08-771-2
Yellow pipet tips Rainin L200
Stainless steel mesh, 304, 12x24 Small Parts, Inc. CX-0150-F-01
Glass 5¾ inch Pasteur Pipets Fisher Scientific 13-678-20B
P4 Filter paper Fisher Scientific 09-803-6F
Rubber bands Office Max A620645
Scotch double-sided tape, ½ inch Office Max A8137DM-2
Robert Simmons Expression paint brushes E85 round #2 Jerry’s Artarama 56460
Dumont #5 Forceps High Precision Inox Electron Microscopy Sciences 72701-DZ
Razor blades VWR international 55411-050
Halocarbon Oil 27 Sigma-Aldrich H 8773
Heptane Fisher Scientific H360-1
BD Bacto Agar VWR international 90000-760
Sucrose Sigma-Aldrich S7903
p-Hydroxybenzoic acid Sigma-Aldrich H5501
Red Star Active Dry Yeast LeSaffre 15700
Paper towels, C-fold Kleenex
Heavy duty aluminum foil Reynolds Wrap
Bleach Austin’s A-1 Commercial
100% Apple juice Ocean Spray or Tree Top

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sagona, A. P., Stenmark, H. Cytokinesis and cancer. FEBS Lett. 584, 2652-2661 (2010).
  2. Baum, B., Settleman, J., Quinlan, M. P. Transitions between epithelial and mesenchymal states in development and disease. Semin Cell Dev Biol. 19, 294-308 (2008).
  3. Kibar, Z., Capra, V., Gros, P. Toward understanding the genetic basis of neural tube defects. Clin Genet. 71, 295-310 (2007).
  4. Jazwinska, A., Ribeiro, C., Affolter, M. Epithelial tube morphogenesis during Drosophila tracheal development requires Piopio, a luminal ZP protein. Nat Cell Biol. 5, 895-901 (2003).
  5. Martin, P., Parkhurst, S. M. Parallels between tissue repair and embryo morphogenesis. Development. 131, 3021-3034 (2004).
  6. Royou, A., Field, C., Sisson, J. C., Sullivan, W., Karess, R. Reassessing the role and dynamics of nonmuscle myosin II during furrow formation in early Drosophila embryos. Mol Biol Cell. 15, 838-850 (2004).
  7. Lecuit, T., Wieschaus, E. Polarized insertion of new membrane from a cytoplasmic reservoir during cleavage of the Drosophila embryo. J Cell Biol. 150, 849-860 (2000).
  8. Mavrakis, M., Rikhy, R., Lippincott-Schwartz, J. Plasma membrane polarity and compartmentalization are established before cellularization in the fly embryo. Dev Cell. 16, 93-104 (2009).
  9. Cao, J., Crest, J., Fasulo, B., Sullivan, W. Cortical Actin Dynamics Facilitate Early-Stage Centrosome Separation. Curr Biol. (2010).
  10. Cao, J., Albertson, R., Riggs, B., Field, C. M., Sullivan, W. N. uf a Rab11 effector, maintains cytokinetic furrow integrity by promoting local actin polymerization. J Cell Biol. 182, 301-313 (2008).
  11. Sokac, A. M., Wieschaus, E. Local actin-dependent endocytosis is zygotically controlled to initiate Drosophila cellularization. Dev Cell. 14, 775-786 (2008).
  12. Fox, D. T., Peifer, M. Abelson kinase (Abl) and RhoGEF2 regulate actin organization during cell constriction in Drosophila. Development. 134, 567-578 (2007).
  13. Martin, A. C., Kaschube, M., Wieschaus, E. F. Pulsed contractions of an actin-myosin network drive apical constriction. Nature. 457, 495-499 (2009).
  14. Bertet, C., Sulak, L., Lecuit, T. Myosin-dependent junction remodelling controls planar cell intercalation and axis elongation. Nature. 429, 667-671 (2004).
  15. Blankenship, J. T., Backovic, S. T., Sanny, J. S., Weitz, O., Zallen, J. A. Multicellular rosette formation links planar cell polarity to tissue morphogenesis. Dev Cell. 11, 459-470 (2006).
  16. Caussinus, E., Colombelli, J., Affolter, M. Tip-cell migration controls stalk-cell intercalation during Drosophila tracheal tube elongation. Curr Biol. 18, 1727-1734 (2008).
  17. Gervais, L., Casanova, J. In vivo coupling of cell elongation and lumen formation in a single cell. Curr Biol. 20, 359-366 (2010).
  18. Gorfinkiel, N., Blanchard, G. B., Adams, R. J., Arias, M. artinez, A, Mechanical control of global cell behaviour during dorsal closure in Drosophila. Development. 136, 1889-1898 (2009).
  19. Solon, J., Kaya-Copur, A., Colombelli, J., Brunner, D. Pulsed forces timed by a ratchet-like mechanism drive directed tissue movement during dorsal closure. Cell. 137, 1331-1342 (2009).
  20. Bownes, M. A photographic study of development in the living embryo of Drosophila melanogaster. J Embryol Exp Morphol. 33, 789-801 (1975).
  21. Sokac, A. M., Wieschaus, E. Zygotically controlled F-actin establishes cortical compartments to stabilize furrows during Drosophila cellularization. J Cell Sci. 121, 1815-1824 (2008).
  22. Morin, X., Daneman, R., Zavortink, M., Chia, W. A protein trap strategy to detect GFP-tagged proteins expressed from their endogenous loci in Drosophila. Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 15050-15055 (2001).
  23. Oda, H., Tsukita, S. Real-time imaging of cell-cell adherens junctions reveals that Drosophila mesoderm invagination begins with two phases of apical constriction of cells. J Cell Sci. 114, 493-501 (2001).
  24. Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila. J Cell Biol. 149, 471-490 (2000).
Imaging Cell Shape Förändring Living<em> Drosophila</em> Embryon
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Figard, L., Sokac, A. M. Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos. J. Vis. Exp. (49), e2503, doi:10.3791/2503 (2011).More

Figard, L., Sokac, A. M. Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos. J. Vis. Exp. (49), e2503, doi:10.3791/2503 (2011).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter