钙是一种在神经系统中无处不在的使者,触发神经递质释放和突触强度的变化。在这里,我们展示了一个加载的Ca 2 +指标到果蝇的神经终端的技术。我们也证明所需设备的制造,并强调技术的成功的关键点。
钙在神经系统中的许多角色,但没有更令人印象深刻,作为神经递质释放的触发,并没有比支持学习和记忆的突触可塑性的重要使者深刻。为了进一步阐明的分子基础的Ca 2 +依赖的突触机制,需要一个模型系统,基因可塑性和生理访问。果蝇提供了这样一个模型。在这个系统中,基因编码的荧光指标,可用来检测神经末梢的Ca 2 +的变化。然而,这些指标是有限的敏感性钙+和常常表现出非线性响应。合成荧光指标更适合于测量迅速的Ca 2 +与神经活动有关的变化。在这里,我们展示了一个加载到果蝇幼虫生活的神经末梢葡聚糖偶联合成的Ca 2 +指标的技术。特别强调的是放置在协议的那些方面最关键该技术的成功,例如如何以避免沿的隔离神经静电,保持编制的健康在扩展装载期间,,并确保轴突生存提供的Ca 2 +促进密封切断轴突末梢。低亲和力右旋糖酐标记的Ca 2 +的指标,如氟- 4和rhod,这显示了一个高信号的信噪比,同时微创干扰突触前的Ca 2 +动力学。葡聚糖共轭有助于防止钙进入细胞器如线粒体扣押+指标。加载技术可以同样适用于幼虫,胚胎和成人。
The authors have nothing to disclose.