הפרוטוקולים של תא החיידק השתלת רקמות xenografting testis מתוארים. תא הנבט השתלת תוצאות spermatogenesis, התורם המופק האשכים הנמען ומהווה assay הכינון מחדש תפקודית לזיהוי בתאי גזע spermatogonial (SSCs). רקמת אשך xenografting מתרבה פיתוח testis ו spermatogenesis של מינים שונים התורמות בעכברים הנמענים.
תא חיידק השתלת פותחה על ידי ד"ר ראלף Brinster ועמיתיו באוניברסיטה של פנסילבניה בשנת 1994 1,2. אלה פורצי מחקרים הראו כי microinjection של בתאי הנבט מעכברים התורמות פוריות לתוך tubules seminiferous תוצאות עכברים עקרות הנמען spermatogenesis, התורם נגזר וייצור זרע על ידי בעל חיים הנמען 2. השימוש של גברים שנשאו התורמות זיהוי חיידקי β-galactosidase גן המותר של spermatogenesis, התורם נגזר והעברת haplotype תורם לצאצא על ידי בעלי חיים הנמען 1. באופן מפתיע, לאחר ההשתלה לתוך לומן של tubules seminiferous, בתאי הנבט המושתלים הצליחו לעבור מתא luminal קרום המרתף שבו spermatogonia ממוקמים 3. מקובל כי SSCs רק מסוגלים ליישב נישה מחדש spermatogenesis את testis הנמענים. לכן, נבט התאהשתלת מספק גישה פונקציונלית ללמוד בתאי גזע נישה האשכים ואת לאפיין המשוערים בתאי גזע spermatogonial. נכון להיום, השתלת נבט משמש להבהיר הביולוגיה הבסיסית בתאי גזע, לייצר חיות מהונדס באמצעות מניפולציה גנטית של בתאי הנבט לפני השתלת 4,5, ללמוד Sertoli תא נבט אינטראקציה התא 6,7, SSC ביות והקולוניזציה 3, 8, כמו גם SSC עצמית התחדשות והתמיינות 9,10.
השתלת תא החיידק הוא גם אפשרי במינים גדולים 11. בכל אלה, היישומים העיקריים הם שימור פוריות, הפצת גנטיקה העילית של אוכלוסיות בעלי חיים, ואת הדור של בעלי חיים מהונדס כמו המחקר של spermatogenesis ו SSC ביולוגיה עם טכניקה זו היא לוגיסטית קשה יותר ויקר יותר במכרסמים. השתלת בתאי הנבט של מינים גדולים לתוך tubules seminiferous תוצאות עכברים colonizatיון של תאים התורמות והרחבת spermatogonial, אבל לא בידול המלא שלהם ככל הנראה בשל אי התאמה של תא מקבל תא סומטי עם בתאי הנבט ממינים רחוקים פילוגנטי 12. גישה חלופית היא השתלת בתאי הנבט של מינים גדולים יחד עם תא סומטי המקיף שלהם. אנו דיווח לראשונה בשנת 2002, כי שברים קטנים של רקמות אשך של גברים בשלים המושתלים מתחת לעור הגב של עכברים immunodeficient מסוגלים לשרוד ולעבור פיתוח מלא עם ייצור של זרע להפריה המוסמכת 13. מאז רקמת אשך xenografting הוכח להצליח מינים רבים ויצאו כתחליף יקר ללמוד פיתוח testis ו spermatogenesis של בעלי חיים גדולים בעכברים 14.
1. תא חיידק השתלת
תא חיידק השתלת מספק assay רק פונקציונלי אישור חד משמעי של נוכחות בתאי גזע spermatogonial (SSCs) באוכלוסייה התא. SSCs רק יכול הביתה ו ליישב את הנישה SSC על קרום במרתף וליזום התורם הנגזרות spermatogenesis. נבט השתלת איפשר ללמוד ולטפל SSCs באו?…
The authors have nothing to disclose.
העבודה מהמעבדה סופרים כבר נתמך על ידי משרד החקלאות / CSREES / NRICGP (2007-35203-18213); NIH / NCRR (2 RR17359 R01-06), NIH / NIEHS (1 R21 ES014856-01A2) ו אלברטה מתפתחת – פתרונות בריאות.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Collagenase (type IV) | Sigma | C5138 |
Trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 |
DNaseI | Sigma | DN25 |
DMEM | Invitrogen | 31053-028 |
Trypan blue stain | Invitrogen | 15250-061 |
Nylon mesh cell strainer | BD biosciences | 352340 (40μm) 352350 (70μm) |
Busulfan | Sigma | B2635 |
Thin-Wall Glass Capillaries | World Precision Instrument | TW 100-3 |
BD intramedic plyethylene tubing (PE100) | BD | CA-63018-725 |
Ethicon 6-0 Silk Suture | Ethicon | 706G |
Wound clips | BD | 427631 |
Sigmacote | Sigma | SL2 |
X-gal | Sigma | B4252 |
Potassium Ferrocyanide | Sigma | P9387 |
Potassium Ferricyanide | Sigma | P3667 |
magnesium chloride | Sigma | 208337 |
sodium deoxycholate | Sigma | D6750 |
N,N-Dimethylformamide | Sigma | D4551 |
Igepal CA-630 | Sigma | 18896 |