Summary
आरआईडीएल® (एक प्रमुख घातक ले जाने वाले कीड़ों की रिहाई) प्रणाली का उपयोग करके एडीज एजिप्टी के जनसंख्या दमन को प्राप्त करने के लिए, बड़ी संख्या में नर मच्छरों को रिहा करने की आवश्यकता है। इसके लिए उच्च गुणवत्ता वाले पुरुष मच्छरों की अधिकतम संख्या प्राप्त करने के लिए विश्वसनीय सिस्टम प्रदान करने के लिए बड़े पैमाने पर पालन तकनीकों और प्रौद्योगिकी के उपयोग की आवश्यकता है।
Abstract
मच्छरों के खिलाफ लड़ाई जीतने की कोशिश के लिए नई तकनीक ों और तरीकों की मांग की जा रही है । आणविक तकनीकों में हाल की प्रगति ने बाँझ कीट तकनीक (एसआईटी)1-3के आसपास आधारित मच्छर नियंत्रण के नए और अभिनव तरीकों का विकास किया है। एक नियंत्रण विधि जिसे रिडल (एक प्रमुख घातक ले जाने वाले कीड़ों की रिहाई) 4 के रूप में जानाजाताहै, एसआईटी के आसपास आधारित है, लेकिन विकिरण-नसबंदी5-8की आवश्यकता को दूर करने के लिए आनुवंशिक तरीकों का उपयोग करता है। एई. एजिप्टी के एक रिडल तनाव का ग्रैंड केमैन9,10में क्षेत्र में सफलतापूर्वक परीक्षण किया गया था; आगे क्षेत्र का उपयोग दुनिया भर के अन्य देशों में योजना बनाई है या प्रगति में है।
कई कीट प्रजातियों में और एक सप्ताह में अरबों के स्तर तक कीड़ों का बड़े पैमाने पर पालन स्थापित किया गया है। हालांकि, मच्छरों में, पालन आम तौर पर एक बहुत छोटे पैमाने पर किया गया है, सबसे बड़े पैमाने पर पालन के साथ 1970 और 80 के दशक में किया जा रहा है । एक RIDL कार्यक्रम के लिए यह संभव के रूप में कुछ महिलाओं के रूप में जारी करने के रूप में वे काटने और रोग संचारित करने के लिए वांछनीय है । एक बड़े पैमाने पर पालन कार्यक्रम में पुरुषों को जारी करने के लिए उत्पादन करने के लिए कई चरण हैं: अंडा उत्पादन, पिल्ला तक अंडे पालन, और फिर रिहाई से पहले महिलाओं से पुरुषों छंटाई । इन पुरुषों का उपयोग तब एक रिडल नियंत्रण कार्यक्रम के लिए किया जाता है, जिसे प्यूप या वयस्कों11,12के रूप में जारी किया जाता है।
आरआईडीएल का उपयोग करके मच्छरों की आबादी को दबाने के लिए बड़ी संख्या में उच्च गुणवत्ता वाले पुरुष वयस्कों को13,14पाला जाना चाहिए । निम्नलिखित OX513A के बड़े पैमाने पर पालन के लिए तरीकों का वर्णन करता है, एई के एक RIDL तनाव. एजिप्टी 8, रिहाई के लिए और एक नियंत्रण कार्यक्रम के लिए अंडे और बड़े पैमाने पर पालन RIDL पुरुषों के उत्पादन के लिए आवश्यक तकनीकों को शामिल किया गया ।
Introduction
मच्छर कई रोगजनकों को संचारित करते हैं जो मनुष्यों में कई बीमारियों का कारण बन सकते हैं और इन मच्छरों को नियंत्रित करना सदियों से चल रही लड़ाई रही है। रासायनिक और जैविक तरीकों के आधार पर कीड़ों को नियंत्रित करने की रणनीतियों में कुछ उल्लेखनीय सफलताएं मिली हैं, लेकिन कई मामलों में नियंत्रण लंबी अवधि में टिकाऊ नहीं रहा है। उदाहरण के लिए, ब्राजील ने 50 के दशक में एई. एजिप्टी का उन्मूलन हासिल किया लेकिन मच्छर ने पिछले 40-50 वर्षों में फिर से हमला किया है । यह कीटनाशक प्रतिरोध, पर्यावरण क्षति, खराब नियंत्रण कार्यक्रम कार्यान्वयन15-20,और पर्याप्त निगरानी या प्रतिक्रिया के बिना तेजी से पुनर्वणण सहित कई कारणों के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है।
मच्छरों के खिलाफ इस लड़ाई को जीतने की कोशिश के लिए नई तकनीक ों और तरीकों की मांग की जा रही है। आणविक तकनीकों में हाल की प्रगति ने बाँझ कीट तकनीक (एसआईटी)1-3के आसपास आधारित मच्छर नियंत्रण के नए और अभिनव तरीकों का विकास किया है। एक नियंत्रण विधि जिसे रिडल (एक प्रमुख घातक ले जाने वाली कीड़ों की रिहाई) 4 के रूप में जाना जाता है,एसआईटी के आसपास आधारित है, लेकिन विकिरण-नसबंदी की आवश्यकता को दूर करने के लिए आनुवंशिक तरीकों का उपयोग करता है। एई सहित कई कीट प्रजातियों के लिए आरआईडीएल उपभेदों का निर्माण किया गया है। एजिप्टी 5-8, एई का आरआईडीएल तनाव। एजिप्टी का ग्रैंड केमैन9,10में क्षेत्र में सफलतापूर्वक परीक्षण किया गया था। आगे क्षेत्र का उपयोग दुनिया भर के अन्य देशों में योजना बनाई है या प्रगति में है। रिडल का उपयोग करके मच्छरों की आबादी को दबाने के लिए बड़ी संख्या में उच्च गुणवत्ता वाले पुरुष वयस्कों को3,14पाला जाना होगा।
एक एसआईटी कार्यक्रम के लिए केवल पुरुषों को रिहा करना वांछनीय माना जाता है; मादा मच्छर रोग काटते हैं और संचारित करते हैं। इसके अलावा, जारी बाँझ पुरुषों को जारी महिलाओं द्वारा कार्यक्रम प्रभावशीलता को कम करने से 'विचलित' किया जा सकता है। पुरुष-केवल रिलीज को विकिरणित भूमध्य फल मक्खियों के साथ बड़े क्षेत्र प्रयोगों में मिश्रित सेक्स रिलीज की तुलना में 3-5 गुना अधिक प्रभावी दिखाया गया था21।
एक RIDL बड़े पैमाने पर पालन कार्यक्रम में, रिहाई के लिए पुरुषों के उत्पादन के लिए कई चरण हैं। पहला रिलीज पीढ़ी(चित्रा 1)के लिए आवश्यक अंडे का उत्पादन करना है। अगले चरण में अंडे को पिल्ले या वयस्कों के माध्यम से पीछे करना है, जो पिल्ले से लार्वा और मादा पिल्ले से पुरुष पिल्ले को अलग करता है। महिलाओं से पुरुषों के बड़े पैमाने पर अलग होने के लिए बड़े पैमाने पर छंटाईकेलिए उपयुक्त जीवन स्तर पर लिंगों के बीच अंतर की आवश्यकता होती है। एई एजिप्टी (और अन्य मच्छर प्रजातियों) में पुरुष और मादा पिल्ले के बीच एक महत्वपूर्ण आकार का अंतर है जिसका यौन पृथक्करण तकनीकों के लिए शोषण किया जा सकता है। इसके बाद हल किए गए रिडल पुरुषों को एक नियंत्रण कार्यक्रम में या तो प्यूप के रूप में या वयस्कों के रूप में11,12 जारीकिया जाता है।
निम्नलिखित OX513A, एई के एक RIDL तनाव के बड़े पैमाने पर पालन के लिए तरीकों का वर्णन करता है । एजिप्टी, रिलीज के लिए । वर्णित तरीकों में नियंत्रण कार्यक्रम के लिए अंडे और रिडल पुरुषों के उत्पादन के लिए आवश्यक तकनीकों को शामिल किया गया है।
Protocol
कीट ों की आवश्यकताएं
1. अवलोकन
- बड़े पैमाने पर पालन के कई चरण होते हैं, जिनमें से प्रत्येक बड़े पैमाने पर पालन इकाई के एक अलग क्षेत्र में किया जाता है। चित्रा 1 पालन के मुख्य चरण को दर्शाता है और वे बड़े पैमाने पर पालन सुविधा में कहां होते हैं।
2. कीट के लिए जैव सुरक्षा विचार
- इस परियोजना को साओ पाउलो विश्वविद्यालय-ब्राजील से पशु नैतिकता की समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था और सभी आवश्यक परमिट और अनुमोदन प्राप्त किए गए थे ।
- रिडल प्रणाली सशर्त घातकता का उपयोग करती है; एक आहार पूरक (टेट्रासाइक्लिन) आरआईडीएल प्रणाली की अभिव्यक्ति को रोकता है जिससे कीड़ों को बड़े पैमाने पर पाला जा सकता है; टेट्रासाइक्लिन के बिना मच्छर मर जाते हैं। टेट्रासाइक्लिन एई के प्रजनन स्थलों में नहीं पाया जाता है। जंगली में एजिप्टी तो भागने से उत्पन्न कोई भी संतान जीवित नहीं रहेगा। यह अन्य तरीकों (यानी विकिरण) द्वारा निष्फल जंगली प्रकार (डब्ल्यूटी) कीड़ों का उपयोग करने पर सुरक्षा का एक अतिरिक्त स्तरजोड़ता है।
- डबल-डोर प्रविष्टि का उपयोग करें, "अधिकृत कार्मिक केवल" संकेत और कीट स्क्रीन कीटनाशक में। डब्ल्यूटी कीड़ों के साथ कॉलोनी के प्रदूषण से बचने के लिए किसी भी खिड़कियों को सील किया जाना चाहिए और कीटाणुनाशक के अंदर से पलायन को रोकने में मदद करनी चाहिए।
- स्थानीय विनियमों और प्राधिकरणों के पास विशिष्ट अतिरिक्त या वैकल्पिक आवश्यकताएं हो सकती हैं। प्रारंभिक चरण में सूचना/मार्गदर्शन के लिए संबंधित प्राधिकारियों से संपर्क करें और एक कीटावस्था में आरआईडीएल तनाव स्थापित करने से पहले सभी आवश्यक परमिट और अनुमोदन सुरक्षित करें ।
- बड़े पैमाने पर पालन कीट केवल RIDL पालन के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए। कोई अन्य उपभेद या कीड़े मौजूद नहीं होना चाहिए। यह रोगजनकों के साथ रिडल तनाव और संदूषण के प्रदूषण से बचने के लिए है जो फिटनेस और अस्तित्व को प्रभावित कर सकता है, जारी किए गए पुरुषों की उत्पादकता और प्रभावशीलता को कम करता है।
3. कीट डिजाइन
- चित्रा 2 ब्रासिल में बायोफेरिका मॉस्कैमड में उपयोग की जाने वाली कीट की योजना दिखाता है।
- सभी कमरों का तापमान 26 डिग्री सेल्सियस ± 2) था जिसमें लगभग 70-80% और 12:12 घंटे की रोशनी: फ्लोरोसेंट लाइट स्ट्रिप्स का उपयोग करके अंधेरा चक्र सापेक्ष आर्द्रता थी।
- इस खाका विशिष्ट अंतरिक्ष आवश्यकताओं के अनुसार संशोधित किया जा सकता है, उदाहरण के लिए रिलीज के पैमाने समग्र आकार निर्धारित करेगा । हालांकि अंडा उत्पादन, पालन और छंटाई, गुणवत्ता नियंत्रण (QC) और रिलीज चार अलग क्षेत्रों में अलग किया जाना चाहिए: अंडा उत्पादन कॉलोनी, रिलीज पीढ़ी, QC, और रिहाई के लिए वयस्क भंडारण ।
- अंडा उत्पादन कॉलोनी कक्ष (लगभग 20 मीटर2)का उपयोग रिलीज पीढ़ी के लिए अंडे का उत्पादन करने के लिए किया जाता है।
- गुणवत्ता नियंत्रण क्षेत्र वह जगह है जहां प्रक्रियाओं की जांच करने और हैच दर, पिल्ले संख्या, पिल्ला आकार, और छंटाई और महिलाओं को हटाने की प्रभावशीलता को मापने सहित RIDL लाइन की फिटनेस की जांच करने के लिए प्रयोग किए जाते हैं । घातकता को मापने वाले ऑफसेट परखों का उपयोग करके फ्लोरेसेंस मार्कर और फेनोटाइप की उपस्थिति की जांच करके डब्ल्यूटीई संदूषण के लिए परीक्षण भी किए जाते हैं।
- रिलीज जनरेशन रूम (लगभग 36 एम2)को ट्रे के लिए पर्याप्त जगह और लार्वा और प्यूप की छंटाई की आवश्यकता होती है। ट्रे उद्देश्य निर्मित एल्यूमीनियम रैक में आयोजित कर रहे हैं । पालन और छंटाई के लिए एक बड़े कार्य क्षेत्र और सिंक की आवश्यकता होती है और ट्रे और पिंजरों की धुलाई के लिए एक और बड़े सिंक की आवश्यकता होती है। सीवर के माध्यम से जीवित मच्छरों के भागने को कम करने के लिए सिंक से अपशिष्ट जल आउटलेट में एक फिल्टर कैच ट्रैप शामिल किया गया है।
- ट्रे के लिए उपयोग किए जाने वाले सभी पानी को एक नाले के माध्यम से निपटाया जाता है, जिसमें एक जाल युक्त डिब्बा होता है जो विकास के किसी भी चरण में कीड़ों से बचने से रोकता है।
- रिलीज के लिए वयस्कों के भंडारण के लिए एक क्षेत्र की आवश्यकता होती है (रिलीज के लिए वयस्क भंडारण, चित्रा 2)जिसमें रिलीज उपकरणों को पकड़ने के लिए धमकी देने वाला होता है जबकि वयस्क रिलीज से पहले परिपक्व होते हैं।
बड़े पैमाने पर पालन RIDL के लिए उत्पादन के तरीके:
अंडा उत्पादन कॉलोनी वयस्कों का उत्पादन करने के लिए रिलीज पीढ़ी(चित्रा 1)में उपयोग किए जाने वाले अंडे का उत्पादन करती है। दो पालन विधियों में कई समानताएं हैं लेकिन कुछ अलग अंतर भी हैं। पालन प्रक्रियाओं है कि दोनों प्रक्रियाओं के लिए एक ही हैं केवल अंडा उत्पादन कॉलोनी अनुभाग में वर्णित हैं।
अंडा उत्पादन कॉलोनी
4. लार्वा उत्पादन
अंडा उत्पादन कॉलोनी रिलीज पीढ़ी के लिए होमोज़िगस OX513A RIDL अंडे8 उत्पन्न करता है। उच्च गुणवत्ता नियंत्रण आपूर्ति किए गए अंडों की व्यवहार्यता, फिटनेस और तनाव अखंडता सुनिश्चित करता है।
- हैचिंग के लिए उत्तेजना घुलित ऑक्सीजन के निम्न स्तर के साथ पानी में पनडुब्बी है। पानी में ऑक्सीजन के स्तर को कम करने के लिए, पानी को तब तक गर्म करें जब तक कि यह उबलता न हो और तुरंत 400 मिलीलीटर को 500 मिलीलीटर ग्लास जार (74 मिमी ओपनिंग परिधि) में रखें, ढक्कन को सुरक्षित रूप से जकड़ें और ठंडा होने के लिए कई घंटों तक कमरे के तापमान पर छोड़ दें।
- उबले हुए पानी के एक जार में अंडे के 1 ग्राम रखो, फिर से सील और एक घंटे के लिए प्रतीक्षा करें। सामग्री को 2 एल पानी के साथ ट्रे में स्थानांतरित करें और कीट परिस्थितियों में रात भर छोड़ दें।
- रची लार्वा को पानी की एक ज्ञात मात्रा में रखें और अलीकोट लेने के लिए पर्याप्त समय के लिए चुंबकीय उभार और पिस्सू का उपयोग करके हलचल करें; सख्ती से सरगर्मी या विस्तारित समय के लिए लार्वा को नुकसान पहुंचाता है और इसे न्यूनतम रखा जाना चाहिए। लार्वा को हैच करने के लिए उपयोग की जाने वाली मानक मात्रा 1 एल है, हालांकि 300 से अधिक लार्वा/एमएल के घनत्व को गिनना कठिन है और हानिकारक हो सकता है। इसलिए लगभग 300,000 अंडे/एल पानी से अधिक न निकलें।
- किसी भी अतिरिक्त पानी को सोखने के लिए एक शोषक स्पंज के शीर्ष पर, 1 सेमी वर्गों के ग्रिड के साथ, तीन 1 मिलीलीटर एलिकोट्स लेकर और शोषक कागज की शीट पर रखकर हैच दर निर्धारित करें। एक रची अंडे की लापता टोपी की तलाश करके तीन वर्गों से रची और nonhatched अंडे की संख्या गिनती। 80-90% के आसपास एक हैच दर की उम्मीद है।
- प्रत्येक 1 मिलीलीटर के चार एलिकोट लें और चार काले वजन वाली नौकाओं में रखें (लार्वा सफेद होते हैं और इसलिए काले पृष्ठभूमि के खिलाफ अधिक आसानी से दिखाई देते हैं) और आंखों द्वारा मौजूद जीवित लार्वा की संख्या गिनती करें; एक काउंटर के उपयोग की सिफारिश की है। इसके बाद प्रति एमएल लार्वा की औसत संख्या का उपयोग प्रत्येक ट्रे पर जोड़ने के लिए पानी की मात्रा की गणना करने के लिए किया जाता है ताकि प्रति ट्रे लार्वा की वांछित संख्या प्राप्त की जा सके।
- घनत्व में बड़े अंतर हो सकते हैं जिस पर लार्वा को उपभेदों और प्रजातियों के बीच पाला जा सकता है। यह भी जंगली प्रकार के पुरुषों के लिए RIDL वयस्क पुरुष आकार की तुलना करने के लिए वांछनीय है; आदर्श रूप से आप बड़े आकार के रिडल पुरुषों के समान चाहते हैं जो जंगली पुरुषों के साथ सफलतापूर्वक प्रतिस्पर्धा कर सकते हैं। इसलिए प्रत्येक रिडल तनाव के लिए लार्वा के आदर्श घनत्व को निर्धारित करने की आवश्यकता है और पालन के लिए अंतरिक्ष की बाधाओं और उत्पादन के पैमाने के खिलाफ एक व्यापार बंद है। 0.1-2.5 लार्वा/मिलीलीटर से लेकर घनत्व हमने उत्पादन उत्पादन और गुणवत्ता का एक अच्छा संयोजन पाया है; मेडिसी23द्वारा भी चर्चा की .
- ट्रे में लार्वा जोड़ें। हमारी सुविधा में हम उत्पादन के लिए लार्वा के घनत्व को प्राप्त करने के लिए लगभग 53 सेमी x 37 सेमी x 8 सेमी (एल एक्स डब्ल्यू एक्स एच) और पानी की आवश्यक मात्रा को मापने वाली ट्रे का उपयोग करते हैं।
- 30 माइक्रोग्राम/मिलीलीटर की आवश्यक अंतिम एकाग्रता प्राप्त करने के लिए 1:100 कमजोर पड़ने पर ट्रे में टेट्रासाइक्लिन (3 मिलीग्राम/मिलीलीटर पानी में) का एक स्टॉक समाधान जोड़ें।
- रोजाना फ्लेक फिश फूड(www.sera.de)के साथ लार्वा खिलाएं, जिसे बारीक पाउडर से कुचल दिया गया हो। तालिका 1 प्रति दिन लार्वा प्रति मिलीग्राम भोजन में विशिष्ट भोजन व्यवस्था दिखाता है। ऊपर वर्णित कीट परिस्थितियों में छंटाई के उपयुक्त दिन तक लार्वा को खिलाएं।
5. प्यूप और पुरुष/महिला प्यूप से लार्वा छंटाई
- पिल्ले से लार्वा को अलग करके हैचिंग के 8 दिन बाद प्यूप से लार्वा को सॉर्ट करें। फिर पुरुषों के लिए पुआल को सेक्स-सॉर्ट करें। प्लेट विभाजक24,25 के रूप में जाना जाने वाला एक उपकरण पुरुष पिल्ले से और मादा पिल्ले से लार्वा को सॉर्ट कर सकता है। चित्रा 3 नर से और मादा प्यूप से लार्वा को अलग करने के लिए इस प्लेट विभाजक के उपयोग को दिखाता है।
- नीचे एक जाल के साथ एक मापने चम्मच का उपयोग करना, यह ५०० pupae या उससे अधिक के साथ जांचना और इसका इस्तेमाल पिंजरों की स्थापना और पुरुषों और महिलाओं पिल्ले का उत्पादन की कुल राशि का अनुमान लगाने के लिए ।
- छंटाई के पहले दिन (8 दिन) अधिकांश पिल्ले पुरुष हैं, इसलिए हल किए गए लार्वा को अगले दिन के माध्यम से ट्रे और रियर में वापस रखें जब अधिकांश पिल्ले महिलाएं(चित्रा 4)होती हैं।
- प्रत्येक दिन छंटाई प्रक्रिया को दोहराएं जैसा कि चरण 2.1-2.3 में वर्णित है जब तक कि सभी लार्वा प्यूपेटेड न हो या कार्य सप्ताह के अंत तक।
- एक पिंजरे में 1,000 पुरुष पिल्ले (उपाय चम्मच का उपयोग करना) रखें और दिन 9 में एक ही पिंजरे में 3,000 मादा प्यूप जोड़ें (हम जाल शीर्ष और एक नेटेड एक्सेस होल के साथ अनुकूलित 30 सेमी उच्च और 30 सेमी व्यास पीवीसी पाइप का उपयोग करते हैं, लेकिन 30 सेमी x 30 सेमी x 30 सेमी प्लास्टिक पिंजरे भी बगडोरम से उपलब्ध हैं)।
- वयस्कों को कम से कम 2 दिनों के लिए दोस्त बनाने की अनुमति दें और उन्हें सुक्रोज समाधान प्रदान करें (10%) रक्त आहार से पहले गीले कपास विज्ञापन लिबिटम पर। एक सप्ताह में दो रक्त फ़ीड के साथ दो सप्ताह (~ दो गोनोट्रोफिक चक्र) के लिए अंडे ले लीजिए। यह ३,००० महिलाओं (४८ अंडे/महिला के एक औसत) के एक पिंजरे से एक औसत १४३,० अंडे की पैदावार । एक सप्ताह में 4 मिलियन अंडे के उत्पादन के लिए प्रत्येक सप्ताह लगभग 28 पिंजरों को स्थापित करने की आवश्यकता होती है।
6. रक्त आहार
- एक एल्यूमीनियम प्लेट खिला प्रणाली सप्ताह में दो बार रक्त के साथ पिंजरों की आपूर्ति करती है। रक्त की एक जेब एक एल्यूमीनियम प्लेट के पक्ष में बनाया जाता है (10 सेमी x 10 सेमी x 3 मिमी) पैराफिल्म(चित्रा 5)के साथ । खिलाने को प्रोत्साहित करने के लिए, प्लेट फीडर के शीर्ष पर एक गर्म बीन बैग रखकर रक्त गर्म किया जाता है। बीन बैग में कपड़े के बैग में लगभग 250 ग्राम गेहूं के दाने शामिल थे, जिसे माइक्रोवेव में लगभग 10 सेकंड के लिए गर्म किया जाता है। हम खिलाने के लिए उपयोग किया जाने वाला रक्त एक स्थानीय बूचड़खाने से है; चूंकि ये जानवर (मुख्य रूप से बकरी और भेड़) मानव उपभोग के लिए हैं, इसलिए उन्हें रोगजनकों की उपस्थिति से बचने के लिए परीक्षण किया जाता है।
- रक्त खिलाने के तीन दिन बाद, मादाओं को अपने अंडे देने के लिए एक अंडाशय स्थल प्रदान किया जाता है। अंडाशय साइट एक गोल प्लास्टिक कंटेनर के बारे में 1/4 पानी और फिल्टर कागज के अंदर कवर के साथ भरा कंटेनर है । दो दिन बाद ओविपोजिशन साइट हटा दी जाती है। अधिकतम अंडा उत्पादन के लिए, सुनिश्चित करें कि फिल्टर पेपर कंटेनर के अंदर पूरी उपलब्ध सतह को कवर करता है और गीला रहता है।
- अंडे के कागज निकालें और शोषक कागज पर जगह के लिए कीटनाशक परिस्थितियों में सूखी; अंडे को उच्च आर्द्रता पर कंडीशनिंग की अवधि की आवश्यकता होती है (70% से अधिक) बिछाए जाने के बाद कम से कम 48 घंटे की। अंडे को 3 महीने तक के लिए कीट में छोड़ दिया जा सकता है, जब तक कि आर्द्रता उच्च25रखी जाती है।
- अंडा उत्पादन कॉलोनी को रिलीज कार्यक्रम के लिए साप्ताहिक आधार पर आवश्यक अंडों की संख्या प्रदान करने के लिए पर्याप्त आकार का होना चाहिए। ऊपर वर्णित सुविधा साप्ताहिक स्थापित 28 पिंजरों के साथ लगभग ४,०,० अंडे का उत्पादन कर सकते हैं । रिलीज जनरेशन और अंडा उत्पादन कॉलोनी के लिए कम से कम 4 सप्ताह के अंडों की गारंटी देने के लिए पर्याप्त अंडे रखने की सिफारिश की जाती है।
रिलीज जनरेशन
7. लार्वा उत्पादन
रिलीज पीढ़ी के लिए हैचिंग, पालन और छंटाई प्रक्रियाएं अंडा उत्पादन कॉलोनी के लिए पहले वर्णित विधि के समान हैं। हालांकि, उत्पादन का पैमाना बहुत बड़ा है और इसके लिए अधिक ट्रे और अधिक प्रयास की आवश्यकता होती है।
8. लार्वा छंटाई, पुरुष Pupae, और महिला Pupae
- लार्वा, पुरुष पिल्ले और मादा पिल्ले की छंटाई अंडा उत्पादन के लिए वर्णित विधि के समान है।
- पुरुष पिल्ले को छंटाई के बाद रिलीज से पहले महिला संदूषण की जांच करना महत्वपूर्ण है; 1% से अधिक महिलाएं मौजूद नहीं होनी चाहिए। 500 पिल्ले (तीन यादृच्छिक पिल्ले मापने वाले चम्मच) के तीन एलिकोट्स लें और मौजूद महिला पिल्ले की संख्या गिनें। महिलाओं की पहचान की जा सकती है क्योंकि वे आम तौर पर पुरुषों की तुलना में बड़ी होती हैं और जननांग पालि के आकार में अंतर से(चित्र 6)27. यदि 1% से अधिक महिलाएं हैं तो उन्हें फिर से सहारा लिया जाना चाहिए और जांच की जानी चाहिए।
- रिहाई के लिए 8 और 9 दिन से केवल पुरुषों का उपयोग करें; किसी भी शेष लार्वा और पिल्ले को ऑटोक्लेव करें। ब्राजील में, इस कचरे को चिकित्सा अपशिष्ट के रूप में उसी तरह माना जाना चाहिए लेकिन अन्य देशों में विनियम भिन्न हो सकते हैं । गुणवत्ता नियंत्रण, पालन और बड़ी संख्या से संदूषण जोखिम, और कम गुणवत्ता नियंत्रण में अंतर के कारण अंडा उत्पादन कॉलोनी के लिए रिलीज पीढ़ी से मादा पिल्ला और लार्वा का उपयोग न करें।
रिलीज के लिए वयस्क भंडारण: रिलीज से पहले उभरने और परिपक्व होने के लिए पुरुषों को रिलीज उपकरणों में रखें। रिलीज उपकरणों का विवरण इस विधि में शामिल नहीं हैं। हालांकि हमारे द्वारा उपयोग किए जाने वाले रिलीज उपकरणों की क्षमता लगभग 1,000 पुरुषों की है। रिलीज विधि विवरण (रिलीज डिवाइस और रिलीज सिस्टम) इस विधि में शामिल नहीं हैं।
Representative Results
उत्पादन के लिए अपेक्षित पिल्ले परिणाम चित्र 4में दिखाए गए हैं । पुरुष पहले प्यूपेट करते हैं, 8 दिन पर बढ़ता जा रहा है और महिलाओं को हैचिंग के बाद 9 दिन चोटी । महिलाओं से पुरुषों को सॉर्ट करने के लिए सबसे अच्छा समय जानने के लिए इस पिल्ला वक्र को मापना महत्वपूर्ण है।
पुरुष और महिला पिल्ले को छांटने के 6 महीने से अधिक के परिणाम बताते हैं कि औसतन महिला संदूषण 0.02% है(चित्र 5; SEM = 0.004%) यह संदूषण दर केवल 400 महिलाओं को रिलीज के एक महीने से अधिक जारी (लगभग दो मिलियन पुरुषों) का प्रतिनिधित्व करती है। प्रति सप्ताह वर्तमान अंडा उत्पादन 4 मिलियन है। इनमें से, 3.5 मिलियन अंडे कॉलोनी और शेष बैकअप के लिए संग्रहीत उत्पादन के लिए रची जाती हैं। अंडे के लगभग 11% अंडे उत्पादन कॉलोनी और रिलीज पीढ़ी के लिए शेष के लिए उपयोग किया जाता है। अंडा हैच दर औसत 87.3% (SEM = 0.5%) और L1 लार्वा से पुरुष पिल्ले की उपज औसत 29.5% (एसईएम = 1.2)। रिलीज जनरेशन कॉलोनी के लिए हर हफ्ते दो मिलियन लार्वा पाला जाता है जो लगभग 571,000 पुरुष प्यूप (एसईएम = 14,000) का उत्पादन करता है। उद्भव और रिहाई के दौरान प्यूप और वयस्क मृत्यु दर औसत 5% है, जिसके परिणामस्वरूप लगभग 543,000 (एसईएम = 13,000) प्रति सप्ताह वयस्क पुरुष मच्छरों को जारी करते हैं। यह अनुमान है कि 4 मिलियन अंडे/सप्ताह के वर्तमान उत्पादन को बर्बादी और भंडारण से होने वाले नुकसान को कम करने के लिए आगे अनुकूलन के साथ ~ 3 मिलियन/सप्ताह तक कम किया जा सकता है । कुल 6 कर्मचारियों में वर्णित उत्पादन के लिए आवश्यक हैं; चार रिलीज पीढ़ी पर काम कर रहे है और अंडे कॉलोनी पर शेष दो ।
गुणवत्ता नियंत्रण
वयस्कों की गुणवत्ता, पालन की दक्षता, श्रम और लागत को बनाए रखने के लिए गुणवत्ता नियंत्रण आवश्यक है।
ट्रांसजीन फेनोटाइप नियंत्रण
रिडल जीन अभिव्यक्ति को सत्यापित करने के लिए दो नियंत्रण किए जाते हैं, सबसे पहले फ्लोरेसेंस मार्कर की अभिव्यक्ति की जांच करने के लिए और दूसरा टेट्रासाइक्लिन के अभाव में रिडल घातक विशेषता की अभिव्यक्ति की जांच करने के लिए। सभी लार्वा फ्लोरोसेंट मार्कर व्यक्त करना चाहिए। यह जांचने के लिए कि क्या फ्लोरोसेंट मार्कर को उम्मीद के अनुसार व्यक्त किया जा रहा है, 2,000 पहले इंस्टार लार्वा को DsRed2 फिल्टर (टेक्सास रेड) के साथ एक लीका MZFLIII स्टीरियोमाइक्रोस्कोप के तहत जांचा जाता है ताकि यह निर्धारित किया जा सके कि क्या कोई गैर-नरम व्यक्ति मौजूद हैं। टेट्रासाइक्लिन के बिना रिडल जीन व्यक्त किया जाता है और हम8वयस्कों के लिए 3-4% अस्तित्व की उम्मीद करते हैं। इसकी जांच करने के लिए, प्रत्येक रिलीज बैच के लिए बिना टेट्रासाइक्लिन के एक अतिरिक्त ट्रे स्थापित की जाती है। सामान्य पालन के लिए एकमात्र अंतर यह है कि भोजन 6 दिन से 2/3 तक कम हो जाता है क्योंकि मृत लार्वा के कारण अतिरिक्त भोजन के संचय से अतिरिक्त बैक्टीरियल विकास हो सकता है ।
पालन नियंत्रण
रिलीज पीढ़ी से चार ट्रे बेतरतीब ढंग से हल करने के लिए चुना जाता है और अलग से गिना जाता है । प्रत्येक ट्रे से हर दिन पुरुष और महिला पिल्ले की संख्या दर्ज की जाती है(चित्र 4)। पुरुषों और महिलाओं की अपेक्षित संख्या से कोई भी विचलन एक संभावित मुद्दा है कि उत्पादन और/या फिटनेस को प्रभावित कर सकता है और अंडा कॉलोनी की तुलना में मदद करने के लिए समस्याओं के स्रोत का निर्धारण इंगित करता है ।
प्यूप माप
प्यूप का आकार वयस्क आकार28से सहसंबद्ध दिखाया गया है । वयस्क आकार के लिए गुणवत्ता नियंत्रण के रूप में सेफेलोथोरैक्स चौड़ाई को रिलीज पीढ़ी से प्रत्येक छंटाई दिन के लिए कम से कम 30 पुरुष पिल्ले से मापा जाता है; अंडा उत्पादन कॉलोनी महिला पिल्ले के लिए भी मापा जाता है। औसत सेफेलोथोरैक्स चौड़ाई जारी किए गए पुरुषों के लिए 1.05 मिमी (एसईएम 0.005) और 1.04 मिमी (एसईएम = 0.006) और पुरुषों और महिलाओं के लिए क्रमशः अंडा उत्पादन, कॉलोनी; इसी तरह के परिणाम एई. एल्बोपिक्टस मास पालन24के लिए प्राप्त किए गए .
चित्रा 1. एक RIDL/SIT कार्यक्रम में उपयोग के लिए बड़े पैमाने पर पालन मच्छरों के चरण । अंडा उत्पादन कॉलोनी में रिलीज पीढ़ी को आपूर्ति किए गए अंडों की गुणवत्ता सुनिश्चित करने के लिए उच्च स्तर का गुणवत्ता नियंत्रण है। अंडे को रिलीज कॉलोनी में पिल्ले के माध्यम से पाला जाता है, जहां पुरुषों को मादाओं से हल किया जाता है। पुरुष वयस्कों का उपयोग आरआईडीएल नियंत्रण कार्यक्रम के लिए किया जाता है।
चित्रा 2। एक रिलीज कार्यक्रम के लिए RIDL पुरुषों के उत्पादन के लिए पालन सुविधा की योजनाबद्ध । उच्च गुणवत्ता वाले अंडे लगातार अंडा उत्पादन कॉलोनी कमरे में उत्पादित होते हैं और फिर रिलीज जनरेशन रूम में प्यूप के माध्यम से पाला जाता है। लार्वा और पिल्ले को फिर अलग कर दिया जाता है और पुरुषों के लिए प्यूप सेक्स-सॉर्ट किया जाता है। पुरुषों तो रिलीज उपकरणों में रखा जाता है और वयस्क भंडारण और रिहाई के कमरे में रिहाई के लिए वयस्कों के लिए परिपक्व करने की अनुमति दी ।
चित्र 3। एक प्लेट विभाजक26का उपयोग कर लार्वा, पुरुष पिल्ले, और मादा पिल्ले को अलग करना। प्लेट विभाजक इन तीन अलग-अलग जीवन चरणों को सॉर्ट करने के लिए लार्वा, पुरुष पिल्ले और मादा प्यूप के बीच आकार के अंतर का उपयोग करता है; लार्वा पुरुष पिल्ले की तुलना में छोटे होते हैं जो बदले में मादा पिल्ले की तुलना में छोटे होते हैं। उपकरण में दो ग्लास प्लेटें शामिल हैं; एक तिरछा धातु फ्रेम करने के लिए तय किया जाता है और दूसरा पहली प्लेट के शीर्ष पर बैठता है और चार समायोजन शिकंजा(ए)का उपयोग करके पहले के सापेक्ष स्थानांतरित किया जा सकता है। चार समायोजन शिकंजा बाहरी प्लेट को पीछे की प्लेट के कोण पर सेट करने की अनुमति देता है ताकि प्लेटों के बीच एक कील के आकार की जगह बनाई जा सके, नीचे की ओर पतला हो। लार्वा और पिल्ले को कांच की प्लेटों(बी)के बीच डाला जाता है और पानी की नली(सी)का उपयोग करके धीरे-धीरे धोया जाता है। प्लेट के कोण को समायोजित करके, लार्वा, पुरुष पिल्ले और मादा प्यूप को अलग किया जा सकता है(डी)। लगातार फ्लशिंग और प्लेट कोण को बढ़ाने के साथ लार्वा को पहले (छलनी में) के माध्यम से निकाला जा सकता है, इसके बाद पुरुष पिल्ले और अंत में मादा प्यूप।
चित्र 4. बड़े पैमाने पर पाला RIDL एई. एजिप्टी केलिए पिल्ला घटता है । यह ग्राफ प्रति सप्ताह ~ 135,000 पिल्ले के साथ 23 सप्ताह के अवलोकन के दौरान बड़े पैमाने पर पाला रिडल पुरुष और महिला पिल्ले के लिए औसत प्रतिशत पिल्ला दिखाता है। त्रुटि सलाखों = मतलब की मानक त्रुटि, एन = 23। पहले संग्रह पर (8 दिन) हम औसत 59% पुरुष और कुल pupae से 30% महिला pupae पर बरामद 5 दिनों में ट्रे से बरामद किया।
चित्रा 5। हल किए गए पुरुष पिल्ले का औसत महिला संदूषण। यह ग्राफ छह महीने की अवधि में हैचिंग के बाद 8 दिन पर पुरुष छंटाई के दौरान मासिक औसत प्रतिशत महिला संदूषण से पता चलता है ।
चित्रा 6. एल्यूमीनियम प्लेट रक्त फीडर प्रणाली। प्लेट(बी)पैराफिल्म(ए)से ढकी हुई है और एक जेब में रक्त को पाइप किया जाता है और फिर सील(डी)होता है। प्लेट को पिंजरे पर रखा जाता है और ऊपर(ई)पर एक गर्म बीन बैग(सी)रखकर गर्म किया जाता है।
चित्रा 7। भेद पुरुष और महिला एई. एजिप्टी पिल्ले। एई. एजिप्टी प्यूपे को जननांग पालि के आकार में अंतर (पैडल के ठीक नीचे प्यूपल पेट सेगमेंट के अंत में) से मज़बूती से सेक्स किया जा सकता है। इसके अलावा नर भी महिलाओं की तुलना में छोटे होते हैं।
तालिका 1. एई. एजिप्टी रिडल लार्वा (प्रति लार्वा प्रति दिन भोजन की मिलीग्राम) के लिए सामान्य भोजन व्यवस्था। प्रति ट्रे लार्वा की कुल संख्या से आवश्यक भोजन की वास्तविक मात्रा की गणना करना।
Discussion
RIDL मच्छरों को नियंत्रित करने का एक प्रभावी और पर्यावरण की दृष्टि से सुरक्षित तरीका है3,29-31। यह तकनीक एक एकीकृत कीट प्रबंधन कार्यक्रम पर लागू होती है और लार्वानाशक, प्रजनन स्थल में कमी और व्यभिचार सहित अधिकांश वर्तमान नियंत्रण विधियां इस तकनीक के अनुकूल हैं। यह विधि एई के नियंत्रण में उपयोग के लिए प्रति सप्ताह 570,000 रिडल पुरुष पिल्ले का उत्पादन करने का तरीका बताती है। एजिप्टी और हमारे ज्ञान के लिए यह इस पैमाने पर ट्रांसजेनिक मच्छरों के उत्पादन का पहला वर्णन है । 1 9 60 और 70 के दशक में जंगली प्रकार एई. एजिप्टी के लिए कुछ तुलनीय उत्पादनप्रणालियांविकसित की गई थीं, हालांकि तब से इस पैमाने पर कोई तुलनीय उत्पादन नहीं हुआ है। ब्राजील में फरवरी 2011 से फरवरी 2012 तक लगभग 11 मिलियन पुरुषों को रिहा किया गया है। किसी दिए गए क्षेत्र को नियंत्रित करने के लिए आवश्यक पुरुषों की संख्या जंगली आबादी के आकार, जारी पुरुषों के फैलाव, रिहाई के बाद पुरुषों के अस्तित्व और संभोग प्रतिस्पर्धात्मकता, और पर्यावरणीय स्थितियों सहित कई कारकों पर निर्भर करती है। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि रिडल मच्छरों की आबादी को कम से कम 80% 9 तक कम करसकताहै।
उत्पादन के पैमाने और पुरुषों की गुणवत्ता बनाम लागत के लिए बड़े पैमाने पर पालन को अनुकूलित करने के बीच एक संतुलन की आवश्यकता है। उदाहरण के लिए, लार्वा घनत्व बढ़ाने से आवश्यक स्थान, श्रम और समय को32तक कम करके उत्पादन क्षमता में वृद्धि हो सकती है। हालांकि, लार्वा के बहुत अधिक घनत्व के परिणामस्वरूप कम संभोग क्षमता32,33के साथ छोटे और छोटे जीवित पुरुष हो सकते हैं। एक SIT कार्यक्रम के संबंध में पुरुषों की गुणवत्ता अंततः क्षेत्र में महिलाओं के साथ दोस्त के लिए जारी पुरुषों की क्षमता से मूल्यांकन किया जाएगा । 9,10वन्य समकक्षों के सापेक्ष संभोग प्रतिस्पर्धात्मकता का आकलन करने के लिए व्यापक क्षेत्र मूल्यांकन की आवश्यकता होती है । यह अक्सर यह मूल्यांकन करने के लिए अव्यावहारिक बनाता है कि कौन से कारक 'उच्च गुणवत्ता वाले' पुरुष मच्छर बनाते हैं। हालांकि, बड़े पैमाने पर बड़े पैमाने पर पालन में लगातार उत्पादन और गुणवत्ता (जिस हद तक नियमित रूप से मूल्यांकन किया जा सकता है) को बनाए रखना सर्वोपरि है। इसके लिए उच्च स्तर की सतर्कता और सभी प्रक्रिया के मानकीकरण की आवश्यकता होती है जिसमें छोटे उतार-चढ़ाव संभावित रूप से महत्वपूर्ण प्रभाव डालते हैं । एल 1 लार्वा का अलीकोटिंग एक महत्वपूर्ण कदम है और इस बिंदु को दिखाता है। अच्छी गुणवत्ता के उत्पादन के लिए ट्रे में लार्वा की सही संख्या का बहाना आवश्यक है। भोजन शासन लार्वा की विशिष्ट संख्या के लिए ठीक से सिलवाया गया है। बहुत कम/कई लार्वा के परिणामस्वरूप अधिक/अंडर फीडिंग होगी, जो लार्वा अस्तित्व, पिल्ले के आकार और पिल्ला के समय को प्रभावित करती है । यदि बड़े पैमाने पर पालन की कला के लिए एक रहस्य है तो यह सुनिश्चित करना है कि उत्पादन चक्र में कई छोटे कदम लगातार, ठीक और उच्च स्तर के गुणवत्ता नियंत्रण के साथ आयोजित किए जाते हैं, जैसा कि इस पेपर में वर्णित है।
Disclosures
ऑक्सीटेक से संबद्ध लेखकों के पास ऑक्सीटेक लिमिटेड ऑक्सीटेक लिमिटेड और ऑक्सफोर्ड विश्वविद्यालय में रोजगार और/या इक्विटी रुचि इस पेपर के विषय से संबंधित बौद्धिक संपदा है ।
Acknowledgments
हम वित्तीय सहायता के लिए बायोफब्रिका मोस्कैमड ब्रासिल, फंडाकाओ डी एम्पारो ए पेस्किसा डो एस्टाडो डी साओ पाउलो (एफएपीईपी) और कॉन्सेल्हो नैसिनल डी डेसेवोल्विमेंटो सिएंटफिसो ई टेक्नोलोजिया (CNPq) का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं। हम निम्नलिखित लोगों को उनकी सहायता के लिए भी धन्यवाद देना चाहेंगे; मरियम डॉस सैंटोस, गिलडीएन सिल्वा, गेसिलेन डॉस सैंटोस, फैबियो गोंजाल्विस, जॉन पॉल ओलिविएरा, लुइज़ा गार्जिएरा, जोस कार्लोस वैलेंका।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Vipan Premium |
Sera GmbH | 190 |
http://www.sera.de/uk/pages/products/product/sera-vipan-3.html |
| Tetracycline |
Sigma Aldrich | T7660 |
|
| Plate separator |
J.W. Hock | 5412 |
http://www.johnwhock.com/download/manuals/instr_5412_separator.pdf |
| Parafilm M |
Pechiney Plastic packing | PM-996 |
|
| Rearing pans for Release generation (53 cm x 38 cm x 8 cm) |
Pleion | 0757 |
|
| Fluorescent scope |
Leica Microsystems | MZ FLIII |
http://www.leica-microsystems.com/fileadmin/downloads/Leica%20MZ%20FLIII/Brochures/M1-160-0de.pdf |
| Adult cages |
BugDorm | DP1000 |
http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html |
| Filter paper |
CELAB |
References
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