Hier zeigen wir unser Protokoll zur Isolierung von basalen und submuköse Drüsen Gangzellen von Maus Luftröhre. Darüber hinaus zeigt das Verfahren zum Einspritzen von Stammzellen in die dorsale Maus Fettkörper ein erstellen<em> In vivo</em> Modell der submukösen Drüsen Regeneration.
Die große Atemwege sind in direktem Kontakt mit der Umwelt und daher anfälliger für Verletzungen von Toxinen und Krankheitserregern, dass wir den Atem in 1. Die großen Atemwege erfordern daher eine effiziente Reparatur-Mechanismus, um unseren Körper zu schützen. Diese Reparatur-Prozess tritt aus Stammzellen in den Atemwegen und Isolierung dieser Stammzellen aus den Atemwegen ist wichtig für das Verständnis der Mechanismen der Reparatur und Regeneration. Es ist auch für das Verständnis abnorme Reparatur, die Atemwegserkrankungen 2 führen kann wichtig. Das Ziel dieses Verfahrens ist es, ein neues Stammzellpopulation von den Maus trachealen submucosalem Drüsenkanäle isolieren und diese Zellen in vitro und in vivo Modellsystem zu platzieren, um die Mechanismen der Reparatur und Regeneration der submucosalen Drüsen 3 zu identifizieren. Diese Produktion zeigt Methoden, die zur Isolierung und Test der Kanal-und basalen Stammzellen aus dem großen Atemwege 3 werden kann. Dies wird uns erlaubenzu Erkrankungen der Atemwege, wie zystischer Fibrose, Asthma und chronisch obstruktiver Lungenerkrankung studieren. Derzeit gibt es keine Verfahren zur Isolierung von submucosalem Drüse Gangzellen und keine in vivo-Modellen, um die Regeneration des submucosalen Drüsen studieren.
Diese Technik zum Kanal und basalen Zellen aus den Atemwegen zu isolieren, ist für ein besseres Verständnis der Atemwege Reparatur und Regeneration und Atemwegserkrankungen wichtig. Die hier beschriebenen Techniken sind ein paar wichtige Schritte. Die erste ist die optimierte enzymatische Verdauung Zeitraum. Die zweite ist die Schaffung eines einheitlichen Zellsuspension durch serielle Passage mit progressiv höhere Gage Nadeln Zelle Scherung zu verhindern, sondern brechen Zellklumpen. Die dritte ist die FACS-Analyse,…
The authors have nothing to disclose.
Wir möchten die Grundzüge der Stem Cell Research Center FACS anerkennen und vor allem danke Jessica Scholes und Felicia Codrea für ihre Hilfe bei der Zellsortierung. Die Arbeit wurde durch CIRM RN2-00904-1, K08 HL074229, American Thoracic Society / COPD Foundation ATS-06-065, Das Concern Foundation, The UCLA Jonsson Comprehensive Cancer Center Thoracic Oncology Program / Lung Cancer SPORE, der University of California Cancer finanziert Forschung Coordinating Committee und das Gwynne Hazen Kirsche Memorial Laboratories (BG).
Name of the reagent | Company | Catalog number |
Complete medium 10: DMEM-F-12 , 50/50, 1X) |
Mediatech | 15-090-CV |
Hepes (15 mM) | Invitrogen | 15630 |
Sodium bicarbonate (3.6mM or 0.03%) | Invitrogen | 25080 |
L-glutamine (4 mM) | Mediatech | 25-005-Cl |
Penicillin (100 U/ml) | Mediatech | 30-001-CI |
Streptomycin (100 μg/m) | Mediatech | 30-001-CI |
Amphotericin B (0.25 μg/ ml) | Lonza | 17-836R |
Insulin (10 μg/ml) | Sigma | I6634 |
Transferrin (5 μg/ml) | Sigma | T1147 |
Cholera toxin (0.1 μg/ml) | Sigma | C8052 |
Epidermal Growth Factor (25 ng/ml) | BD | 354001 |
Bovine Pituitary Extract (30 μg/ml) | Invitrogen | 13028-014 |
Fetal Bovine Serum (5%) | Fisher | SH3008803HI |
Retinoic acid (0.05 μM) | Sigma | R2625 |
Growth Factor Reduced Matrigel | BD | 354230 |
Table 1. Complete media components.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Pronase | Roche | 10165921001 | Used at 0.15%: -o/n at 4 °C digestion to isolate total tracheal cells (for ALI culture) -4 hr digestion 4 °C to isolate SMG |
Dispase | BD Biosciences | 354235 | Used at 16 Units: 30 min at RT |
DNase I | Sigma | DN25 | Used at 0.5 mg/ml: 20-30 min at RT |
Table 2. Enzymes used for enzymatic digestion of the trachea.