Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

Препарирование взрослых маточки мыши и аденовирус-опосредованный опорно-клетки инфекции

Published: March 28, 2012 doi: 10.3791/3734
Automatic Translation
1, 2, 3, 3
1Department of Pathology and Laboratory Medicine, Medical University of South Carolina, 2Department of Microbiology & Immunology, Medical University of South Carolina, 3National Institute on Deafness and Other Communication Disorders, National Institutes of Health

ERRATUM NOTICE

Summary

Mechanosensory волосковых клеток рецепторных клеток внутреннего уха. Наиболее характерны

Abstract

Потеря слуха и равновесия нарушения часто бывают вызваны смертью mechanosensory волосковых клеток, которые являются рецепторных клеток внутреннего уха. Поскольку не существует клеточная линия, удовлетворительно представляет клетках млекопитающих волосы, исследование волосковых клеток основывается на первичных культурах органа. Наиболее характерны в пробирке модель системы зрелые клетки млекопитающих волосы использует орган культур Мешочки из взрослых мышей (рис. 1) 1-6. Мешочке находится вестибулярный орган и волосковых клеток утрикулюса схожи по структуре и функции волосковых клеток слухового органа, органа Корти. Маточки взрослой мыши Препарат представляет собой зрелый сенсорного эпителия для изучения молекулярных сигналов, которые регулируют выживание, гомеостаз, и смерти этих клеток.

Млекопитающих кохлеарные волосковые клетки терминально дифференцированные и не восстанавливаются в случае их утраты. В не-маммалийских позвоночными, слуховой и вестибулярной гибели клеток волос сопровождается надежной регенерации, восстанавливает слуха и равновесия функций 7, 8. Регенерации волосковых клеток опосредуется глии, как поддерживающие клетки, которые контактируют с базальной поверхности волосковых клеток чувствительного эпителия 9, 10. Поддержка клетки также являются важными посредниками волос выживания и гибели клеток 11. Недавно мы разработали методику инфекции опорных клеток в культуре Мешочки использованием аденовируса. Использование аденовируса типа 5 (dE1/E3) для доставки трансгена содержащие GFP под контролем промотора CMV, мы обнаружили, что аденовирус конкретно и эффективно заражает опорных клеток. Поддержка эффективности ячейки инфекции составляет примерно 25-50%, а волосковые клетки не заражены (рис. 2). Важно отметить, что мы обнаружили, что аденовирусная инфекция опорных клеток не приводит к токсичности для волосковых клеток или поддерживающие клетки, а клеток в Ad-GFP инфected Мешочки эквивалентны тем, кто в неинфицированных Мешочки (рис. 3). Таким образом, аденовирус-опосредованной экспрессии генов в клетках поддержки культурных Мешочки предоставляет мощный инструмент для изучения роли опорных клеток в качестве посредников волос выживаемость клеток, смерть и возрождение.

Protocol

1. Вскрытие мешочке и культуры

  1. Эвтаназии взрослых (4-недельного возраста и старше) мыши, используя утвержденного протокола и обезглавить.
  2. Надрез наружный слуховой проход по обеим сторонам головы и подтягивает кожу вперед, к носу. Пополам голову задом наперед и удалять мозга с обеих сторон, чтобы выявить костный лабиринт.
  3. Обрежьте черепа от костной улитки и передает костного лабиринта (в том числе буллы) на капот культуры тканей оснащен рассечения микроскопа (примечание: аденовирус работа должна быть выполнена в класс II бокса биологической безопасности).
  4. В капот, передавать друг улитки для 35мм блюдо культуры ткани со стерильным рассечения СМИ (M199, Gibco / Invitrogen # 12350) (рис. 1а).
  5. Если слухового барабана до сих пор без изменений (можно удалить буллы в валовом рассечение, вставив ваш эскиз между буллы и вершиныулитки), используют два пинцета (одно № 3 и один # 5) нарушать буллы (рис. 1б).
  6. Определение ориентиров костной подготовки улитки: вершина, основание, косточки, овальные и круглые окна, VIII-нервного корешка, полукружных каналов (рис. 1 C, D).
  7. Поместите внутреннего уха в блюдо с медиальной стороной вверх так, что овальные и круглые окна и вершины находятся на дно тарелки и VIII-нервного корешка вверх. Держите подготовке помощью щипцов № 3 в области полукружных каналов (рис. 1D).
  8. С помощью скальпеля оснащен № 11 лезвием, срезают верхушки улитки только апикальной в нервных корешков (рис. 1D).
  9. Включите подготовку так, чтобы разрез часть вверх. Использование переднего полукружного канала в качестве ручки для стабилизации препарата (рис. 1Е).
  10. Использование # 5 щипцы, удалите улитки на Modiolus внизк основанию. В точке, где крюк области улитки поворачивает вниз, используйте тонкий зонд (половину сломанной № 55 щипцов), чтобы снять последние костные шельфа костной спиральной пластинки (рис. 1F), показывая мешочек. Просто под мешочек является стремени подножку, которая является важной вехой. Маточки непосредственно примыкает к стремени подножку (рис. 1С), и он окружен кости. С помощью зонда чип от костей достаточно, чтобы выявить около 1/3 мешочке. Осторожно снимите маточки использованием щипцов № 55 (рис. 1 полугодие). Эта процедура, как правило, приводит к удалению пигментного эпителия крыши маточки извлекается из костного подготовки. Однако, если маточки удаляется с крыши эпителия нетронутыми, крышу можно удалить с помощью щипцов № 55.
  11. Мешочки для аденовирусной инфекции (или живые эксперименты изображения) должны быть удалены в течение отоконии вскрытия (до заражения).В этом случае, используйте Луер-Лок шприц, наполненный рассечения СМИ и оснащен малого диаметра иглы (обычно 26-28 калибра). Держите мешочке на краю использованием щипцов № 55 (рис. 1I). Принесите иглы близко к мешочке с скос иглы вниз. Использование потока рассечения СМИ сдуть отолитов (рис. 1J). Кроме того, отолитов можно удалить с помощью щетки с их использованием ресниц инструмент (Ted Pella, Inc # 113). Мешочки, что не собирается проходить аденовирусной инфекции, как правило, культурный свободно плавающих в 24-луночных культуре ткани с отолитов без изменений (см. ниже после исправления отоконии удаление, которое легче).
  12. После того как все Мешочки были расчленены, изменить рассечения СМИ стерильных питательных сред: DMEM F12 (Gibco # 11320) с добавлением 5% ЭТС и 50 ед / мл пенициллина G (Sigma).
  13. Мешочки культивировали при 37 ° С и 5% CO 2. Если культур должны быть maintaINED более чем на 48 часов, половина из культуральной среды следует менять каждые два дня. Культуры могут быть сохранены в течение недели или дольше.

2. Аденовирусная инфекция опорных клеток

Важно: Работа с аденовирус требует Уровень биологической безопасности 2 (BSL2) процедур и сертификации. Проверьте с вашим сотрудником Институциональные биобезопасности для ориентации и подготовки по BSL2 процедур.

  1. Проанализируйте Мешочки, как указано выше в средствах массовой информации вскрытия (без сыворотки). Удалить отоконии как указано выше.
  2. Когда все будет готово для заражения, передачи 1 мешочке (волосковые клетки вверх) в каждую лунку Nunc мини-лоток (Fisher # 12-565-68), содержащую 15 мкл бессывороточной DMEM F12 (это важно, потому что сыворотка может инактивировать вирус) . Эта передача легче с 1,5 мм microcurette (# 10082-15 из изобразительных средств наук).
  3. Наши Ad-GFP является серотипа 5 вирусных E1 и E3 генов удалены и человеческого промотора CMV вождения transgен (GFP). Этот вирус был получен из векторного BioLabs (Филадельфия, штат Пенсильвания vectorbiolabs.com ). Со вирусов предоставляются на титры 1,0-4,0 × 10 10 БОЕ / мл. Добавить 0.5-2 мкл акции вируса в каждую лунку содержащие мешочке (рис. 1 л). Фактическая сумма использована варьируется в зависимости от титра вируса и акции. Мы обычно заражает каждый мешочке с 1,0-4,0 × 10 7 ОРП.
  4. Культура Мешочки в вирус-содержащих средств массовой информации при 37 ° C / 5% CO 2 в течение 2 часов. Через 2 часа, передает Мешочки к 24-и культуре тканей пластину, содержащую питательные среды с сывороткой. Культура Мешочки ночи при 37 ° C / 5% CO 2.
  5. Мешочки можно использовать на следующий день для экспериментов живых изображений, или они могут быть установлены для волос иммунохимии клетки (см. ниже). Вирусный экспрессии трансгена, со временем увеличивается, так что если экспрессии трансгена является низкий в 24 часов после заражения он можетполезно для культуры клеток еще на 24 часа в сыворотке средах. Если вы видите, токсичность волосковых клеток, снижают количество вируса использовали.

3. Фиксация мешочке, отолитов удаление и иммунохимии

  1. В конце периода культивирования, исправить Мешочки в 4% параформальдегид как для 3-х часов при комнатной температуре (на качающейся платформе) или на ночь при 4 ° C. Мешочки Wash (в 3 раза, 15 мин каждая) в 0,1 М (1X) фосфат Соренсена буфера рН 7,4. Эти шаги выполняются в 24-луночного планшета для культуры ткани.
  2. Отоконии удаление Примечание: отоконии должны быть удалены до аденовирусная инфекция (см. шаг 1,11 выше). Тем не менее, Мешочки, которые не заражены может быть культурным и фиксируется с отолитов еще целы. В этом случае, выполните действия, описанные здесь, чтобы удалить отоконии после фиксации. Проверьте Мешочки для любого оставшегося пигментного эпителия крыши. Осторожно удалите оставшиеся эпителия крыши с помощью двух # 55 фorceps. Чтобы удалить отоконии заменить фосфатный буфер Соренсена с 750-1000 мкл Cal-Ex decalcifier (Fisher # CS510-1D). Оставьте Cal-Ex на Мешочки в течение 1 минуты и 40 секунд (не более 2 минут). Замените Cal-Ex с 0,1 М фосфатный буфер Соренсена и мытья (в 5 раз, 5 минут каждый).
  3. Инкубируйте Мешочки в боргидрид натрия (Sigma # 452882, 1% в деионизированной воде) в течение 10 минут. Вымойте Мешочки в 0,1 М фосфатный буфер Соренсена (в 5 раз, 5 мин каждая).
  4. Место Мешочки в блокирующем растворе (PBS + 2% бычьего сывороточного альбумина + 0,8% нормальной козьей сывороткой + 0,4% Тритон Х-100) в течение 3 часов при комнатной температуре на качающейся платформе.
  5. Добавить первичных антител и инкубировать в течение ночи при 4 ° C. Anti-миозина 7а (или Proteus Biosciences # 25-6790 и # MYO7A 138-1 от развития исследований Hybridoma банка) в 1:100 в блокировании решения этикетки всех волосковых клеток. Для отдельно маркировать striolar и не striolar волосковых клеток, мы использовали двойные этикетки protocoл с моноклональными анти-кальмодулин (Sigma # C 3545, 1:150) и поликлональных анти-кальбиндин (Chemicon # AB1778, Темекула, Калифорния, США, 1:200). Вторичные антитела (обычно Alexa Fluor сопряженных с вторичными антителами Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США) разводят 1:500 в блокирующем растворе и выдерживают 4 часа в темном месте при комнатной температуре на качающейся платформе.
  6. Горе Мешочки на стеклах использование Fluoromount-G (Южный Biotech, Бирмингем, Алабама, США).

4. Представитель Результаты

Мешочки культивировали, используя этот метод сохраняет полный дополнения и волосковые клетки и опорные клетки (рис. 2). Волосы здоровые клетки в культурах показывают, круглых профилей ядерных окружены тонкой цитоплазматической регионов, миозина 7а-положительным (рис. 2, вверху). Поддержка клеток (меченные анти-Sox2) меньше по размеру и более плотно, чем волосковые клетки (рис. 2, внизу). Адеnovirus заражает 25-50% опорных клеток в мешочке, а не волосы зараженных клеток (рис. 2, Ad-GFP панелей). Следует отметить, что оптимальный рабочий титр каждой аденовирус должен быть определен эмпирически, так как смерть волосковых клеток можно, если вирусный титр слишком высока. Кроме того, регионы механических повреждений (вызванных во время вскрытия) будет занимать большое количество вируса. Эти регионы механических повреждений легко различимы по непрерывной линии клеток с очень высоким уровнем GFP выражения и пропавших без вести волосковых клеток. Это в отличие от рассеянного выражения GFP в опорных клеток неповрежденной культуры (рис. 2).

Рисунок 1
Рисунок 1. Вскрытие мешочке. . Слухового барабана (AB) B:. Булла разрывается с помощью двух крепких щипцы C: Бони улитки (RW = круглое окно, S =. стремянный артерии, C = улитки, ST = стремени) Д: лезвие скальпеля (SB) используется, чтобы отрезать верхушки улитки апикальной к VIII в черепно-мозговых нервов (8-е N) = ASC передних полукружных каналов E..: Препарат прочно удерживается помощью щипцов № 3 с одной вилкой вставляется в переднюю полукружных каналов (ASC), а другой на внешний костей (стрелки). Перепончатый лабиринт удаляется с помощью пинцета F:. С перепончатый лабиринт удален, базальный оборот костной спиральной пластинки видна рядом с крюком региона. Штраф зонд вводится под этим костной полки снять полку и удалить его (стрелка) G:. После удаления мешочек, маточки (U) видно, непосредственно примыкающих к стремени подножку (SF) H:. Мешочке (U ) удаляется с помощью пинцета # 55 (стрелка) SF = стремени подножку я.. мешочке с отолитов (O) частично удаленыг сенсорного эпителия (SE) видимые под J:. отолитов (O) удаляются из мешочке с помощью потока средств массовой информации выступил шприц оснащен 26-иглы. Тень стрелка (S) видна в нижней части изображения K. Мешочке с отолитов удалены и сенсорного эпителия (SE) видимый L:. Аденовирусной инфекции: каждый мешочке (U) помещается в отдельный колодец мини лоток. Поддержка клеток, инфицированных аденовирусом с помощью пипетки вируса в колодец (P = Внесите совет).

Рисунок 2
Рисунок 2. Аденовирус-опосредованной инфекции опорных клеток. Мешочки были инфицированы аденовирусом вождения выражение зеленого флуоресцентного белка (Ad-GFP). Показаны конфокальных изображений слоя волоса клетки и поддерживают клеточный слой в том же районе одного мешочке. Волосы клетки помечены антитела против 7а миозина(Пурпурный). Поддержка клетки помечены антитела против Sox2 (красный). Схема показывает структуру маточки сенсорного эпителия и расположение волосковых клеток (HC) и опорных клеток (СК). Расположение конфокальной (оптический) разделы отображаются в верхнем (U) и нижнего (L) панели обозначены пунктирными линиями на схеме. Верхняя панель: В конфокальной снимков, сделанных на уровне ядра клетки волос, Ad-GFP сигнал появляется в промежутках между волосковых клеток и не совпадать с маркером волосы 7а миозина клетки. Нижняя панель: В конфокальной разделов на уровне поддержки клеточных ядер, Ad-GFP сигнал локализуется с опорной клетки маркером Sox-2. Ad-GFP инфекция приводит к GFP выражение в поддержке только клетки, а не волосковые клетки инфицированы.

Рисунок 3
Рисунок 3. Аденовирусная инфекция не приводит к гибели волосковых клеток и опорных клеток. Utricles были заражены Ad-GFP в 4 × 10 8 БОЕ / мл. Мешочки были помечены антитела против миозина 7а (маркер волосковых клеток) и Sox2 (поддерживающие клетки маркер). Клетки волос и поддержка количество клеток было одинаковым для контроля Мешочки и Ad-инфицированных Мешочки GFP.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Сенсорные волосковые клетки чувствительны к смерти от различных стрессов, включая старение, шум травмы, и воздействие ототоксичных наркотиков, в том числе аминогликозидов и противоопухолевое средство цисплатин. У млекопитающих волосы гибель клеток приводит к постоянной потере слуха и / или нарушение равновесия. В системах пробирке модели важными инструментами для исследований, направленных на определение клеточных и молекулярных механизмов, лежащих в основе смерти волосковых клеток, а также те, которые направлены на предотвращение или изменение смерти волосковых клеток . В отличие от кохлеарные волосковые клетки от взрослых млекопитающих, волосковых клеток утрикулюса выжить и в культуре. Клетки маточки волос чувствительны к смерти в результате воздействия тех же лекарственных препаратов, которые являются токсичными для кохлеарные волосковые клетки и клеточные механизмы, лежащие в основе ототоксичных гибели клеток волос и выживание одинаковы для обоих утрикулярной и кохлеарные волосковые клетки 12-18. Более того, когда данные, полученные в мешочке система модели тэСтед в естественных условиях, маточки подготовка оказалась надежным предиктором волосы выживания и гибели клеток в зрелые улитки 12, 18-21. Подготовка мыши мешочке также позволяет изучить влияние специфических белков, используя Мешочки из трансгенных животных и нокаут.

Сигналы, которые опосредуют выживания и гибели волосковых клеток при стрессе плохо изучены. Тем не менее, новые данные свидетельствуют о том, что другие типы клеток во внутреннем ухе может играть важную роль в определении того, волосковые клетки в условиях стресса в конечном счете, жить или умереть 11, 22, 23. Маточки система модель может быть использована для изучения этих важнейших межклеточных взаимодействий в зрелом млекопитающих сенсорного эпителия. Аденовирусная инфекция относится к способу изменения экспрессии генов в поддерживающие клетки, таким образом облегчая изучение роли (а) опорных клеток в волосковые клетки выживания, смерти, фагоцитоз и регенерацию.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Нет конфликта интересов объявлены.

Acknowledgments

Эта работа была поддержана Отделом Внутренние исследования в Национальном институте глухоты и других расстройств общения. Дополнительная поддержка была оказана NIDCD 5R01 DC007613.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Medium 199 GIBCO, by Life Technologies 12350
DMEM/F12 GIBCO, by Life Technologies 11320
Fine forceps (#55) Fine Science Tools 11255-20
Fine forceps (#5) Fine Science Tools 11252-30
Forceps (#3) Fine Science Tools 11231-30
Penicillin G Sigma-Aldrich P3032
Fetal bovine serum Invitrogen 10082-139
Nunc mini-tray Fisher Scientific 12-565-68
Adenovirus-GFP Vector Biolabs 1060*
Cal-Ex decalcifier Fisher Scientific CS510-1D
sodium borohydride Sigma-Aldrich 452882
Anti-Myosin 7a (polyclonal) Proteus Biosciences 25-6790
Anti-Myosin 7a (monoclonal) Developmental Studies Hybridoma Bank MYO7A 138-1
Anti-Calmodulin Sigma-Aldrich C 3545
Anti-Calbindin Chemicon International AB1778
Fluoromount G SouthernBiotech 0100-01
Table 1. Reagents and tools used in utricle culture and adenovirus infection
* Note: Ad-GFP is normally provided by Vector Biolabs at a stock titer of 1x1010 PFU/ml. We requested a custom amplification in order to provide the stock virus at a titer of 1.2×1011 PFU/ml.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Cunningham, L. L. The adult mouse utricle as an in vitro preparation for studies of ototoxic-drug-induced sensory hair cell death. Brain Res. , (2006).
  2. Schmitt, N. C., Rubel, E. W., Nathanson, N. M. Cisplatin-induced hair cell death requires STAT1 and is attenuated by epigallocatechin gallate. J. Neurosci. 29, 3843-3851 (2009).
  3. Ou, H. C. Identification of FDA-approved drugs and bioactives that protect hair cells in the zebrafish (Danio rerio) lateral line and mouse (Mus musculus) utricle. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 10, 191-203 (2009).
  4. Chiu, L. L. Using the zebrafish lateral line to screen for ototoxicity. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 9, 178-190 (2008).
  5. Sugahara, K., Rubel, E. W., Cunningham, L. L. JNK signaling in neomycin-induced vestibular hair cell death. Hear Res. , 221-221 (2006).
  6. Matsui, J. I., Cotanche, D. A. Sensory hair cell death and regeneration: two halves of the same equation. Curr. Opin. Otolaryngol. Head Neck Surg. 12, 418-4125 (2004).
  7. Ryals, B. M., Rubel, E. W. Hair cell regeneration after acoustic trauma in adult Coturnix quail. Science. 240, 1774-176 (1988).
  8. Corwin, J. T., Cotanche, D. A. Regeneration of sensory hair cells after acoustic trauma. Science. 240, 1772-174 (1988).
  9. Shang, J. Supporting cell division is not required for regeneration of auditory hair cells after ototoxic injury in vitro. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 11, 203-222 (2010).
  10. Stone, J. S., Cotanche, D. A. Hair cell regeneration in the avian auditory epithelium. Int. J. Dev. Biol. 51, 6-7 (2007).
  11. Lahne, M., Gale, J. E. Damage-induced activation of ERK1/2 in cochlear supporting cells is a hair cell death-promoting signal that depends on extracellular ATP and calcium. J. Neurosci. 28, 4918-4928 (2008).
  12. Cunningham, L. L., Cheng, A. G., Rubel, E. W. Caspase Activation in Hair Cells of the Mouse Utricle Exposed to Neomycin. Journal of Neuroscience. 22, 8532-8540 (2002).
  13. Matsui, J. I. Caspase inhibitors promote vestibular hair cell survival and function after aminoglycoside treatment in vivo. J. Neurosci. 23, 6111-6122 (2003).
  14. Matsui, J. I., Ogilvie, J. M., Warchol, M. E. Inhibition of caspases prevents ototoxic and ongoing hair cell death. J. Neurosci. 22, 1218-1227 (2002).
  15. Nakagawa, T. A novel technique for inducing local inner ear damage. Hear Res. 176, 1-2 (2003).
  16. Forge, A., Li, L. Apoptotic death of hair cells in mammalian vestibular sensory epithelia. Hear Res. 139, 1-2 (2000).
  17. Liu, W. Caspase inhibitors prevent cisplatin-induced apoptosis of auditory sensory cells. Neuroreport. 9, 2609-2614 (1998).
  18. Taleb, M. Hsp70 inhibits aminoglycoside-induced hearing loss and cochlear hair cell death. Cell Stress Chaperones. 14, 427-437 (2009).
  19. Taleb, M. Hsp70 inhibits aminoglycoside-induced hair cell death and is necessary for the protective effect of heat shock. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 9, 277-289 (2008).
  20. Francis, S. P. Celastrol Inhibits Aminoglycoside-Induced Ototoxicity via Heat Shock Protein 32 (HSP32). Cell Death and Disease. , (2011).
  21. Wang, J. Caspase inhibitors, but not c-Jun NH2-terminal kinase inhibitor treatment, prevent cisplatin-induced hearing loss. Cancer Res. 64, 9217-9224 (2004).
  22. Bird, J. E. Supporting cells eliminate dying sensory hair cells to maintain epithelial integrity in the avian inner ear. J. Neurosci. 30, 12545-12556 (2010).
  23. Sato, E. Expression of fractalkine receptor CX3CR1 on cochlear macrophages influences survival of hair cells following ototoxic injury. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 11, 223-234 (2010).

Tags

Neuroscience выпуск 61 волосковые клетки ототоксичность потеря слуха органов культуры

Erratum

Formal Correction: Erratum: Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection
Posted by JoVE Editors on 04/17/2012. Citeable Link.

A correction was made to Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection. The incorrect version of figure 2 was published, the middle initials of the authors were omitted, and the acknowledgements were updated.

Figure 2. Adenovirus-mediated infection of supporting cells was corrected to include a schematic showing the structure of the utricle sensory epithelium. The incorrect figure was inadvertently published. This error does not change the scientific conclusions of the article in any way. The editors apologize for this error.

The acknowledgements were updated to:

The authors are grateful to Dr. Shimon P. Francis for generating the confocal micrographs.

This work was supported by the Division of Intramural Research at the National Institute on Deafness and Other Communication Disorders. Additional support was provided by NIDCD 5R01 DC007613.

From:

This work was supported by the Division of Intramural Research at the National Institute on Deafness and Other Communication Disorders. Additional support was provided by NIDCD 5R01 DC007613.

The authors were updated to:

Carlene S. Brandon, Christina Voelkel-Johnson, Lindsey A. May, Lisa L. Cunningham

From:

Carlene Brandon, Christina Voelkel-Johnson, Lindsey May, Lisa Cunningham

Препарирование взрослых маточки мыши и аденовирус-опосредованный опорно-клетки инфекции
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Brandon, C. S., Voelkel-Johnson, C., … More

Brandon, C. S., Voelkel-Johnson, C., May, L. A., Cunningham, L. L. Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection. J. Vis. Exp. (61), e3734, doi:10.3791/3734 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter