Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Disseksjon av Adult Mouse Utricle og Adenovirus-mediert støttende-celle Infeksjon

doi: 10.3791/3734 Published: March 28, 2012

ERRATUM NOTICE

Summary

Mechanosensory hårcellene er receptor cellene i det indre øret. Den beste-preget

Abstract

Hørselstap og balanse forstyrrelser er ofte forårsaket av død mechanosensory hårcellene, som er receptor cellene i det indre øret. Siden det er ingen celle linje som tilfredsstillende representerer mammalske hårceller, avhengig forskning på hårcellene på primære organet kulturer. Det mest preget in vitro modell system av modne mammalske hårceller benytter orgel kulturer utricles fra voksne mus (figur 1) 1-6. Den utricle er en vestibulære organ, og hårcellene i utricle er lik i både struktur og funksjon til hårcellene i det auditive organ, organ Corti. Den voksne mus utricle forberedelse representerer en moden sensorisk epitel for studier av de molekylære signaler som regulerer overlevelse, homeostase, og død av disse cellene.

Mammalske cochlea hårcellene terminalt differensiert og er ikke regenerert når de går tapt. I ikke-mammaliske virveldyr, auditive eller vestibulære hår celledød etterfølges av robust regenerering som gjenoppretter hørsel og balanse funksjoner 7, 8. Håret celle gjenfødelse er mediert av gliaceller-lignende støtte celler, som kontakt med basolateral overflater av hårceller i sensorisk epitel 9, 10. Støtter celler er også viktige mediatorer av hår celle overlevelse og død 11. Vi har nylig utviklet en teknikk for infeksjon av støtte celler i dyrkede utricles med adenovirus. Bruke adenovirus type 5 (dE1/E3) å levere en transgenet inneholder GFP under kontroll av CMV arrangøren, finner vi at adenovirus spesielt og effektivt infiserer støtte celler. Støtte celle infeksjon effektivitet er ca 25-50%, og hårcellene blir ikke smittet (figur 2). Viktigere, finner vi at adenoviral infeksjon av støtte celler ikke medføre giftighet for hårcellene eller hjelpeverge celler, som blodceller i Ad-GFP infected utricles tilsvarer de i ikke-infiserte utricles (figur 3). Dermed adenovirus-mediert genuttrykk i støtte celler av dyrkede utricles gir et kraftig verktøy for å studere rollene til støtte celler som mediatorer av hår celle overlevelse, død og gjenfødelse.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Utricle Dissection og kultur

  1. Avlive en voksen (4 uker eller eldre) mus ved hjelp av en godkjent protokoll og halshugge.
  2. Klipp den eksterne øregangen på begge sider av hodet og dra huden frem mot nesen. Halvere hodet fra rygg til front og fjerne hjernen fra begge sider for å avsløre benete labyrinten.
  3. Trim skallen unna benete sneglehuset og overføre benete labyrinten (inkludert Bulla) til en vev kultur hette utstyrt med en dissekere mikroskop (Merk: Adenovirus arbeid skal utføres i en klasse II biologisk sikkerhet kabinett).
  4. I panseret, overføre hver cochlea et 35mm vevskultur fatet inneholder sterilt dissekere media (M199, Gibco / Invitrogen # 12350) (figur 1A).
  5. Hvis det auditive Bulla er fortsatt intakt (det er mulig å fjerne Bulla under brutto disseksjonen ved å sette din miniatyrbilde mellom Bulla og toppen avcochlea), bruker to tang (en # 3 og en # 5) til å bryte Bulla (Figur 1B).
  6. Identifiser landemerkene i den benete sneglehuset forberedelse: Apex, base, ossicles, ovale og runde vinduer, VIIIth nerve rot, halvsirkelformet kanaler (Figur 1 C, D).
  7. Plasser det indre øret i fatet med den mediale siden opp, slik at den ovale og runde vinduer og apex er på bunnen av fatet og VIIIth nerve rot vender opp. Hold forberedelse på en # 3 tang i regionen av den halvsirkelformede kanaler (Figur 1D).
  8. Ved hjelp av en skalpell utstyrt med en 11 blad, avskåret spissen av sneglehuset bare apikal til nerve root (figur 1D).
  9. Snu forberedelse slik at kuttet delen vender opp. Bruk fremre halvrunde kanalen som et håndtak for å stabilisere preparatet (figur 1E).
  10. Bruk nr. 5 tang, fjerne sneglehuset på modiolus nedtil basen. På det punktet hvor kroken regionen i cochlea snur nedover, bruker du en fin probe (halvparten av et ødelagt # 55 tang) for å løfte den siste benete hylle i osseous spiral lamina (figur 1F), avslører saccule. Bare under saccule er stigbøylen fotplaten, som er en viktig landemerke. Den utricle er rett mot stigbøylen fotplaten (figur 1G), og det er omgitt av bein. Bruk sonden å chip beinet bort nok til å avsløre om lag 1/3 av utricle. Fjern forsiktig utricle hjelp nr. 55 tang (figur 1H). Denne prosedyren vil vanligvis resultere i fjerning av det pigmenterte taket epitelet som utricle trekkes fra benete forberedelse. Men hvis utricle fjernes med taket epitel intakt, kan taket fjernes med 55 tang.
  11. Utricles for adenovirus-infeksjon (eller levende bilde-forsøk) må ha otoconia fjernet under disseksjonen (før infeksjon).I dette tilfellet bruker en luer-lock sprøyte som er fylt med dissekere media og utstyrt med en liten kanyle (vanligvis 26-28 gauge). Hold utricle på kanten ved hjelp av 55 tang (figur 1i). Ta nålespissen nær utricle med skråkant av nålen pekende nedover. Bruk en strøm av dissekere media å blåse av otoconia (figur 1J). Alternativt kan otoconia fjernes ved å børste dem vekk med en øyenvippe verktøy (Ted Pella, Inc. # 113). Utricles som ikke kommer til å gjennomgå adenoviral infeksjon er normalt kultivert frittflytende i 24-vel vevskulturstudier plater med otoconia intakt (se nedenfor for post-fix otoconia fjerning, noe som er enklere).
  12. Når alle utricles er dissekert, endre dissekere media til sterilt kultur media: DMEM F12 (Gibco # 11320) supplert med 5% FBS og 50 U / ml penicillin G (Sigma).
  13. Utricles dyrkes ved 37 ° C og 5% CO 2. Dersom kulturer skal være maintastudere aggressiv for mer enn 48 timer, bør halvparten av dyrkingsmedier byttes annenhver dag. Kulturer kan opprettholdes for en uke eller lenger.

2. Adenovirus Infeksjon å støtte Cells

Viktig: Arbeide med adenovirus krever biosikkerhetsnivå 2 (BSL2) prosedyrer og sertifisering. Sjekk med din Institutional biosikkerhet Officer for veiledning og opplæring på BSL2 prosedyrer.

  1. Dissekere utricles som ovenfor i disseksjon media (ingen serum). Fjern otoconia som ovenfor.
  2. Når du er klar til å infisere, overføre en utricle (hårcellene opp) i hver brønn av et Nunc mini-brett (Fisher # 12-565-68) inneholder 15 mL serum-free DMEM F12 (dette er viktig fordi serum kan inaktivere virus) . Denne overføringen er enklere med en 1,5 mm microcurette (# 10082-15 fra fine Science Tools).
  3. Vår Ad-GFP er serotype 5 med viral E1 og E3 gener slettet og menneskelige CMV promoter driver transgENE (GFP). Dette viruset ble innhentet fra Vector BioLabs (Philadelphia, PA vectorbiolabs.com ). Stock virus tilbys på titere av 1,0 til 4,0 × 10 10 PFU / ml. Legg 0,5 til 2 mL av lager virus til hver brønn inneholder en utricle (Figur 1L). Det faktiske beløpet som brukes varierer avhengig av virus og lager titer. Vi pleier å infisere hvert utricle med 1,0 til 4,0 × 10 7 PFU.
  4. Kultur de utricles i virus-inneholder media ved 37 ° C / 5% CO 2 i 2 timer. Etter 2 timer, overføre utricles tilbake til 24-brønnen vevskultur plate inneholder dyrkingsmedier med serum. Kultur de utricles natten ved 37 ° C / 5% CO 2.
  5. Utricles kan brukes neste dag for live bildebehandling eksperimenter, eller de kan festes til håret celle Immunokjemiske (se nedenfor). Viral transgenet uttrykk øker over tid, så hvis transgene uttrykk er lav ved 24 timer etter infeksjon det kangunstig for kultur celler ytterligere 24 timer i serum som inneholder media. Hvis du ser håret celle toksisitet, redusere mengden av virus brukt.

3. Utricle Fiksering, Otoconia fjerning, og Immunokjemiske

  1. På slutten av kultur perioden, fikse utricles i 4% paraformaldehyde for enten 3 timer ved romtemp (på en gyngende plattform) eller over natten ved 4 ° C. Vask utricles (3 ganger, 15 min hver) i 0,1 M (1X) Sørensens fosfatbuffer pH 7,4. Disse trinnene er utført i en 24-brønns vevskultur plate.
  2. Otoconia fjerning: Merk: Otoconia må fjernes før adenovirus-infeksjon (se trinn 1.11 ovenfor). Imidlertid kan utricles som ikke skal bli smittet dyrkes og festes med otoconia fortsatt intakt. I dette tilfellet bruker fremgangsmåten som er beskrevet her for å fjerne otoconia etter fiksering. Inspiser utricles for eventuelle gjenværende pigmentert tak epitel. Fjern forsiktig eventuelle gjenværende tak epitel med to # 55 forceps. For å fjerne otoconia, erstatte Sørensens fosfatbuffer med 750-1000 mL Cal-Ex decalcifier (Fisher # CS510-1D). La Cal-Ex på utricles for 1 minutt og 40 sekunder (ikke overstige 2 minutter). Bytt Cal-Ex med 0,1 M Sørensens fosfatbuffer og vask (5 ganger, 5 min hver).
  3. Inkuber utricles i natriumborhydrid (Sigma # 452882, 1% i avionisert vann) i 10 minutter. Vask utricles i 0,1 M Sørensens fosfat buffer (5 ganger, 5 min hver).
  4. Plasser utricles i blokkering Solution (PBS + 2% bovint serum albumin + 0,8% normal geit serum + 0,4% Triton X-100) i 3 timer ved romtemperatur på en rocking plattform.
  5. Legg primære antistoffer og inkuber natten ved 4 ° C. Anti-Myosin 7a (enten Proteus biovitenskap # 25-6790 eller # MYO7A 138-1 fra utviklingsstudier hybridoma Bank) på 1:100 i blokkering løsning etiketter alle hårcellene. For separat merke striolar og ikke-striolar hårceller, har vi brukt en dobbel-etikett protocol med monoklonalt anti-calmodulin (Sigma # C 3545, 1:150) og polyklonale anti-calbindin (Chemicon # AB1778, Temecula, CA, USA, 1:200). Sekundære antistoffer (vanligvis Alexa Fluor konjugerte sekundære antistoffer fra Invitrogen, Carlsbad, California, USA) er fortynnet 1:500 i blokkering løsning og inkuberes i 4 timer i mørke ved romtemperatur på en rocking plattform.
  6. Mount utricles på glassplater med Fluoromount-G (Southern Biotech, Birmingham, AL, USA).

4. Representative Resultater

Utricles dyrket ved hjelp av denne metoden beholde fullt utfyller av både hår celler og støtte celler (figur 2). Hårcellene i friske kulturer viser runde kjernefysiske profiler omgitt av tynne cytoplasmatiske regioner som er myosin 7a-positive (figur 2, topp-panelet). Støtter celler (merket med anti-Sox2) er mindre og mer tettpakket enn hårcellene (figur 2, nedre panel). Adenovirus smitter 25-50% av de som støtter cellene i utricle, og ingen hårcellene infisert (figur 2, Ad-GFP paneler). Det bør bemerkes at den optimale arbeider titer av hvert adenovirus må bestemmes empirisk, siden håret celledød er mulig hvis viral titer er for høy. I tillegg vil deler av mekanisk skade (forårsaket under disseksjon) tar opp store mengder virus. Disse regionene i mekanisk skade er lett gjenkjennelig ved en sammenhengende linje av celler med svært høye nivåer av GFP uttrykk og manglende hårceller. Dette er i kontrast til den spredte GFP uttrykk i støtte celler i en uskadet kultur (figur 2).

Figur 1
Figur 1. Utricle Dissection. A:. Auditory Bulla (AB) B:. Den Bulla er brutt med to solide tang C: Bony cochlea (RW = runde vinduet, S =. stapedial arterie, C = cochlea, ST = stigbøylen) D: En skalpell blad (SB) brukes til å kutte toppen av sneglehuset apikal til VIIIth hjernenerven (8 th N) ASC = anterior halvsirkelformet kanalen E..: Preparatet holdes fast ved hjelp av en # 3 pinsett med en gaffel inn i fremre halvrunde kanalen (ASC) og den andre på den ytterste bein (piler). Membran labyrinten fjernes med pinsett F:. Med membranous labyrinten fjernet, er basal begynnelsen av osseous spiral lamina synlig nær kroken regionen. En fin sonde settes inn under denne benete hylle å løfte hyllen opp og fjern den (pil) G:. Etter fjerning av saccule, er utricle (U) synlig rett mot stigbøylen fotplaten (SF) H:. Utricle (U ) fjernes med en # 55 tang (pil) SF = stigbøylen fotplate jeg:.. Utricle med otoconia (O) delvis fjernet end sensoriske epitel (SE) synlige under J:. Otoconia (O) er fjernet fra utricle ved hjelp av en strøm av medier som leveres med en sprøyte utstyrt med en 26-gauge kanyle. I skyggen av nålen (S) er synlig nederst på bildet K:. Utricle med otoconia fjernet og sensorisk epitel (SE) synlig L:. Adenoviral infeksjon: hver utricle (U) er plassert i en enkelt brønn av en mini -skuffen. Støtter celler er infisert med adenovirus ved pipettering virus i brønnen (P = Pipet tips).

Figur 2
Figur 2. Adenovirus-mediert infeksjon av støtte celler. Utricles ble smittet med adenovirus kjøring uttrykk av grønt fluoriserende protein (Ad-GFP). Vist er confocal bilder av håret celle laget og støtte celle laget i det samme området av en utricle. Hårcellene er merket med et antistoff mot Myosin 7a(Magenta). Støtter celler er merket med et antistoff mot Sox2 (rød). Skjematisk viser strukturen i utricle sensorisk epitel og plasseringen av de hårcellene (HC) og støtte celler (SC). Plassering av confocal (optisk) seksjoner vises i øvre (U) og lavere (L) paneler er angitt med stiplede linjer i skjematisk. Øvre paneler: I confocal bilder tatt på nivået av håret cellekjerner, synes Ad-GFP signal i mellomrommene mellom hårceller og ikke overlapper med håret celle markøren Myosin 7a. Nedre paneler: I confocal seksjoner på nivå med den bærende cellekjerner, colocalizes Ad-GFP signal med støtte celle markør Sox-2. Ad-GFP infeksjon resulterer i GFP uttrykk i støtte celler bare, og ingen hårcellene er smittet.

Figur 3
Figur 3. Adenoviral infeksjon vil ikke resultere i død av hårceller eller hjelpeverge celler. Utricles var smittet med Ad-GFP på 4 × 10 8 PFU / ml. Utricles ble merket med antistoffer mot Myosin 7a (hårcelle markør) og Sox2 (støtter celle markør). Hår celle og støtte celletall var like for kontroll utricles og Ad-GFP smittet utricles.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Sensoriske hårcellene er utsatt for dødsfall forårsaket av en rekke påkjenninger, inklusive aldring, støy traumer, og eksponering for Ototoksisk narkotika, inkludert aminoglykosidantibiotika og cytostatikum cisplatin. Hos pattedyr hår celledød resulterer i permanent hørselstap og / eller balanse forstyrrelse. In vitro modellsystemer er kritiske verktøy for studier med sikte på fastsettelse av cellulære og molekylære mekanismer bak håret celledød, samt de som tar sikte på å forebygge eller reversere hår celledød . I motsetning cochlea hårcellene fra voksne pattedyr, hårcellene i utricle overleve godt i kulturen. Utricle hårcellene er følsomme for døden fra eksponering til de samme terapeutiske stoffer som er giftige for cochlea hårceller og de ​​cellulære mekanismene bak Ototoksisk hår celledød og overlevelse er lik for både utricular og cochlea hårcellene 12-18. Dessuten, når data innhentet i utricle modellen systemet er teSted in vivo, har utricle forberedelse vist seg å være en pålitelig prediktor for hår celle overlevelse og død i den modne 12 cochlea, 18-21. Musen utricle forberedelse kan vi også undersøke effekten av spesifikke proteiner ved å utnytte utricles fra transgene og knockout dyr.

Signalene som formidler overlevelse og død av sensoriske hårceller under stress er dårlig forstått. Imidlertid tyder nye bevis for at andre celletyper i det indre øret kan spille viktige roller i å avgjøre om hårcellene under stress slutt leve eller dø 11, 22, 23. Det utricle Modellen kan brukes til å undersøke disse kritiske celle-celle interaksjoner i en moden pattedyr sensorisk epitel. Adenoviral infeksjon gir en metode for å endre genuttrykk i støtte celler, og dermed tilrettelegge for studier av rollen (e) for å støtte celler i håret celle overlevelse, død, fagocytose, og gjenfødelse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklært.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble støttet av Divisjon for egenutført forskning ved National Institute on døvhet og andre kommunikasjonstjenester Disorders. Ytterligere støtte ble gitt av NIDCD 5R01 DC007613.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Medium 199 GIBCO, by Life Technologies 12350
DMEM/F12 GIBCO, by Life Technologies 11320
Fine forceps (#55) Fine Science Tools 11255-20
Fine forceps (#5) Fine Science Tools 11252-30
Forceps (#3) Fine Science Tools 11231-30
Penicillin G Sigma-Aldrich P3032
Fetal bovine serum Invitrogen 10082-139
Nunc mini-tray Fisher Scientific 12-565-68
Adenovirus-GFP Vector Biolabs 1060*
Cal-Ex decalcifier Fisher Scientific CS510-1D
sodium borohydride Sigma-Aldrich 452882
Anti-Myosin 7a (polyclonal) Proteus Biosciences 25-6790
Anti-Myosin 7a (monoclonal) Developmental Studies Hybridoma Bank MYO7A 138-1
Anti-Calmodulin Sigma-Aldrich C 3545
Anti-Calbindin Chemicon International AB1778
Fluoromount G SouthernBiotech 0100-01
Table 1. Reagents and tools used in utricle culture and adenovirus infection
* Note: Ad-GFP is normally provided by Vector Biolabs at a stock titer of 1x1010 PFU/ml. We requested a custom amplification in order to provide the stock virus at a titer of 1.2×1011 PFU/ml.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Cunningham, L. L. The adult mouse utricle as an in vitro preparation for studies of ototoxic-drug-induced sensory hair cell death. Brain Res. (2006).
  2. Schmitt, N. C., Rubel, E. W., Nathanson, N. M. Cisplatin-induced hair cell death requires STAT1 and is attenuated by epigallocatechin gallate. J. Neurosci. 29, 3843-3851 (2009).
  3. Ou, H. C. Identification of FDA-approved drugs and bioactives that protect hair cells in the zebrafish (Danio rerio) lateral line and mouse (Mus musculus) utricle. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 10, 191-203 (2009).
  4. Chiu, L. L. Using the zebrafish lateral line to screen for ototoxicity. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 9, 178-190 (2008).
  5. Sugahara, K., Rubel, E. W., Cunningham, L. L. JNK signaling in neomycin-induced vestibular hair cell death. Hear Res. 221-221 (2006).
  6. Matsui, J. I., Cotanche, D. A. Sensory hair cell death and regeneration: two halves of the same equation. Curr. Opin. Otolaryngol. Head Neck Surg. 12, 418-4125 (2004).
  7. Ryals, B. M., Rubel, E. W. Hair cell regeneration after acoustic trauma in adult Coturnix quail. Science. 240, 1774-176 (1988).
  8. Corwin, J. T., Cotanche, D. A. Regeneration of sensory hair cells after acoustic trauma. Science. 240, 1772-174 (1988).
  9. Shang, J. Supporting cell division is not required for regeneration of auditory hair cells after ototoxic injury in vitro. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 11, 203-222 (2010).
  10. Stone, J. S., Cotanche, D. A. Hair cell regeneration in the avian auditory epithelium. Int. J. Dev. Biol. 51, 6-7 (2007).
  11. Lahne, M., Gale, J. E. Damage-induced activation of ERK1/2 in cochlear supporting cells is a hair cell death-promoting signal that depends on extracellular ATP and calcium. J. Neurosci. 28, 4918-4928 (2008).
  12. Cunningham, L. L., Cheng, A. G., Rubel, E. W. Caspase Activation in Hair Cells of the Mouse Utricle Exposed to Neomycin. Journal of Neuroscience. 22, 8532-8540 (2002).
  13. Matsui, J. I. Caspase inhibitors promote vestibular hair cell survival and function after aminoglycoside treatment in vivo. J. Neurosci. 23, 6111-6122 (2003).
  14. Matsui, J. I., Ogilvie, J. M., Warchol, M. E. Inhibition of caspases prevents ototoxic and ongoing hair cell death. J. Neurosci. 22, 1218-1227 (2002).
  15. Nakagawa, T. A novel technique for inducing local inner ear damage. Hear Res. 176, 1-2 (2003).
  16. Forge, A., Li, L. Apoptotic death of hair cells in mammalian vestibular sensory epithelia. Hear Res. 139, 1-2 (2000).
  17. Liu, W. Caspase inhibitors prevent cisplatin-induced apoptosis of auditory sensory cells. Neuroreport. 9, 2609-2614 (1998).
  18. Taleb, M. Hsp70 inhibits aminoglycoside-induced hearing loss and cochlear hair cell death. Cell Stress Chaperones. 14, 427-437 (2009).
  19. Taleb, M. Hsp70 inhibits aminoglycoside-induced hair cell death and is necessary for the protective effect of heat shock. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 9, 277-289 (2008).
  20. Francis, S. P. Celastrol Inhibits Aminoglycoside-Induced Ototoxicity via Heat Shock Protein 32 (HSP32). Cell Death and Disease. (2011).
  21. Wang, J. Caspase inhibitors, but not c-Jun NH2-terminal kinase inhibitor treatment, prevent cisplatin-induced hearing loss. Cancer Res. 64, 9217-9224 (2004).
  22. Bird, J. E. Supporting cells eliminate dying sensory hair cells to maintain epithelial integrity in the avian inner ear. J. Neurosci. 30, 12545-12556 (2010).
  23. Sato, E. Expression of fractalkine receptor CX3CR1 on cochlear macrophages influences survival of hair cells following ototoxic injury. J. Assoc. Res. Otolaryngol. 11, 223-234 (2010).

Erratum

Formal Correction: Erratum: Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection
Posted by JoVE Editors on 04/17/2012. Citeable Link.

A correction was made to Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection. The incorrect version of figure 2 was published, the middle initials of the authors were omitted, and the acknowledgements were updated.

Figure 2. Adenovirus-mediated infection of supporting cells was corrected to include a schematic showing the structure of the utricle sensory epithelium. The incorrect figure was inadvertently published. This error does not change the scientific conclusions of the article in any way. The editors apologize for this error.

The acknowledgements were updated to:

The authors are grateful to Dr. Shimon P. Francis for generating the confocal micrographs.

This work was supported by the Division of Intramural Research at the National Institute on Deafness and Other Communication Disorders. Additional support was provided by NIDCD 5R01 DC007613.

From:

This work was supported by the Division of Intramural Research at the National Institute on Deafness and Other Communication Disorders. Additional support was provided by NIDCD 5R01 DC007613.

The authors were updated to:

Carlene S. Brandon, Christina Voelkel-Johnson, Lindsey A. May, Lisa L. Cunningham

From:

Carlene Brandon, Christina Voelkel-Johnson, Lindsey May, Lisa Cunningham

Disseksjon av Adult Mouse Utricle og Adenovirus-mediert støttende-celle Infeksjon
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Brandon, C. S., Voelkel-Johnson, C., May, L. A., Cunningham, L. L. Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection. J. Vis. Exp. (61), e3734, doi:10.3791/3734 (2012).More

Brandon, C. S., Voelkel-Johnson, C., May, L. A., Cunningham, L. L. Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection. J. Vis. Exp. (61), e3734, doi:10.3791/3734 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter