我々は、齧歯類の胚から海馬および皮質ニューロンを分離、培養するための迅速な方法論を記述します。このプロトコルは、私たちはほぼ純粋な神経細胞の培養が必要とされる実験を行うことができます。
我々は、E15-17ラットの胚から海馬または皮質ニューロンを分離し、培養するための簡単な方法を記述しています。手順は、マウスとヒトの一次ニューロンと神経前駆細胞の分離に正常に適用することができます。解離ニューロンは、数週間に、無血清培地に維持されます。これらの培養物は、ヌクレオ、免疫細胞化学、核酸の調製と同様に、電気生理学的に使用することができます。古いニューロンの培養物は、またリン酸カルシウムや、リポフェクトアミンなどの脂質ベースの方法で、効率は低下し、レンチウイルス形質導入により効率の良いレートでトランスフェクトすることができます。
ここで説明したラット海馬および皮質ニューロンの解剖と文化の方法は化学的に定義された媒体( 図3)で成長し、ほぼ純粋な神経細胞の培養物を用いて実験を行うことができます。無血清培地で培養し、ほぼ純粋なニューロンのプロトコルは以前に2,3,4を説明してきたが、我々の方法で行われた重要な変更があります。従来のプロトコルから別の(すなわち、バンカー?…
The authors have nothing to disclose.
我々は編集支援のためにJonnaエリスに感謝します。国立精神衛生研究所から:説明プロジェクトが受賞番号R01MH079751(F.ペルッツィPI)によってサポートされていました。内容はもっぱら著者の責任であり、必ずしも国立精神衛生研究所や国立衛生研究所の公式見解を示すものではありません。
Table I. Neurobasal/B27 complete medium.
Table II. Dissection medium.
Table III. 50x Counting solution.
Table IV. Specific reagents.
Table V. Specific equipment.