白内障是导致失明的世界。太阳紫外线辐射(UVR)是白内障发展的主要危险因素。远紫外线B诱导白内障动物模型的开发。在这篇文章中,我们描述了白内障的形成进行调查:暴露于紫外线辐射,定量RT-PCR和免疫组化的方法。
白内障是导致失明的世界1。世界卫生组织定义白内障混浊的眼睛,阻碍了光传输的镜头。白内障是一种多因素的疾病,与糖尿病,吸烟,紫外线辐射(UVR),酒精,电离辐射,类固醇和高血压有关。有强烈的实验2-4和流行病学证据5,6,紫外线辐射会导致白内障。我们开发了两种麻醉和非麻醉动物的紫外线B诱导白内障的动物模型。
唯一的治疗白内障的手术治疗,但这种治疗方法是无法访问的所有。据估计10年白内障的发病延迟可以减少白内障手术的需要的50%9。为了延缓白内障的发生率,它是需要了解白内障的形成机制和有效的预防地层几种学习策略。白内障发展的机制之一,细胞凋亡起着至关重要的作用在启动白内障在人类和动物的10。最近我们的重点是在镜头凋亡的机制白内障的发展8,11,12。据预测,更好地了解紫外线辐射的影响,对细胞凋亡通路的发现新的药物,以防止白内障的可能性。
在这篇文章中,我们将介绍如何白内障可以通过实验诱导体内暴露于UVR-B。进一步的RT-PCR和免疫组化被作为工具来研究UVR-B诱发白内障的分子机制。
本文介绍的方法,使学习在UVR-B引起的白内障发生的分子事件。
考虑,大多数信息可用于在体内的紫外线辐射性白内障是来自实验白化只SD大鼠7日,16日,17日,18日,19后,我们决定在目前的研究中使用的白化SD大鼠。年龄的影响是6周大的。的性别是女性,因为在对男性相比,女性较少有过敏尿。此外,有没有性别差异的严重程度的紫外线辐射性白内障…
The authors have nothing to disclose.
这项工作是支持的卡罗林斯卡研究所的KID资金,瑞典辐射保护局,卡罗林斯卡医学院眼科研究基金会,Konung古斯塔夫枪OCH贝蒂尔Stohnes Stiftelse,圣Erik的眼科医院研究基金会,Ögonfonden:秒OCH Drottning Viktorias Frimurarstiftelse。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Ketalar | Pfizer | 150086 | 50 mg/ml |
Rompun | Bayer | 022545 | 20 mg/ml |
Oculentum Simplex | Apoteket, Sweden | 336164 | 5 g |
Mydriacyl | Alcon | 00352 | 10 mg/ml |
Balanced salt solution | Alcon | 0007950055 | |
3.5 ul β-mercaptoethanol | |||
NucleoSpin RNA II total RNA isolation kit | Macherey-Nagel GmbH&Co, Duren, Germany | 740955.50 | |
p53 DNA specific primers | biomers.net GmbH | Custom made | |
Taq DNA polymerase, dNTPack | Roche | 04 728 866 001 | |
Agarose | Sigma | A5093 | |
Ethidium bromide solution 0.5 mg/ml | Sigma | E1385 | |
Nano-Drop ND-1000 spectrophotometer | NanoDrop Products | ||
1st Strand cDNA synthesis kit for RT-PCR (AMV) | Roche Diagnostics GmbH | 11 483 188 001 | |
iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR detection system | Bio-Rad Laboratories | ||
96-well plate | Sarstedt | 72.1979.202 | |
TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
TaqMan Gene Expression Assay for caspase 3 | Applied Biosystems | Rn00563902_m1 | |
TaqMan Gene Expression Assay for 18s | Applied Biosystems | Hs99999901_s1 | |
MyiQ software | Bio-Rad Laboratories | ||
Cleaved caspase-3 (Asp175) | Cell signaling technology | 9661 | |
Anti rabbit IgG | Abcam | Ab6798 | |
Sucrose | Sigma Aldrich | 84097 | |
Vectashield | Vector Laboratories | ||
Universal Microscope Axioplan 2 Imaging | Carl Zeiss | ||
Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | 441244 | |
TBE buffer 10x | Promega | V4251 |