我们描述了一个<em>体外感染</em>直接从细菌病原体与人类输卵管细胞相互作用的可视化模型。整个器官组织模式成立调查<em> C。沙眼</em>引起的病理条件下的“生命”的女性输卵管。
沙眼衣原体生殖道感染( 沙眼衣原体 )是最常见的性传播疾病在世界各地的妇女。低效的间隙或病原体的持久性,可能会导致升上生殖道感染,应该引起1,2感染组织的慢性炎症损害。因此,像盆腔炎(PID)的,输卵管阻塞,不孕不育的临床后遗症严重,可能会出现3,4。
与 C的研究沙眼已在上皮细胞株(如HEp-2细胞和HeLa-229)或小鼠进行。然而,由于与细胞培养模型,他们既不反映本地组织的生理,也不是C 的病理生理在体内 5 衣原体生殖道感染。进一步限制的事实,中央信号级联(如干扰素γmediat的编辑JAK / STAT信号通路),控制细胞内衣原体的增长从根本上老鼠和人类6,7之间的差异。我们和其他人,因此建立一个整体的器官输卵管模型,探讨之间C.直接的相互作用衣原体和人类输卵管细胞体外 8,9。
为了这个目的,人类从接受子宫切除术的妇女输卵管收集和感染与 C 衣原体血清型D.感染后24小时之内,样品分析使用扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)检测沙眼衣原体介导的上皮损伤,以及C.衣原体在输卵管组织列入的形成。
危害病原体引起的感染组织的可视化是艰巨的,往往是有限的,在小鼠实验程序。我们建立在人输卵管体外感染模型来分析C。上的女性生殖道衣原体感染。通过使用这种方法,我们能够可视化C。沙眼 -人输卵管上皮细胞损伤,感染后一天之内。细胞肿胀和溶解是典型的形态学变化, 在 C 沙眼 -输卵管感染,但在非感染控制。 TEM分析表明,衣原体在受感染的组织实施的一个典型的细胞内发育周期,显示重新分化的基本机构,而且还扩大网纹可能表明持久的机构小包裹大包裹。然而,单独的形态图片没有足以区分REPL的icating和持续感染,减少代谢特点和增加耐抗菌素10。
在受感染的输卵管上皮细胞的破坏,要么是由于C 的中断沙眼 -完成后的细胞发育周期和传染病的基本机构释放或释放促炎细胞因子8感染的上皮细胞。病原体引起的组织损伤和对C.主机诱导的免疫反应衣原体被认为是导致上皮细胞的功能,重塑成纤维细胞在体内 8,11终于输卵管不孕的损失的主要因素。
这种模式的主要限制之一是炎性细胞的情况下,这阻碍了初始C.辅助疗效分析衣原体感染输卵管上皮细胞。然而,该模型是APpropriate探讨不同环境条件(如氧含量)和最初的宿主免疫反应在急性三衣原体感染8,9。进一步的计划是建立一个测试模型对三抗菌素沙眼在整个人类的输卵管,在输卵管上皮细胞双光子激光扫描显微镜观察不同发育阶段的特征的代谢状态。
The authors have nothing to disclose.
这项工作是由东风集团群集卓越“炎症接口”(RA,如果RA – D)支持。我们为克里斯汀Wischnat优秀的技术援助表示感谢。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
DMEM | PAA | E15-843 | |
RPMI | PAA | R15-802 | |
FCS | PAA | A15-101 | |
Cycloheximide | Sigma – Aldrich | ||
SPG Buffer | various | see recipe below | |
Monti’s fixative | various | see recipe below | |
sodium cacodylate buffer | various | see recipe below | |
Richardson’s stain | various | see recipe below |
Recipes:
1. SPG Buffer
2. 0.1 M sodium cacodylate buffer, pH 7.35.
3. Monti’s fixative
4. Richardson’s stain