Si descrivono un<em> Ex vivo infezione</em> Modello per la visualizzazione delle interazioni dirette da agenti patogeni batterici con cellule umane tuba di Falloppio. L'intero modello di tessuto organo è stato istituito per indagare<em> C. trachomatis</em> Patologia indotta al tubo di Falloppio femminile in "vita-come" condizioni.
Infezioni del tratto genitale con Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) sono le più frequenti malattie sessualmente trasmesse nelle donne in tutto il mondo. Gioco inefficiente o persistenza dei patogeni può portare a salire infezioni del tratto superiore dell'apparato genitale e si suppone di provocare danni cronica infiammatoria a 1,2 tessuti infetti. Di conseguenza, gravi sequele cliniche come la malattia infiammatoria pelvica (PID), occlusione tubarica e infertilità può verificarsi 3,4.
La maggior parte della ricerca con C. trachomatis è stata condotta in linee cellulari epiteliali (ad esempio HEp-2 e cellule HeLa-229) o nei topi. Tuttavia, come coltura cellulare i modelli base, essi non riflettono la fisiologia del tessuto nativo, né la fisiopatologia della C. trachomatis infezioni del tratto genitale in vivo 5. Ulteriori limitazioni sono dati dal fatto che centrali cascata di segnalazione (per es IFN-γ mediated JAK / STAT pathway di segnalazione) che controllano la crescita intracellulare da Chlamydia sono fondamentalmente diverse tra i topi e gli esseri umani 6,7. Noi e gli altri quindi istituito un intero modello di tuba di Falloppio organo di indagare le interazioni dirette tra C. trachomatis e umano di Falloppio tubo di cellule ex vivo 8,9.
Per questo scopo, umani tube da donne sottoposte a isterectomia sono stati raccolti e infettati con C. trachomatis sierotipo D. Entro 24 ore dopo l'infezione, dove campioni analizzati mediante microscopia elettronica a scansione (SEM) e microscopia elettronica a trasmissione (TEM) per rilevare Chlamydia trachomatis mediato danno epiteliale e C. trachomatis formazione di inserimento nel tessuto di Falloppio.
Visualizzazione dei patogeni indotta da un danno al tessuto infetto è arduo e spesso limitata alle procedure sperimentali nei topi. Abbiamo stabilito un ex modello di infezione in vivo umani tube di Falloppio per analizzare C. trachomatis infezioni del tratto superiore dell'apparato genitale femminile. Con l'uso di questo metodo, siamo stati in grado di visualizzare C. trachomatis – danni per la salute umana indotta epitelio tube di Falloppio entro un giorno dopo l'infezione. Rigonfiamento cellulare e lisi erano tipiche alterazioni morfologiche che sono stati osservati in C. trachomatis – infetti tube di Falloppio, ma non in non-infetti controlli. Le analisi hanno rivelato che TEM clamidie implementare un tipico ciclo di sviluppo intracellulare nei tessuti infetti, che mostra le inclusioni di grandi dimensioni con corpi elementari re-differenziati, ma anche piccole inclusioni con corpi reticolati allargata che potrebbero indicare la persistenza. Tuttavia, il quadro morfologico da sola non è sufficiente per discriminare tra replinfezioni icating e persistente, che sono caratterizzati da un ridotto metabolismo e una maggiore resistenza agli antibiotici 10.
Distruzione dell'epitelio in infetti tube di Falloppio o è dovuto alla rottura di C. trachomatis – infettate le cellule epiteliali dopo il completamento del ciclo di sviluppo e il rilascio intracellulare di malattie infettive corpi elementari o il rilascio di citochine pro-infiammatorie 8. Patogeni indotta danni ai tessuti e le reazioni immunitarie host-indotti contro C. trachomatis dovrebbero essere i principali fattori che portano alla perdita della funzione delle cellule epiteliali, fibroblasti e rimodellamento infertilità tubarica, infine in vivo 8,11.
Uno dei limiti principali di questo modello è l'assenza di cellule infiammatorie che ostacola l'analisi degli effetti secondari al iniziale C. infezione da trachomatis dell'epitelio tuba di Falloppio. Tuttavia, il modello è appropriate per indagare diverse condizioni ambientali (ad esempio il contenuto di ossigeno) e l'iniziale host-risposta immunitaria acuta in C. infezioni trachomatis 8,9. Ulteriori progetti sono da stabilire un modello per i test degli antimicrobici nei confronti di C. trachomatis in interi tubi di Falloppio umani e di caratterizzare gli stati metaboliche dei diversi stadi di sviluppo osservate nell'epitelio delle tube di 2 fotoni microscopia laser scanning.
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato sostenuto dalla DFG-Cluster of Excellence "Infiammazione al Interfaces" (RA-Se, RA-D). Siamo grati per l'assistenza tecnica di ottima Kristin Wischnat.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
DMEM | PAA | E15-843 | |
RPMI | PAA | R15-802 | |
FCS | PAA | A15-101 | |
Cycloheximide | Sigma – Aldrich | ||
SPG Buffer | various | see recipe below | |
Monti’s fixative | various | see recipe below | |
sodium cacodylate buffer | various | see recipe below | |
Richardson’s stain | various | see recipe below |
Recipes:
1. SPG Buffer
2. 0.1 M sodium cacodylate buffer, pH 7.35.
3. Monti’s fixative
4. Richardson’s stain