我々は、説明します<em> ex vivoでの感染</em人間の卵管細胞を用いた細菌の病原体からの直接的な相互作用の可視化のために>モデル。全体の臓器組織モデルは、調査するために設立されました<em> C.トラコマチス</em"生命のような"条件下での女性の卵管へ>誘導病理。
クラミジアトラコマチス(C.トラコマティス )と生殖器感染症は最も頻繁には、世界中の女性に性的に病気を送信されます。病原体の非効率的なクリアランスや永続性は上部生殖管の感染を昇順と感染組織1,2に慢性炎症性損傷を引き起こすことになっているにつながる可能性があります。その結果、骨盤内炎症性疾患(PID)、卵管閉塞と不妊のような重篤な臨床的後遺症は3,4を発生する可能性があります。
Cとの研究のほとんどクラミジアは、上皮細胞株(例えば、HEp-2細胞およびHeLa-229)または、マウスで実施されている。しかし、細胞培養ベースのモデルと同様に、彼らはどちらもネイティブの組織の生理機能やCの病態を反映しません。 in vivoで 5 のクラミジア性器感染症。さらに制限が事実によって与えられている中央のシグナル伝達カスケード(例えば、IFN-γmediat細胞内のクラミジア増殖を制御ED JAK / STATシグナル伝達経路)は、基本的にマウスとヒト6,7の間で異なる。我々や他したがって、Cの間の直接的な相互作用を調査するために全体の臓器卵管モデルを確立クラミジアと人間の卵管細胞のex vivoで 8,9。
この目的のために、子宮摘出術を受ける女性からのヒト卵管は、Cで収集し、感染したトラコマチス 24時間感染後以内に血清D.、 クラミジア·トラコマチスを検出するために走査型電子顕微鏡(SEM)および透過型電子顕微鏡(TEM)を用いて分析試料は同様にCなどの上皮損傷を媒介卵組織内のクラミジア封入体形成。
感染組織への病原体によって誘発される損害の可視化は困難とマウスの実験手順にしばしば制限されています。我々 は 、C を分析するために人間の卵管にex vivoでの感染モデルを確立上部の雌の生殖器のクラミジア感染症。この方法を使用することによって、我々はC.を可視化することができましたマティス -一日後の感染内の人間卵管上皮に起因する損傷。携帯電話の腫れや溶解はC で観察された典型的な形態変化であったマティス -非感染コントロールの感染卵管はありません。 TEM分析は、再分化した小学校の体だけでなく、永続性を示している可能性があります拡大して網目状の本体と小さい介在物の大型介在物を示す、クラミジアは、感染した組織内に典型的な細胞内発育周期を実装することを明らかにした。しかし、単独で形態学的画像は、REPLを区別するのに十分ではありません減少し代謝を特徴としていicatingと永続的な感染症は、抗菌剤10に抵抗を増加させた。
感染した卵管の上皮の破壊は 、Cの破壊のいずれかによるものであるマティス -細胞内の発育サイクルや感染小学校団体のリリースや炎症性サイトカイン8のリリースが完了した後、感染した上皮細胞。病原体によって誘発される組織の損傷および Cに対する宿主によって誘導される免疫反応クラミジアは、上皮細胞機能の喪失、線維芽細胞のリモデリングおよび in vivo 8,11 で最後に卵管不妊につながる大きな要因であると考えられている。
このモデルの大きな制限の1つは、最初のCに二次的効果の分析を阻害する炎症性細胞の不在である卵管上皮のクラミジア感染症。しかし、このモデルはapです。異なる環境条件(例えば、酸素含有量)と急性Cの最初のホスト·免疫応答を調査するためにpropriate クラミジア感染症8,9。さらに計画ではC.に対する抗菌薬のテストのためのモデルを確立することです。全体の人間の卵管にクラミジアと2光子レーザー走査顕微鏡による卵管上皮で観察された別の発達段階の代謝状態を特徴づける。
The authors have nothing to disclose.
この作品は、 "インターフェイスの炎症"エクセレンスのDFG-クラスター(RA-IF、RA-D)によってサポートされていました。我々は、クリスティンWischnatの優れた技術支援に感謝しています。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
DMEM | PAA | E15-843 | |
RPMI | PAA | R15-802 | |
FCS | PAA | A15-101 | |
Cycloheximide | Sigma – Aldrich | ||
SPG Buffer | various | see recipe below | |
Monti’s fixative | various | see recipe below | |
sodium cacodylate buffer | various | see recipe below | |
Richardson’s stain | various | see recipe below |
Recipes:
1. SPG Buffer
2. 0.1 M sodium cacodylate buffer, pH 7.35.
3. Monti’s fixative
4. Richardson’s stain