Liofilização é muitas vezes uma forma fácil e conveniente de obter produtos secos de células bacterianas viáveis. Uma questão do processo é a sobrevivência da célula. Nós detalhe aqui um processo para investigar a forma como a sobrevivência das células durante a liofilização é influenciada pelas propriedades da formulação utilizada.
Cellular água pode ser removida para inactivar reversivelmente microorganismos para facilitar o armazenamento. Um tal método de remoção é a liofilização, que é considerado um método de desidratação suave. Para facilitar a sobrevivência das células durante a secagem, as células são frequentemente formuladas anteriormente. A formulação forma uma matriz que incorpora as células e protege-los a partir de várias tensões impostas nocivos sobre as células durante a congelação e secagem. Apresenta-se aqui um método geral para avaliar a taxa de sobrevivência das células após a liofilização e demonstramos pela comparação dos resultados obtidos com quatro formulações diferentes: a sacarose, o dissacárido sacarose derivada polímero Ficoll PM400, e os respectivos polissacáridos hidroxietil celulose (HEC ) e hidroxipropil-metil-celulose (HPMC), em duas estirpes de bactérias, P. putida KT2440 e A. A6 chlorophenolicus. Neste trabalho, ilustram como preparar formulações para liofilização e como para investigar o mecaismos de sobrevivência celular após a reidratação, caracterizando a formulação utilizando de calorimetria exploratória diferencial (DSC), medições de tensão superficial, análise de raios-X e microscopia eletrônica e relacionar esses dados com as taxas de sobrevivência. Os polímeros foram escolhidas para obter uma estrutura monomérica do respectivo polissacarídeo sacarose assemelhando-se a um em graus variados. Usando este método de instalação que mostrou que os polímeros podem suportar a sobrevivência celular tão eficazmente como dissacarídeos se certas propriedades físicas da formulação é controlada 1.
A motivação para este estudo foi investigar algumas propriedades de formulação que podem ser de grande importância para a sobrevivência da célula durante a liofilização. Embora a tolerância secagem intrínseco varia entre as diferentes espécies, tal como ilustrado na Figura 1A, a tendência de quão bem a formulações diferentes suporte a sobrevivência das células é semelhante. É informativo começar com uma comparação de sacarose e Ficoll. Acredita-se que um factor-chave para uma form…
The authors have nothing to disclose.
O trabalho foi financiado pela Fundação Sueca para a Pesquisa Ambiental Estratégica (MISTRA) através do programa DOM e Grant 211.684 (BACSIN) da Comunidade programa quadro europeu FP7 Union. Agradecemos J. Engstrand de assistência em filmar análise de raios-X e L. Tang para ajudar com a narrativa conceitual.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Ficoll PM 400 | GE-healthcare | 17-0300-10 | |
HEC (Natrosol-M Pharm Grade) | Ashland | Gift from Ashland | |
HPMC (Methocel F4M) | Dow | Gift from the Department of Pharmacy, Uppsala University | |
Sucrose | Sigma-Aldrich | S2395 | |
NaCl | Sigma-Aldrich | 71376 | |
Tryptic Soy broth | Merck | 105459 | |
Tryptic Soy Agar | Merck | 105458 | |
Lyostar II | FTS Kinetics | N.A. | |
Pyris Diamond DSC | Perkin-Elmer | N.A. | |
Bruker AXS SMART CCD 1k Diffractometer | Bruker | N.A | |
Dual-beam FEI Strata DB235 FIB/SEM | FEI | N.A | |
Krüss Educational Tensiometer | Krüss | N.A. |