बाद में ऊष्मायन चरणों (हैम्बर्गर और हैमिल्टन (एच एच) मंच 22 से अधिक उम्र) में चिकन भ्रूण में जीन स्थानांतरण की एक विधि का वर्णन है. इस विधि के नुकसान पर काबू<em> ओवो में</em> Electroporation बड़े चिकन भ्रूण के लिए आवेदन किया है और जीन समारोह और बड़े विकास के चरणों में विनियमन का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी तकनीक है.
चिकन भ्रूण भ्रूण विकास के दौरान जीन समारोह और विनियमन के अध्ययन के लिए एक शानदार मॉडल प्रणाली प्रदान करता है ओवो electroporation से अधिक व्यक्त बहिर्जात जीनों के लिए एक शक्तिशाली विधि या चिकन एक भ्रूण में vivo में अंतर्जात जीन नीचे विनियमित है. डीएनए plasmids एन्कोडिंग 2-4 जीन, छोटे दखल शाही सेना (siRNA) 5 प्लास्मिड, छोटे कृत्रिम आरएनए 6 oligos, और morpholino antisense oligonucleotides 7 के रूप में विभिन्न संरचनाओं electroporation द्वारा आसानी से किया जा सकता है चिकन भ्रूण में ट्रांसफ़ेक्ट. हालांकि, की ओवो electroporation में आवेदन जल्दी ऊष्मायन (HH20 चरण की तुलना में छोटी – हैम्बर्ग और हैमिल्टन के अनुसार) चरणों में भ्रूण के लिए सीमित है 8 और इसके बाद के चरणों में भ्रूण में आवेदन के लिए कुछ नुकसान (HH22 मंच से अधिक उम्र के हैं – लगभग 3.5 विकास के दिन). उदाहरण के लिए, बाद के चरणों में पीतक झिल्ली अमूमन हैकरेगा झिल्ली खोल में फँस गया है और एक खिड़की खोलने सहयोगी जहाजों के संबंध विच्छेद का कारण बनता है, जिसके परिणामस्वरूप भ्रूण की मौत, पुराने भ्रूण पीतक और अपरापोषिक वाहिकाओं, जहां यह मुश्किल है के लिए उपयोग और भ्रूण हेरफेर के द्वारा कवर किया जाता है, पुराने भ्रूण चाल सख्ती और खोल में एक अपेक्षाकृत छोटी सी खिड़की के माध्यम से ओरिएंटेशन को नियंत्रित करने के लिए मुश्किल है.
इस प्रोटोकॉल में हम देर चरणों (HH22 मंच से पुराने) में चिकन भ्रूण में जीन स्थानांतरण के लिए एक पूर्व ओवो electroporation विधि प्रदर्शित करता है. पूर्व ओवो electroporation के लिए, भ्रूण पेट्री 9 व्यंजन में संवर्धित कर रहे हैं और पीतक और अपरापोषिक जहाजों को व्यापक रूप से फैले हुए हैं. इन शर्तों के तहत, पुराने चिकन भ्रूण और आसानी से पहुँचा रहे हैं चालाकी से. इसलिए, इस विधि के नुकसान पर काबू ओवो बड़े चिकन भ्रूण के लिए लागू electroporation में. इस पद्धति का उपयोग करके, प्लास्मिड आसानी से विभिन्न भागों में ट्रांसफ़ेक्ट किया जा सकता हैबड़े चिकन 10-12 भ्रूण की.
इस प्रोटोकॉल बड़े चिकन भ्रूण पूर्व ओवो electroporation द्वारा (जैसे, E6 में पर ऑप्टिक tectum के में) में जीन स्थानांतरण के लिए एक मार्गदर्शन प्रदान करता है. इस विधि electroporation की बड़े चिकन भ्रूण के लिए उपयोग प्रदान करता ह…
The authors have nothing to disclose.
इस काम जर्मन रिसर्च फाउंडेशन (; DFG LU1455/1-1) से एक अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.
Name | Company | Catalog Number |
Electroporator | Nepa Gene, Japan | CUY21-Edit |
Electrodes | Nepa Gene, Japan | CUY661-3×7 |
Egg incubator | Ehret, Germany | BSS160 |
Embryo incubator | BINDER GmbH, Germany | |
Fluorescent microscope | Keyence, Deutschland GmbH | BZ-8000 |
Petri dish | Greiner Bio-One GmbH, Germany | |
Microelectrode puller | World Precision Instruments, Germany | PUL-100 |