基因转移到老年人的鸡胚<em>前OVO</em>电穿孔
Summary
介绍将在以后的孵化阶段（比汉堡和汉密尔顿阶段（HH）22岁以上）的鸡胚胎的基因转移方法。这种方法克服缺点<em>在OVO</em>电适用于年龄较大的鸡胚胎是一种有用的技术，研究基因功能和调控，在旧的发展阶段。
Abstract
鸡胚胎为研究胚胎发育过程中基因功能和调控提供了一个很好的模型系统。 在OVO电是一个强大的过度表达外源基因的方法或下调体内的内源性基因在鸡胚1。不同的结构，如DNA质粒编码基因的小干扰RNA（siRNA）的质粒5，小合成的RNA寡核苷酸6，和吗啉反义寡核苷酸7 2-4，可以很容易地通过电转染鸡胚胎。然而， 在OVO电的应用是有限的胚胎早期孵化阶段（年龄小于阶段HH20 -据汉堡和汉密尔顿）8，有一些缺点是其在胚胎中的应用，在稍后阶段（比HH22阶段老年人-约3.5发展天）。例如，在稍后阶段卵黄膜是通常盟友坚持应当膜，并在外壳打开一个窗口，导致血管破裂，导致胚胎死亡;年纪较大的胚胎卵黄囊和尿囊血管，它是很难访问和操纵胚胎覆盖旧胚胎移动大力通过在shell中比较小的窗口，是难以控制的方向。
在这个协议中，我们证明前OVO电穿孔法基因转移到鸡胚胎后期（比HH22阶段旧）。对于前大毛电，是胚胎培养在培养皿9和卵黄和尿囊血管被广泛流传。在这些条件下，年龄较大的鸡胚胎很容易访问和操纵。因此，这种方法克服缺点，适用于年龄较大的鸡胚胎的OVO电。质粒使用这种方法，可以很容易地转成不同的部分老鸡胚胎10-12。
Protocol
Discussion
该协议提供了旧鸡胚前OVO电（例如，将在E6顶盖）的转基因指南。这种方法延长使用电老鸡胚胎，并在稍后阶段研究基因在体内的功能可以方便地应用于许多实验室。至少从E4类E7的胚胎可以用这种方法成功的电穿孔和电穿孔胚胎可以存活直到E15 11。除了 大脑，这种方法还可以用于基因转移成鸡肢体制度11。
应特别注意支付给由前OVO电?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由德国研究基金会（DFG; LU1455/1-1）的资助支持。
Materials
| Name | Company | Catalog Number |
| Electroporator | Nepa Gene, Japan | CUY21-Edit |
| Electrodes | Nepa Gene, Japan | CUY661-3×7 |
| Egg incubator | Ehret, Germany | BSS160 |
| Embryo incubator | BINDER GmbH, Germany | |
| Fluorescent microscope | Keyence, Deutschland GmbH | BZ-8000 |
| Petri dish | Greiner Bio-One GmbH, Germany | |
| Microelectrode puller | World Precision Instruments, Germany | PUL-100 |
References
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