وصفت وهناك طريقة لنقل الجينات إلى أجنة الدجاج في مراحل الحضانة في وقت لاحق (أقدم من هامبورغ وهاملتون مرحلة (سمو) 22). هذا الأسلوب يتغلب على عيوب<em> في البيضة</emتطبق> electroporation إلى أجنة الدجاج وأقدم هو تقنية مفيدة لدراسة وظيفة الجين والتنظيم في مراحل أقدم التنموية.
Abstract
الجنين الدجاج ويوفر نظام نموذجا ممتازا لدراسة وظيفة الجين والتنظيم أثناء التطور الجنيني. في electroporation OVO هو وسيلة قوية لالافراط في التعبير عن الجينات الخارجية أو أسفل تنظيم الجينات الذاتية في الجسم الحي في أجنة الدجاج 1. ويمكن هياكل مختلفة مثل جينات الحمض النووي الترميز البلازميدات 2-4، صغيرة تدخل الحمض النووي الريبي (سيرنا) البلازميدات 5، صغيرة الاصطناعية RNA oligos 6، و [أليغنوكليوتيد] morpholino العقاقير 7 transfected بسهولة في أجنة الدجاج بواسطة electroporation. ومع ذلك، يقتصر تطبيق في electroporation البيضة إلى الأجنة في مراحل الحضانة في وقت مبكر (الذين تقل أعمارهم عن مرحلة HH20 – وفقا لهامبورغ وهاملتون) 8، وهناك بعض المساوئ لتطبيقه في الأجنة في مراحل لاحقة (أقدم من مرحلة HH22 – ما يقرب من 3.5 أيام التنمية). على سبيل المثال، الغشاء المحي في مراحل لاحقة هو أوسوحليف تمسك الغشاء يجب وفتح نافذة في وعاء يسبب تمزق في الأوعية، مما أدى إلى وفاة الأجنة، وتغطي أقدم الأجنة بواسطة السفن المحي والسقاء، حيث أنه من الصعب الوصول إليها والتلاعب في الأجنة، أقدم أجنة تحرك بقوة ويصعب السيطرة على التوجه من خلال نافذة صغيرة نسبيا في وعاء.
في هذا البروتوكول نظهر سابق الأسلوب electroporation OVO لنقل الجينات في أجنة الدجاج في المراحل المتأخرة (أقدم من مرحلة HH22). لelectroporation OVO السابقين، تستزرع الأجنة في أطباق بتري (9) وتنتشر على نطاق واسع المحي والأوعية السقاء. في ظل هذه الظروف، يتم الوصول إليها بسهولة الأجنة أقدم الدجاج والتلاعب بها. ولذلك، هذا الأسلوب يتغلب على عيوب في electroporation OVO تطبيقها على الأجنة أقدم الدجاج. باستخدام هذه الطريقة، يمكن البلازميدات transfected بسهولة إلى أجزاء مختلفةمن أجنة الدجاج أقدم 10-12.
Protocol
1. سابق الثقافة OVO وضعت جديدة البويضات المخصبة على الجانب الطويل في حاضنة القسري مشروع-(BSS160، Ehret، ألمانيا) على 37،5 درجة مئوية مع رطوبة 60٪ للحضانة. لا ينبغي أن البيض المخزنة في 12 درجة مئوية لمدة أطول من أسبوع واح?…
Discussion
هذا البروتوكول يوفر دليلا لنقل الجينات إلى أجنة أقدم الدجاج (على سبيل المثال، في السقف البصري في E6) بواسطة electroporation OVO السابقين. وتمتد هذه الطريقة على استخدام electroporation إلى أجنة الدجاج وكبار السن ويمكن تطبيقها بسهولة على العديد من المختبرات لدراسة وظيفة الجينات <em…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل عن طريق منحة من مؤسسة البحوث الألمانية (DFG؛ LU1455/1-1).
Luo, J., Yan, X., Lin, J., Rolfs, A. Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation. J. Vis. Exp. (65), e4078, doi:10.3791/4078 (2012).