Метод переноса генов в куриных эмбрионах на более поздних стадиях инкубации (старше гамбургеров и Гамильтон этапе (HH) 22) описывается. Этот метод позволяет преодолеть недостатки<em> В ово</em> Электропорации применяемых к старым куриных эмбрионов и полезный метод изучения функций генов и регулирования в старших стадиях развития.
Куриного эмбриона дает прекрасную модельную систему для изучения функций генов и регулирования в процессе эмбрионального развития. Ово электропорации это мощный метод более-экспресс экзогенных генов или вниз регулировать эндогенных генов в естественных условиях на куриных эмбрионах 1. Различные структуры, такие как ДНК, кодирующих генов плазмид 2-4 малых интерферирующих РНК (миРНК) плазмиды 5 небольших синтетических РНК олигонуклеотидов 6 и морфолино антисмысловых олигонуклеотидов 7 можно легко трансфекции в куриных эмбрионах путем электропорации. Тем не менее, применение в ово электропорации ограничивается эмбрионов на ранних стадиях инкубации (моложе этап HH20 – в соответствии с Гамбургом и Гамильтон) 8 и есть некоторые недостатки в его применении у эмбрионов на поздних стадиях (старше этап HH22 – около 3,5 дня развития). Например, желточной оболочки на более поздних стадиях УрГУсоюзника застряли с мембраной должна и открыть окно в оболочке вызывает разрыв сосудов, что приводит к гибели эмбриона, старший эмбрионов покрыты желточного и аллантоисной суда, где трудно получить доступ и управлять эмбрионов; старше эмбрионов двигаться энергично и трудно контролировать ориентацию через относительно небольшое окно в оболочке.
В этом протоколе мы демонстрируем бывший ово метод электропорации для переноса генов в куриных эмбрионов на поздних стадиях (старше этап HH22). Для бывших ово электропорация, эмбрионы культивировали в чашках Петри, 9 и желточного и аллантоисной судах широко распространены. В этих условиях, чем старше куриных эмбрионов легко доступны и манипулировать. Таким образом, этот метод устраняет недостатки в ово электропорации применяется к старшему куриных эмбрионов. Используя этот метод, плазмиды могут быть легко трансфекции в разных частяхстаршего куриных эмбрионов 10-12.
Этот протокол представляет собой руководство для переноса генов в старые куриных эмбрионах (например, в оптических покрышки на E6) экс ово электропорации. Этот метод расширяет возможности использования электропорации пожилых куриных эмбрионов и могут быть легко применены для мно…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана грантом от немецкого исследовательского фонда (DFG, LU1455/1-1).
Name | Company | Catalog Number |
Electroporator | Nepa Gene, Japan | CUY21-Edit |
Electrodes | Nepa Gene, Japan | CUY661-3×7 |
Egg incubator | Ehret, Germany | BSS160 |
Embryo incubator | BINDER GmbH, Germany | |
Fluorescent microscope | Keyence, Deutschland GmbH | BZ-8000 |
Petri dish | Greiner Bio-One GmbH, Germany | |
Microelectrode puller | World Precision Instruments, Germany | PUL-100 |