Ce protocole permet d'identifier les facteurs qui modulent fonctionnelle masse des cellules bêta de trouver des cibles thérapeutiques potentielles pour le traitement du diabète. Le protocole consiste en une méthode simplifiée pour évaluer la réplication des îlots et la fonction des cellules bêta des îlots de Langerhans isolés de rat après la manipulation de l'expression des gènes par des adénovirus.
L'homéostasie du glucose est principalement contrôlée par les hormones du système endocrinien de l'insuline et le glucagon, sécrété par la version bêta du pancréas et des cellules alpha, respectivement. Fonctionnelle masse des cellules bêta est déterminée par la masse des cellules bêta anatomique ainsi que la capacité des cellules bêta pour répondre à une charge en éléments nutritifs. Une perte de masse des cellules bêta fonctionnelles est au cœur de ces deux formes principales de diabète 1-3. Considérant que les résultats en déclin bêta fonctionnelles de masse de cellules à partir d'une attaque auto-immune de type 1 du diabète, dans le diabète de type 2, cette décroissance se développe à la fois une incapacité des cellules bêta à sécréter de l'insuline de façon appropriée et la destruction des cellules bêta à partir d'un cadre de mécanismes. Ainsi, les efforts visant à restaurer la fonctionnalité de masse des cellules bêta sont primordiaux pour un meilleur traitement des cures et potentiels pour le diabète.
Des efforts sont en cours pour identifier les voies moléculaires qui peuvent être exploitées afin de stimuler la réplication et d'améliorer la fonction des cellules bêta.Idéalement, les objectifs thérapeutiques permettrait d'améliorer à la fois la croissance des cellules bêta et la fonction. Peut-être plus important, cependant, c'est de déterminer si une stratégie qui stimule la croissance des cellules bêta se fait au prix de la fonction des cellules bêta atteinte (par exemple avec certains oncogènes) et vice-versa.
Par systématiquement la suppression ou la surexpression de l'expression de gènes cibles dans les îlots isolés de rat, on peut identifier des cibles thérapeutiques potentielles pour augmenter la masse des cellules bêta fonctionnelles 4-6. Des vecteurs adénoviraux peut être utilisé à des protéines efficacement surexpriment ou démontable en îlots isolés de rat 4,7-15. Ici, nous présentons une méthode pour manipuler l'expression des gènes en utilisant transduction adénovirale et d'évaluer la réplication des îlots et la fonction des cellules bêta des îlots de Langerhans isolés de rat (figure 1). Cette méthode a été utilisée précédemment pour identifier de nouvelles cibles qui modulent la réplication des cellules bêta ou la fonction 5,6,8,9,16,17.
Établir des voies qui peuvent être modulés afin de stimuler la réplication et d'améliorer la fonction des cellules bêta sont pertinentes pour les deux principales formes de diabète. Parce que fonctionnelle masse des cellules bêta est tributaire de l'existence et la fonction de cellules sécrétrices d'insuline, l'évaluation de ces déterminants a simultanément ses avantages. Ce protocole décrit un protocole simplifié pour déterminer si la surexpression ou la suppression d'une protéine c…
The authors have nothing to disclose.
Ce travail a été soutenu par des subventions du NIH DK078732 (à PTF).
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
RPMI 1640 media | Gibco | 11879 | |
Penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | |
6-well plate | BD-Falcon | 35-1146 | Non-TC treated |
[methyl-3H]-thymidine | Perkin Elmer | NET027Z001MC | 1 mCi/ml |
Micro-centrifuge tubes | Denville | C2170 | 1.7 ml |
NaCl | Sigma | 59888 | |
KCl | Acros | 42409 | |
KH2PO4 | Acros | 20592 | |
MgSO4 | Acros | 41348 | |
CaCl2 | Acros | 34961 | |
HEPES | Sigma | H0887 | 1 M solution |
35% BSA | Sigma | A7979 | |
NaHCO3 | Acros | 42427 | |
d-glucose | Sigma | G8769 | |
TCA | Fisher Scientific | SA9410-1 | 10% w/v |
NaOH | Acros | 12426 | |
Scintillation counting tube | Sarstedt | 58.536 | 7 ml, PP |
Scintillation counting tube cap | Sarstedt | 65.816 | |
Econo-Safe counting cocktail | RPI | 111175 | |
Insulin RIA | Siemens | TKIN2 | |
BCA Assay Kit | Thermo Scientific | 23250 | |
Equipment | |||
Centrifuge | Eppendorf | 5415R | |
Scintillation counting tube rack | Sarstedt | 93.1431.001 | |
Liquid scintillation counter | Perkin Elmer | Tri-Carb 2910TR |