פרוטוקול זה מאפשר לזהות את הגורמים לווסת את תפקודי התא המוני ביתא למצוא מטרות טיפוליות אפשריות לטיפול בסוכרת. פרוטוקול מורכבת השיטה יעילה להעריך איון שכפול של התא פונקציה בטא עכברוש איים מבודדים בעקבות מניפולציה של ביטוי גנים עם adenoviruses.
הומאוסטזיס הגלוקוז נשלטת בעיקר על ידי אינסולין האנדוקרינית ההורמונים גלוקגון, המופרש מן הלבלב ביתא מתאי אלפא, בהתאמה. מסת התפקוד תא הבטא נקבעת על ידי מסת תאים אנטומי בטא, כמו גם את יכולתם של תאים בטא להגיב עומס התזונתי. אובדן מסת בטא תפקודית תא מרכזי שני צורות עיקריות של סוכרת 1-3. ואילו ירידה תפקודית תאים בטא תוצאות המונית התקפה אוטואימונית סוכרת מסוג 1, סוכרת מסוג 2, הפחתה זו מפתחת גם מחוסר היכולת של תאים בטא להפריש אינסולין כראוי והרס תאים בטא מתוך קאדר של מנגנונים. לפיכך, המאמצים לשקם תא תפקודית המוני ביתא הם עליונה לטיפול טוב יותר ותרופות פוטנציאל לסוכרת.
נערכים מאמצים לזהות מסלולים מולקולריים, שניתן לנצלן כדי לעורר את השכפול ולשפר את תפקוד תאים בטא.באופן אידיאלי, מטרות טיפוליות תשפר גם את גדילת התאים לתפקד בטא. אולי חשוב יותר אף היא לזהות אם האסטרטגיה מעורר צמיחת תאים בטא מגיע במחיר של תפקוד התא ופגיעה בטא (כמו עם אונקוגנים מסוימים), ולהיפך.
על ידי ביטוי בדיכוי שיטתי או overexpressing של גני מטרה של איים מבודדים חולדה, אפשר לזהות מטרות טיפוליות פוטנציאל הגדלת מסת תאים פונקציונלית בטא 4-6. וקטורים adenoviral יכול להיות מועסק על חלבונים overexpress ביעילות או מציאה של איים מבודדים 4,7-15 חולדה. כאן, אנו מציגים שיטה לתפעל ביטוי גנים ניצול התמרה adenoviral ולהעריך איון שכפול של התא פונקציה בטא עכברוש איים מבודדים (איור 1). בשיטה זו נעשה שימוש בעבר כדי לזהות מטרות חדשות, כי לווסת את שכפול התא בטא או פונקציה 5,6,8,9,16,17.
מסלולים הקובע כי יכול להיות מאופנן כדי לעורר את השכפול ולשפר את תפקוד תאים בטא רלוונטיים בשתי צורות עיקריות של סוכרת. בגלל המסה התפקודית תא בטא תלויה בקיומו והתפקוד של האינסולין בתאים, להערכת הגורמים הללו בעת ובעונה אחת יש יתרונות משלה. פרוטוקול זה מתאר פרוטוקול יעי?…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי מענק DK078732 מ-NIH (עד פורומים בעברית).
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
RPMI 1640 media | Gibco | 11879 | |
Penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | |
6-well plate | BD-Falcon | 35-1146 | Non-TC treated |
[methyl-3H]-thymidine | Perkin Elmer | NET027Z001MC | 1 mCi/ml |
Micro-centrifuge tubes | Denville | C2170 | 1.7 ml |
NaCl | Sigma | 59888 | |
KCl | Acros | 42409 | |
KH2PO4 | Acros | 20592 | |
MgSO4 | Acros | 41348 | |
CaCl2 | Acros | 34961 | |
HEPES | Sigma | H0887 | 1 M solution |
35% BSA | Sigma | A7979 | |
NaHCO3 | Acros | 42427 | |
d-glucose | Sigma | G8769 | |
TCA | Fisher Scientific | SA9410-1 | 10% w/v |
NaOH | Acros | 12426 | |
Scintillation counting tube | Sarstedt | 58.536 | 7 ml, PP |
Scintillation counting tube cap | Sarstedt | 65.816 | |
Econo-Safe counting cocktail | RPI | 111175 | |
Insulin RIA | Siemens | TKIN2 | |
BCA Assay Kit | Thermo Scientific | 23250 | |
Equipment | |||
Centrifuge | Eppendorf | 5415R | |
Scintillation counting tube rack | Sarstedt | 93.1431.001 | |
Liquid scintillation counter | Perkin Elmer | Tri-Carb 2910TR |