Summary

Esaurimento e Ricostituzione dei macrofagi nei topi

Published: August 01, 2012
doi:

Summary

I macrofagi hanno un ruolo centrale nella omeostasi e patologia in molti tessuti. Il protocollo presentato qui descrive i metodi per esaurire i macrofagi<em> In vivo</em>, Derivanti da macrofagi polarizzati aspirati di midollo osseo, e trasferendo adoptively macrofagi in topi. Queste tecniche consentono la determinazione del ruolo che i macrofagi polarizzati svolgono nella salute e nella malattia.

Abstract

I macrofagi hanno un ruolo critico nella risposta immunitaria innata alla sfida infettiva o lesioni, iniziando la risposta immunitaria innata e dirigere la risposta immunitaria acquisita. Macrofagi disfunzione può comportare l'impossibilità di montare una risposta immunitaria appropriata e, come tale, è stata implicata in molti processi patologici, quali le malattie infiammatorie intestinali. I macrofagi visualizzare fenotipi polarizzati che sono approssimativamente suddivise in due categorie. Classicamente macrofagi attivati, attivato dalla stimolazione con LPS o IFNy, svolgono un ruolo essenziale nella risposta alla sfida batterica che macrofagi attivati ​​alternativamente, attivato da IL-4 o IL-13, partecipare detriti scavenging e rimodellamento tissutale e sono stati implicati nella risoluzione fase di infiammazione. Durante una risposta infiammatoria in vivo, i macrofagi si trovano in mezzo a una miscela complessa di infiltrare cellule del sistema immunitario e possono partecipare mediante l'esasperazione o resolving infiammazione. Per definire il ruolo di macrofagi in situ in un modello animale intero, è necessario esaminare l'effetto di esaurire macrofagi dall'ambiente complesso. Per porre domande circa il ruolo del fenotipo dei macrofagi in situ, fenotipicamente definite macrofagi polarizzati, può essere derivata ex vivo, da aspirati di midollo osseo e aggiunto nuovamente ai topi, con o senza previa deplezione dei macrofagi. Nel protocollo qui presentata clodronato liposomi contenenti, rispetto ai controlli iniettati PBS, sono stati utilizzati per esaurire macrofagi colon durante destrano solfato sodico (DSS)-colite indotta nei topi. Inoltre, macrofagi polarizzati sono stati ottenuti ex vivo e trasferito topi mediante iniezione endovenosa. Un avvertimento di questo approccio è che clodronato contenenti liposomi esaurire tutte le fagociti professionali, comprese sia le cellule dendritiche ei macrofagi in modo da garantire l'effetto osservato da deplezione dei macrofagi è specifico, la ricostituzione of fenotipo mediante trasferimento adottivo di macrofagi è necessario. Deplezione macrofagi nei topi possono anche essere ottenuto topi reincrocio su un CD11b-DTR fondo, che è un ottimo approccio complementare. Il vantaggio di clodronato contenente mediata da liposomi esaurimento è che non richiede il tempo ei costi legati in topi reincrocio e può essere utilizzato in topi indipendentemente dal fondo dei topi C57BL / 6, BALB / c, o sfondo mista ).

Protocol

1. I macrofagi riducono Utilizzo clodronato contenenti liposomi I liposomi vengono conservati a 4 ° C. Due ore prima dell'iniezione, rimuovere clodronato contenenti liposomi, PBS contenenti liposomi, o PBS sterile (iniezione controllo) dal frigorifero per consentire loro di la temperatura ambiente (18 ° C). Invertire le provette contenenti liposomi 8-10 volte per assicurare una distribuzione uniforme prima di caricare 200 pl in una siringa da 1 ml. Attaccare a 26 gauge all'inizio della sir…

Discussion

I macrofagi sono cellule fagocitiche che svolgono un ruolo importante nel sistema immunitario. Essi sono responsabili per l'avvio della risposta immunitaria innata e dirigere la risposta immunitaria acquisita. Tipicamente, macrofagi attivati ​​classicamente vengono attivati ​​da IFNy o LPS e sono responsabili per eliminare patogeni e montare una risposta infiammatoria 1. Viceversa, in alternativa macrofagi attivati ​​sono attivati ​​da IL-4 o IL-13 e gioca un ruolo in detriti di lavaggio e…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato supportato da un 'Grant in Aid di Ricerca' dal morbo di Crohn e Colite Foundation del Canada LMS, che è supportato da una Canadian Association of Gastroenterology / Canadian Association of Health s Research / Crohn 'e Colite Fondazione Premio Canada Investigator Nuovo.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number
Clodronate-containing liposomes Clodronateliposomes.org  
PBS-containing liposomes Clodronateliposomes.org  
Sterile PBS pH7.4 Invitrogen 14190
IMDM Invitrogen 12440
Fetal Calf Serum (FCS) Invitrogen 12483
acetic acid BDH Aristar BDH3092-500MLP
Monothioglycerol (MTG) Sigma 96-275
Recombinant murine MCSF Stemcell Technologies 02951
Recombinant murine GM-CSF Stemcell Technologies 02935
Recombinant murine IL-3 Stemcell Technologies 02903
Recombinant murine IFNγ Stemcell Technologies 02746
Recombinant murine IL-4 Stemcell Technologies 02714
Cell Dissociation Buffer Invitrogen 13150-016
Rat anti-F4/80 Antibody AbD Serotec MCA497GA
Mouse anti-ArgI Antibody BD Transduction Laboratories 610708

Table 1. Specific reagents used in this protocol.

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Cite This Article
Weisser, S. B., van Rooijen, N., Sly, L. M. Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice. J. Vis. Exp. (66), e4105, doi:10.3791/4105 (2012).

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