Summary

Истощение и разведения макрофагов у мышей

Published: August 01, 2012
doi:

Summary

Макрофаги играют центральную роль в поддержании гомеостаза и патологии во многих тканях. Протокол, представленные здесь описываются методы истощения макрофагов<em> В естественных условиях</em>, Получения поляризованных макрофаги из костного мозга аспирационной и восприимчиво передачи макрофагов мышам. Эти методы позволяют определить ту роль, которую поляризованных макрофаги играют в здоровье и болезни.

Abstract

Макрофаги являются важнейшими игроками на врожденный иммунный ответ на инфекционные проблемы или травмы, начала врожденного иммунного ответа и направления приобретенного иммунного ответа. Макрофагов дисфункция может привести к невозможности установить соответствующий иммунный ответ и, таким образом, был замешан во многих болезненных процессов, в том числе воспалительных заболеваний кишечника. Макрофаги отображение поляризованных фенотипов, которые разделены на две категории. Классически активированными макрофагами, активируются стимуляции IFNγ или ЛПС, играют важную роль в ответ на бактериальные задачей в то время как альтернативы активированные макрофаги, активированные ИЛ-4 и IL-13, участвовать в мусор очистки и тканей реконструкции и были вовлечены в разрешение фазы воспаления. В ходе воспалительной реакции в живом организме, макрофаги находятся на фоне сложной смеси проникают иммунные клетки и могут принимать участие, обостряя или resolvinг воспаления. Для определения роли макрофагов в месте, в целом модель животного, необходимо изучить влияние истощения макрофаги из сложных условиях. Чтобы задавать вопросы о роли макрофагов фенотип на месте, фенотипически определенный поляризованных макрофаги могут быть выведены бывшие естественных условиях, от аспирационной костного мозга и добавил к мышам, с или без предварительного истощения макрофагов. В протоколе, представленные здесь клодронат содержащих липосомы, против PBS вводится контроль, были использованы для разрушающих толстой макрофагов в декстран сульфата натрия (DSS), индуцированного колита у мышей. Кроме того, поляризованный макрофаги были получены бывшим естественных и переданы мышей путем внутривенной инъекции. Предостережение такого подхода является то, что клодронат содержащих липосомы, разрушающих все профессиональные фагоциты, в том числе и дендритных клеток и макрофагов, с тем чтобы обеспечить наблюдаемый эффект от истощения макрофагов конкретных, о восстановлениие фенотип приемными передачи макрофаги необходимо. Системный истощение макрофагов у мышей также может быть достигнуто путем обратного скрещивания мышей на CD11b-DTR фон, который является отличным взаимодополняющий подход. Преимущество клодронат содержащих липосомы опосредованного истощение является то, что он не требует времени и средств, участвующих в беккросс мышей и он может быть использован в мыши независимо от того, на фоне мышей (C57BL / 6, BALB / с, или смешанного происхождения ).

Protocol

1. Разрушающих Макрофаги Использование клодронат содержащих липосомы Липосомы хранятся при температуре 4 ° C. За два часа до инъекции, удалять клодронат содержащих липосомы, содержащие PBS липосомы, или стерильной PBS (введение контроля) из холодильника, чтобы они могли привыкнуть к ?…

Discussion

Макрофаги являются фагоциты, которые играют важную роль в иммунной системе. Они несут ответственность за развязывание врожденного иммунного ответа и направления приобретенного иммунного ответа. Как правило, классически активированные макрофаги активируются IFNγ или LPS и несут ответс?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта работа была поддержана "Грант в помощь исследованиям" от Крона и колит Фонд Канады LMS, которые поддерживают Канадская ассоциация гастроэнтерологов / Канадская ассоциация здравоохранения с Исследования / Крона и колит Фонд Канады премии следователь новый.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number
Clodronate-containing liposomes Clodronateliposomes.org  
PBS-containing liposomes Clodronateliposomes.org  
Sterile PBS pH7.4 Invitrogen 14190
IMDM Invitrogen 12440
Fetal Calf Serum (FCS) Invitrogen 12483
acetic acid BDH Aristar BDH3092-500MLP
Monothioglycerol (MTG) Sigma 96-275
Recombinant murine MCSF Stemcell Technologies 02951
Recombinant murine GM-CSF Stemcell Technologies 02935
Recombinant murine IL-3 Stemcell Technologies 02903
Recombinant murine IFNγ Stemcell Technologies 02746
Recombinant murine IL-4 Stemcell Technologies 02714
Cell Dissociation Buffer Invitrogen 13150-016
Rat anti-F4/80 Antibody AbD Serotec MCA497GA
Mouse anti-ArgI Antibody BD Transduction Laboratories 610708

Table 1. Specific reagents used in this protocol.

References

  1. Gordon, S. Alternative activation of macrophages. Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).
  2. Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance. Curr. Opin. Immunol. 20, 669-675 (2008).
  3. Heinsbroek, S. E., Gordon, S. The role of macrophages in inflammatory bowel diseases. Expert Rev. Mol. Med. 11, e14 (2009).
  4. Collins, S. M., Piche, T., Rampal, P. The putative role of inflammation in the irritable bowel syndrome. Gut. 49, 743-745 (2001).
  5. Maeda, S. Colon cancer-derived factors activate NF-kappaB in myeloid cells via TLR2 to link inflammation and tumorigenesis. Mol. Med. Report. 4, 1083-1088 (2011).
  6. van Rooijen, N., van Kesteren-Hendrikx, E. Clodronate liposomes: perspectives in research and therapeutics. J. Liposome Res. 12, 81-94 (2002).
  7. Hunter, M. M. In vitro-derived alternatively activated macrophages reduce colonic inflammation in mice. Gastroenterology. 138, 1395-1405 (2010).
  8. Weisser, S. B. SHIP-deficient, alternatively activated macrophages protect mice during DSS-induced colitis. J. Leukoc. Biol. 90, 483-492 (2011).
  9. Qualls, J. E., Kaplan, A. M., van Rooijen, N., Cohen, D. A. Suppression of experimental colitis by intestinal mononuclear phagocytes. J. Leukoc. Biol. 80, 802-815 (2006).
  10. Van Rooijen, N., Sanders, A. Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications. J. Immunol. Methods. 174, 83-93 (1994).
  11. Smith, P. Infection with a helminth parasite prevents experimental colitis via a macrophage-mediated mechanism. J. Immunol. 178, 4557-4566 (2007).
  12. van Rooijen, N., Hendrikx, E. Liposomes for specific depletion of macrophages from organs and tissues. Methods Mol. Biol. 605, 189-203 (2010).
  13. Kataoka, K. The roles of vitreal macrophages and circulating leukocytes in retinal neovascularization. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1431-1438 (2011).
  14. Weisser, S. B. Alternative activation of macrophages by IL-4 requires SHIP degradation. Eur. J. Immunol. 41, 1742-1753 (2011).
  15. Cailhier, J. F. Conditional macrophage ablation demonstrates that resident macrophages initiate acute peritoneal inflammation. J. Immunol. 174, 2336-2342 (2005).

Play Video

Cite This Article
Weisser, S. B., van Rooijen, N., Sly, L. M. Depletion and Reconstitution of Macrophages in Mice. J. Vis. Exp. (66), e4105, doi:10.3791/4105 (2012).

View Video