Мы представляем метод сбора спинномозговой жидкости (ликвора), а также создать систему, которая испытывает недостаток CSF в эмбриональном системе желудочков мозга рыбок данио. Это позволяет для дальнейшего рассмотрения CSF состав и требования во время эмбрионального развития головного мозга.
Спинномозговой жидкости (ликвора) представляет собой белок, богат жидкости, содержащейся в желудочки мозга. Он присутствует во время раннего эмбрионального развития позвоночных и сохраняется на протяжении всей жизни. Взрослые CSF, как полагают, чтобы смягчить мозга, удаление отходов, а также осуществлять выделяются молекулы 1,2. В эмбрион взрослого и старше, большинство из CSF производится сосудистое сплетение, ряд весьма васкуляризированной секреторных регионов, расположенных рядом с желудочки головного мозга 3-5. У рыбок данио, сосудистое сплетение полностью сформирован на 144 часов после оплодотворения (HPF) 6. До этого, в обоих рыбок данио и других эмбрионов позвоночных, включая мышь, значительное количество эмбриональных CSF (eCSF) присутствует. Эти данные и исследования на куриных предположить, что нейроэпителия является секреторным на ранней стадии развития и может быть основным источником eCSF до сосудистое сплетение развития 7.
eCSF содержит примерно в три раза больше белка тХан взрослых CSF, предполагая, что она может играть важную роль в процессе развития 8,9. Исследования, проведенные в кур и мышей показали, что выделяемые факторы в eCSF, давление жидкости, или комбинация из них, которые важны для нейрогенеза, экспрессия генов, пролиферацию клеток, и выживание клеток в нейроэпителии 10-20. Proteomic анализы человека, крысы, мыши и куриных eCSF выявили много белков, которые могут быть необходимы для функции CSF. Они включают в себя компоненты внеклеточного матрикса, аполипопротеинов, регулирующие осмотическое давление белков и белков, участвующих в клеточной гибели и пролиферации 21-24. Тем не менее, сложные функции eCSF в значительной степени неизвестны.
Мы разработали метод для удаления eCSF из желудочков мозга у рыбок данио, что позволяет для идентификации компонентов eCSF и для анализа требований eCSF в процессе разработки. Хотя более eCSF могут быть собраны из других позвоночных систем Wго больше эмбрионов, eCSF может быть собрана с самых ранних стадиях развития данио рерио, а под генетическими или экологическими условиями, которые приводят к ненормальной объема желудочков мозга или морфологии. Удаление и сбор eCSF позволяет масс-спектрометрический анализ, исследование функции eCSF, и реинтродукции выберите факторов в желудочки для анализа их функции. Таким образом, доступность ранних эмбрионов данио рерио позволяет детальный анализ функций eCSF в процессе разработки.
Использование этой техники вручную слить eCSF из желудочков мозга у рыбок данио будут полезны для определения потребности в eCSF в процессе разработки. Кроме того, эта методика позволит описание профиля белков eCSF в течение эмбрионального развития. Определение различных белков, в течение ?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была выполнена при поддержке Национального института психического здоровья и Национального научного фонда. Особая благодарность доктору Джен Gutzman, доктор Аманда Дикинсон и другие члены Sive лаборатории за многочисленные полезные обсуждения и конструктивной критики, и Оливье Paugois для экспертов хозяйства рыбы.
Name of Reagent | Company | Catalogue number |
Eppendorf CellTram Oil | Eppendorf | 516 000.025 |
Mineral Oil | Sigma | M8410 |
Tricaine powder | Sigma | A5040 |
Capillary Tubes | FHC Inc. | 30-30-1 |